吳潔，卓沛元，林云嬌,，王露露,，黃佳，林如輝，陶靜，柳維林

電針神庭、百會對腦缺血再灌注大鼠學習記憶能力和LIM激酶1磷酸化的影響①

吳潔1,2，卓沛元2，林云嬌2,3，王露露2,3，黃佳1，林如輝3，陶靜1，柳維林1

目的 探討電針神庭、百會穴對腦缺血再灌注大鼠海馬突觸可塑性和學習記憶能力的影響，及其可能的機制。方法雄性Sprague-Daw ley大鼠32只，隨機分為假手術組、模型組、電針組、非穴組，每組8只。模型組、電針組、非穴組采用線栓法制備大鼠腦缺血120m in再灌注模型。電針組電針神庭、百會14 d，非穴組電針大鼠雙側脅下非經非穴14 d。采用Morris水迷宮檢測學習記憶能力；電鏡觀察海馬區(qū)突觸形態(tài)；Western blotting檢測海馬LIM激酶1及其磷酸化水平。結果 與假手術組比較，模型組大鼠逃避潛伏期明顯增加(t＞6.789,P＜0.01)，穿越平臺次數顯著減少(t=8.695,P＜0.001)，突觸數減少，LIM激酶1總蛋白(t=7.568, P＜0.01)及磷酸化水平下降(t=8.874,P＜0.001)；與模型組比較，電針組大鼠平均逃避潛伏期明顯減少(t＞4.938,P＜0.01)，穿越平臺次數顯著增多(t=-7.891,P＜0.001)，突觸數量增多，LIM激酶1總蛋白(t=-6.473,P＜0.01)及磷酸化水平上升(t=-6.579,P＜0.01)。非穴組各項指標與模型組比較無顯著性差異(P＞0.05)。結論 電針神庭、百會穴可以改善腦缺血再灌注大鼠學習記憶能力，可能與LIM激酶1磷酸化水平升高進而改善突觸可塑性有關。

腦缺血再灌注；電針；學習記憶；突觸可塑性；LIM激酶1；磷酸化；大鼠

[本文著錄格式] 吳潔，卓沛元，林云嬌，等.電針神庭、百會對腦缺血再灌注大鼠學習記憶能力和LIM激酶1磷酸化的影響[J].中國康復理論與實踐,2016,22(11):1246-1251.

CITEDAS:Wu J,Zhuo PY,Lin YJ,etal.Effectsof electroacupuncture atShenting and Baihuion ability of learning andmemory,and LIM-domain containing protein kinase 1 phosphorylation in ratswith cerebral ischemia-reperfusion[J].Zhongguo Kangfu Lilun Yu Shijian, 2016,22(11):1246-1251.

據世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，全球每年有1500萬人罹患腦卒中，其中500萬人死亡，500萬人永久殘疾，高達65%患者伴發(fā)認知障礙[1-2]。學習記憶障礙是腦卒中后認知障礙的核心癥狀[3-4]。急性缺血性腦卒中后3個月認知障礙患病率為35%，3年后仍有24.4%患者遺留認知缺損，且每年以8%的速度增長[5]。針刺療法被認為是腦卒中有效的治療方法之一，在預防復發(fā)和降低腦卒中致殘率方面具有重要作用[6-7]。

突觸可塑性是學習記憶的物質基礎[8-9]。海馬是腦缺血的敏感易損區(qū)，而CA1區(qū)又是學習記憶的主要神經投射區(qū)[10]。慢性腦缺血缺氧可造成樹突棘大量脫落及結構改變，從而改變突觸傳遞功能，導致學習、記憶及認知缺陷[11]。突觸可塑性表現(xiàn)為突觸結合的可塑性和突觸傳遞的可塑性，其功能主要表現(xiàn)為長時程增強 (long-term potentiation,LTP)和 長 時 程 抑 制(long-term depression,LTD)現(xiàn)象，這被認為是學習記憶的細胞生物學基礎[12]。

LIM激酶1(LIM-domain containing protein kinase 1,LIMK1)蛋白能夠通過磷酸化途徑調控細胞骨架形成，維持神經系統(tǒng)的生長發(fā)育和功能[13]。LIMK1通過抑制肌動蛋白解聚因子/絲切蛋白，使肌動蛋白聚合，促進樹突棘形成和維持樹突棘形態(tài)[14]。在神經細胞中，LIMK1在調控生長錐運動性和軸突生長中發(fā)揮重要作用[15]。在培養(yǎng)的海馬神經元中，過表達LIMK1蛋白會加速軸突生長發(fā)育，下調LIMK1蛋白水平則具有相反的作用[16]。

我們的前期研究顯示，電針刺激神庭、百會穴能夠改善腦的超微結構，顯著改善大鼠學習記憶能力[17]。本研究觀察海馬區(qū)突觸微觀形態(tài)變化及LIMK1總蛋白、磷酸化蛋白表達水平，以探討可能的治療機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組

32只清潔級健康雄性Sprague-Daw ley大鼠(批號：2007000638342)，體質量(250±30)g，由上海斯萊克實驗動物責任有限公司提供，生產許可證號SCXK(滬)2014-0002。由福建中醫(yī)藥大學實驗動物中心喂養(yǎng)，許可證號SYXK(閩)2014-001。大鼠分籠飼養(yǎng)，每籠5只。適應性喂養(yǎng)1周后，用隨機數字表法將大鼠編號，分為假手術組、模型組、電針組和非穴組，每組8只。實驗過程均嚴格按照國際動物保護和使用指南的規(guī)定實施。

1.2 主要試劑和儀器

線栓：廣州佳靈生物技術有限公司。LIMK1一抗、Anti-LIM kinase 2(phospho T505)+LIMK1(phospho T508)一抗：ABCAM公司。華佗牌電針治療儀：蘇州醫(yī)療用品廠有限公司。Morris水迷宮：中國醫(yī)學科學院藥物研究所。7.0 T小動物磁共振成像分析系統(tǒng)(MiniMR-60 MRI system)：德國 BRUKER公司。H7650型透射電鏡、SIS 400萬像素電鏡CCD相機：日立公司。

1.3 模型制備

術前所有動物均禁食12 h。參考Longa方法[19]，行左側大腦中動脈栓塞(m iddle cerebral artery occlusion,MCAO)。大鼠10%水合氯醛3m l/kg腹腔注射麻醉，分離并暴露左側頸外動脈、頸總動脈和頸內動脈；結扎頸外動脈遠心端，用動脈夾阻斷左側頸總動脈、頸內動脈血流，用顯微剪在距離頸外動脈分叉處1.0mm處剪一小口，將準備好的線栓插入頸外動脈，剪斷頸外動脈，使頸外動脈和頸內動脈之間的夾角增大并趨近一條直線，松開頸內動脈夾，線栓從頸外動脈與頸內動脈分叉處插入約18～22mm，有少許阻力為止，造成局灶性腦缺血；暴露傷口，用生理鹽水清洗濕潤，120m in后輕輕抽出線栓，用電凝筆燒灼頸外斷端。檢查、清洗手術創(chuàng)口，縫合皮膚。術中注意保暖，使動物肛溫維持在(37±1)℃，保持室溫25℃左右，直至大鼠重新恢復活動。

假手術組只分離頸外動脈、頸總動脈和頸內動

脈，不結扎和插線栓。

術后，動物白熾燈照射取暖。動物蘇醒后觀察其體態(tài)及行為，進行神經行為學評分；造模24 h后行MRI掃描，判斷模型是否成功。

1.3.1 神經行為學評分

大鼠蘇醒后，按Longa評分標準[19]，對大鼠的神經功能缺損程度進行評估。0分，無神經功能缺損體征；1分，不能伸展對側前爪；2分，向偏癱側轉圈；3分，行走時向偏癱側傾倒；4分，不能自發(fā)行走，意識喪失。評分為0分和4分的大鼠予以剔除。該評估由一名對本研究不知情的觀察者完成。

1.3.2 MRI

造模24 h后，利用小動物磁共振成像分析系統(tǒng)采用RARE序列進行T2W I掃描。掃描參數：TR/TE 4200/35ms，視野32×32mm，矩陣256×256，層數21，層厚1.0mm。腦部未觀察到高亮區(qū)域的大鼠予以剔除；梗死面積＞20%者納入實驗。

1.4 干預方法

假手術組和模型組手術后回籠飼養(yǎng)，不予任何治療。

電針組于手術后第1天開始，參考《實驗針灸學》[20]取大鼠神庭(前正中線上，在額頂骨縫交界線前方處，向上斜刺2mm)和百會穴(頂骨正中，向后斜刺2mm)，使用華佗牌30號0.5寸毫針，接G6805電針儀，疏密波，頻率2 Hz，強度2mA。每次30m in，每天同一時間治療1次，直至動物被處死，共14 d。

非穴組取大鼠雙側脅下非經非穴(低于脅部，高于髂嵴10～15mm[21])，使用華佗牌30號0.5寸毫針，接G6805電針儀，治療參數和療程同電針組。

1.5 Morris水迷宮測試

Morris水迷宮為直徑150 cm、高60 cm的圓形水池，水深30 cm，水溫(26±2)℃。在第三象限中央放置平臺，直徑12 cm，低于水面1～2 cm。四周池壁表面光滑整潔，光線四周對稱，水池周圍參照物從實驗開始到結束位置保持不變。

1.5.1 定位航行實驗

從術后第10天開始，共進行4 d。實驗開始前，將大鼠放置于水池中自由游泳2m in，以適應環(huán)境和人的抓握等相關操作。而后將大鼠按逆時針方向依次由第1象限、第2象限、第3象限、第4象限入水點順序面向池壁放入水中。若大鼠在90 s內找到平臺，并且在平臺上停留3 s以上，認為大鼠找到平臺，由計算機記錄大鼠找到平臺的時間，即為逃避潛伏期。如果大鼠90 s內未找平臺，則將大鼠拖曳至平臺上，并在平臺上停留10 s，此時潛伏期計為90 s。

1.5.2 空間探索實驗

定位航行實驗結束后撤掉平臺，將大鼠面向池壁放入水中，記錄在90 s內大鼠穿過原放置平臺區(qū)域的次數。

1.6 檢測方法

1.6.1 透射電鏡觀察

各組大鼠分別于干預14 d后，快速斷頭取腦，取病變側海馬，切成約1×1×1mm的小塊放入4%戊二醛中固定，再經3%戊二醛-1.5%多聚甲醛4℃固定4 h，1%鋨酸-1.5%亞鐵氰化鉀固定2 h，PBS漂洗。酒精-丙酮梯度脫水，環(huán)氧樹脂618包埋劑包埋。超薄切片，厚80 nm，醋酸鈾、檸檬酸鉛染色；透射電鏡80 kV下觀察突觸形態(tài)結構，電鏡CCD相機攝影。

1.6.2 Western blotting

海馬組織-80℃冰箱保存。取海馬組織100mg，加入裂解液1m l和絲氨酸蛋白酶抑制劑PMSF 10μl，研磨均勻后靜置30m in，取上清；4℃14 000 r/m in離心5m in，取上清，BCA測定蛋白濃度。樣品蛋白變性后，10%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl-polyacryl gradient gel electrophoresis, SDS-PAGE)，轉移到聚偏二氟乙烯(polyvinylidene Fluoride,PVDF)膜，封閉2 h后，分別加LIMK1一抗(1∶1000)、Anti-LIM kinase 2(phospho T505)+LIMK1 (phospho T508)一抗(1∶1000)、β-actin一抗(1∶1000)孵育，4℃過夜；TBST洗膜，辣根過氧化物酶標記的二抗(1∶500)室溫孵育1 h。將PVDF膜放于圖像掃描儀上，避光配置顯色液并覆PVDF膜1 min。Image-lab圖像分析系統(tǒng)分析。以β-actin為內參，計算目的蛋白相對灰度。

1.7 統(tǒng)計學分析

應用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析處理。數據采用(±s)表示，多組間比較采用單因素方差分析，方差齊則兩兩比較用LSD法，方差不齊則用Games-Howell法。顯著性水平α=0.05。

2 結果

2.1 Morris水迷宮

與假手術組比較，模型組大鼠平均逃避潛伏期明顯增加(P＜0.01)，穿越平臺次數顯著減少(P＜0.001)。與模型組比較，電針組大鼠平均逃避潛伏期明顯減少

(P＜0.01)，穿越平臺次數明顯增多(P＜0.01)。非穴組與模型組無顯著性差異(P＞0.05)。與電針組比較，非穴組平均逃避潛伏期增加(P＜0.01)，穿越平臺次數減少(P＜0.01)。見表1、表2。

表1 各組定位航行實驗逃避潛伏期比較(s)

2.2 海馬突觸

假手術組左側海馬突觸數量較多，結構完整。模型組突觸數量減少，分布不均，突觸間隙增寬。電針組突觸結構較完整、清晰，突觸間隙減小。非穴組突觸結構有所溶解，數量減少。見圖1。

圖1 各組海馬神經元突觸超微結構(透射電鏡,50000×)

2.3 Western blotting

與假手術組比較，模型組LIMK1總蛋白(T-LIMK1)及磷酸化(p-LIMK1)水平顯著下降(P＜0.001)；與模型組比較，電針組T-LIMK1及p-LIMK1水平明顯上升(P＜0.01)，非穴組無顯著性差異(P＞0.05)；與電針組比較，非穴組T-LIMK1及p-LIMK1水平降低(P＜0.05)。見表3。

表2 各組空間探索實驗穿越平臺次數比較

表3 各組LIMK 1總蛋白及磷酸化水平比較(相對灰度)

3 討論

中醫(yī)學古籍中鮮見中風后認知障礙病名的記載。通過其主要癥狀，我們將其歸為“健忘”和“呆證”，其中認知障礙輕者為健忘，重者為癡呆。健忘、癡呆病位在腦，腦脈痹阻、腦髓失養(yǎng)導致腦髓損傷是缺血性腦卒中發(fā)病的主要病機。督脈所屬穴位大部分可以治療腦部疾病，故有“病變在腦，首取督脈”之說。神庭、百會穴均屬督脈，是“三陽五會”的穴位，具有疏郁安神、醒腦開竅、益智生慧等功用，可用以治療腦卒中后的學習記憶功能障礙。

經穴與臟腑密切相關，是溝通經絡和臨床的紐帶。針刺非穴時發(fā)生的變化多是機體應激反應，治療作用不大，提示經穴有特異性效應。倪麗偉等研究表明，針刺能有效改善腦梗死急性期神經功能缺損，醒腦開竅組針刺效應明顯優(yōu)于非經非穴組[21]。Liu等針刺SAMP8小鼠模型，發(fā)現(xiàn)與非經非穴組相比，針刺組皮質P53蛋白水平明顯上升，提示針刺特定穴位能提高阿爾海默茨病后學習記憶能力[22]。本研究顯示，電針神庭、百會穴可明顯改善MCAO大鼠學習記憶功能，而電針非經非穴則無此作用。

人腦存在復雜的學習記憶系統(tǒng)。在與學習記憶相關的腦區(qū)中，海馬的作用特別突出。突觸可塑性被認為是學習記憶形成的重要基礎[23]。研究表明，電針可以有效促進海馬樹突棘結構和功能重塑，從而促進腦缺血后學習記憶功能恢復[24]。Ueno等指出，電針治療可使腦卒中后突觸形態(tài)得到一定程度修復，從而阻止海馬神經元樹突棘退變，促進突觸重建，改善腦功能[25]。

LIMK是一種絲氨酸/蘇氨酸和洛氨酸雙重活性蛋白激酶，它的亞型LIMK1主要分布在腦、脊髓、肝等組織。LIMK1對多種細胞的形態(tài)學有重要影響，尤其在調節(jié)神經元形態(tài)和神經突觸生長方面的作用更為顯著。有研究表明，LIMK1基因敲除小鼠神經元減少、生長錐缺乏和樹突形態(tài)異常，導致突觸結構和樹突棘發(fā)育異常，且這些小鼠都有不同程度認知障礙[26]。在體外培養(yǎng)的海馬錐體神經元中，LIMK1表達可誘導生長錐形成及神經突生長，反映LIMK1對神經元生理功能精確時空調節(jié)的特點[27-28]。有研究指出，缺氧通過抑制腸上皮細胞LIMK1磷酸化而引起cofilin磷酸化水平降低及活性增加，導致細胞骨架F-actin解聚，破壞F-actin/G-actin動態(tài)平衡[29]。腦卒中后LIMK1磷酸化水平下降，將影響突觸形態(tài)及學習記憶功能。

綜上所述，本研究證實，電針刺激神庭、百會穴可改善腦缺血再灌注大鼠海馬突觸的微觀形態(tài)結構，具有神經保護作用。其機制可能是通過上調LIMK1磷酸化水平，促進突觸囊泡數量增加，減小突觸間隙，從而緩解腦缺血再灌注損傷，改善學習記憶功能。但具體機制還有待進一步研究。

[1]Zhang S,Zhang Y,LiH,etal.Antioxidantand anti-excitotoxic-

ity effect of Gualou Guizhi decoction on cerebral ischem ia/reperfusion injury in rats[J].Exp Ther Med,2015,9(6): 2121-2126.

[2]Sun H,Zou X,Liu L.Epidem iological factors of stroke:a survey of the current status in China[J].JStroke,2013,15(2): 109-114.

[3]LiW,Huang R,Shetty RA,etal.Transient focal cerebral ischem ia induces long-term cognitive function deficit in an experimental ischem ic stroke model[J].Neurobiol Dis,2013,59: 18-25.

[4]Dacosta-Aguayo R,Grana M,Fernandez-Andujar M,et al. Structural integrity of the contralesional hemisphere predicts cognitive impairment in ischemic stroke at three months[J]. PLoSOne,2014,9(1):e86119.

[5]Liu F,Li ZM,Jiang YJ,et al.A meta-analysis of acupuncture use in the treatment of cognitive impairment after stroke[J].J Altern ComplementMed,2014,20(7):535-544.

[6]蔡榮林,程紅亮,周婷,等.電針對血管性認知障礙大鼠學習記憶與海馬內血管內皮生長因子及其受體1、2mRNA表達的影響[J].針刺研究,2015,40(1):25-29.

[7]李丹,王中鵬,周培娟.兩種針刺時程對腦白質疏松輕度認知障礙患者的影響[J].中醫(yī)藥學報,2015,43(3):69-72.

[8]Schacher S,Hu JY.The less things change,themore they are different:contributions of long-term synaptic plasticity and homeostasis tomemory[J].Learn Mem,2014,21(3):128-134.

[9]He X,Yan T,Chen R,et al.Acute effects of electro-acupuncture(EA)on hippocampal long term potentiation(LTP)of perforantpath-dentate gyrusgranule cells synapse related tomemory[J].AcupunctElectrother Res,2012,37(2-3):89-101.

[10]Wang X,Xing A,Xu C,etal.Cerebrovascular hypoperfusion induces spatialmemory impairment,synaptic changes,and amyloid-beta oligomerization in rats[J].JAlzheimers Dis,2010, 21(3):813-822.

[11]Bliss TV,Lomo T.Long-lasting potentiation of synaptic transm ission in the dentate area of the anaesthetized rabbit following stimulation of the perforant path[J].JPhysiol,1973,232 (2):331-356.

[12]Kailainathan S,Piers TM,Yi JH,etal.Activation of a synapse weakening pathway by human Val66 but not Met66 pro-brain-derived neurotrophic factor(proBDNF)[J].PharmacolRes,2016,104:97-107.

[13]Foletta VC,Moussi N,Sarmiere PD,et al.LIM kinase 1,a key regulator of actin dynamics,isw idely expressed in embryonic and adult tissues[J].Exp CellRes,2004,294(2):392-405.

[14]RomarowskiA,Battistone MA,La Spina FA,et al.PKA-dependent phosphorylation of LIMK1 and Cofilin is essential for mouse sperm acrosomal exocytosis[J].Dev Biol,2015,405 (2):237-249.

[15]Endo M,Ohashi K,Sasaki Y,et al.Control of grow th cone motility and morphology by LIM kinase and Slingshot via phosphorylation and dephosphorylation of cofilin[J].JNeurosci,2003,23(7):2527-2537.

[16]Tursun B,Schluter A,Peters MA,et al.The ubiquitin ligase Rnf6 regulates local LIM kinase 1 levels in axonal grow th cones[J].Genes Dev,2005,19(19):2307-2319.

[17]林如輝,俞坤強,李曉潔,等.電針改善局灶性腦缺血大鼠學習記憶障礙的腦影像結構和超微結構研究[J].康復學報, 2015,25(1):34-37,43.

[18]Zou R,Wu Z,Cui S.Electroacupuncture pretreatmentattenuates blood brain barrier disruption follow ing cerebral ischem ia/ reperfusion[J].MolMed Rep,2015,12(2):2027-2034.

[19]Longa EZ,Weinstein PR,Carlson S,et al.Reversiblem iddle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats[J]. Stroke,1989,20(1):84-91.

[20]李忠仁.實驗針灸學[M].北京:中國中醫(yī)藥出版社,2003: 325-329.

[21]倪麗偉,申鵬飛,張智龍,等.“醒腦開竅”與非經非穴針刺對腦梗塞急性期神經功能影響的多中心隨機對照研究[J].中華中醫(yī)藥雜志,2011,26(5):894-897.

[22]Liu JF,Zhang Y,Sun JP,et al.Effect of acupuncture on the p53 protein expression of m ice with A lzheimer's disease[J]. Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi,2013,33(10): 1367-1371.

[23]Shirao T,Gonzalez-Billault C.Actin filaments and m icrotubules in dendritic spines[J].J Neurochem,2013,126(2): 155-164.

[24]Juan WS,Huang SY,Chang CC,et al.Melatonin improves neuroplasticity by upregulating the grow th-associated protein-43(GAP-43)and NMDAR postsynaptic density-95 (PSD-95)proteins in cultured neurons exposed to glutamate excitotoxicity and in ratssubjected to transient focal cerebral ischemia even during a long-term recovery period[J].JPineal Res, 2014,56(2):213-223.

[25]Ueno Y,Chopp M,Zhang L,etal.Axonaloutgrow th and dendritic plasticity in the cortical peri-infarctarea after experimentalstroke[J].Stroke,2012,43(8):2221-2228.

[26]Lindstr?m NO,Neves C,Mclntosh R,et al.Tissue specific characterisation of Lim-kinase 1 expression duringmouse embryogenesis[J].Gene Expr Patterns,2011,11(3-4):221-232.

[27]Rosso S,BollatiF,BisbalM,etal.LIMK1 regulatesGolgidynamics,traffic of Golgi-derived vesicles,and processextension in primary cultured neuron[J].Mol Biol Cell,2004,15(7): 3433-3449.

[28]Coolen M,Bally-Cuif L.MicroRNAs in brain development and physiology[J].CurrOpin Neurobiol,2009,19(5):461-470.

[29]何雯.缺氧對LIMK1介導的cofilin磷酸化的影響及其在腸上皮屏障功能損害中的作用研究[D].重慶:第三軍醫(yī)大學, 2015.

Effectsof Electroacupuncture at Shenting and Baihuion Ability of Learning and Memory,and LIM-domain Containing Protein K inase 1 Phosphorylation in Ratswith Cerebral Ischem ia-reperfusion

WU Jie1,2,ZHUO Pei-yuan2,LINYun-jiao2,3,WANG Lu-lu2,3,HUANG Jia1,LINRu-hui3,TAO Jing1,LIUWei-lin1
1.College of Rehabilitation Medicine,Fujian University of Traditional Chinese Medicine,Fuzhou,Fujian 350122, China;2.Fujian Key Laboratory of Rehabilitation Technology,Fuzhou,Fujian 350122,China;3.Rehabilitation of Fujian Province Industry Research Institute,Fuzhou,Fujian 350122,China

Objective To investigate the effectof electroacupuncture(EA)at Shenting(DU24)and Baihui(DU20)acupoints on hippocampal synaptic plasticity and learning andmemory function,and its possiblemechanism in ratswith cerebral ischem ia-reperfusion.Methods Thirty-twomaleadult Sprague-Daw ley ratswere random ly divided into sham group(n=8),modelgroup(n=8),electroacupuncture(EA) group(n=8)and non-acupointgroup(n=8).Themodel group,EA group and non-acupointgroup were performed with leftm iddle cerebral artery occlusion(MCAO).The EA group received electroacupuncture at Shenting and Baihui,while the non-acupointgroup received electroacupuncture at two fixed non-acupoints from bilateral ribs,for fourteen days.Then they were tested with MorrisWater Maze test,and their synaptic structure of hippocampalneuronswasobserved with transm ission electronm icroscope.The levelof total LIM-domain containing protein kinase 1(T-LIMK1)and LIM-domain containing protein kinase 1 phosphorylation(p-LIMK1)were detected withWestern blotting.Results Compared with the sham group,the latency increased(t＞6.789,P＜0.01)and the frequence crossing platform decreased(t= 8.695,P＜0.001)in themodelgroup,while the numberof synapse in hippocampalneurons decreased,and the levelof T-LIMK1(t=7.568,P＜0.01)and p-LIMK1(t=8.874,P＜0.001)decreased.Compared with themodel group,the latency decreased(t＞4.938,P＜0.01)and the frequence crossing platform increased(t=-7.891,P＜0.001)in the EA group,while the number of synapses increased,and the level of T-LIMK1(t=-6.473,P＜0.01)and p-LIMK1(t=-6.579,P＜0.01)increased.Therewas no significant difference between the the non-acupointgroup and themodelgroup in all the indices(P＞0.05).Conclusion Electroacupuncture at Shenting and Baihuican improve the ability of learning andmemory in ratswith cerebral ischem ia-reperfusion,whichmay relatewith the increase of LIMK1 phosphorylation and hippo-

cerebral ischemia-reperfusion;electroacupuncture;learning andmemory;synaptic plasticity;LIM-domain containing protein kinase 1;phosphorylation;rats

10.3969/j.issn.1006-9771.2016.11.002

R743.3

A

1006-9771(2016)11-1246-06

2016-05-11

2016-08-26)

1.國家自然科學基金項目(No.81403450)；2.福建省自然科學基金項目(No.2016J01382)。

1.福建中醫(yī)藥大學康復醫(yī)學院，福建福州市350122；2.福建康復技術重點實驗室，福建福州市350122；3.福建省康復產業(yè)研究院，福建福州市350122。作者簡介：吳潔(1989-)，女，漢族，江西萬年縣人，碩士研究生，主要研究方向：神經康復與認知科學研究。通訊作者：柳維林(1985-)，男，漢族，湖南衡東縣人，講師，主要研究方向：神經康復與認知科學研究。E-mail:liu_0366@sina.com。

campalsynaptic plasticity.