胡文龍，張婷婷，劉仲倫，任 虹

維生素D受體基因位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與梅毒易感性相關(guān)研究

胡文龍，張婷婷，劉仲倫，任 虹

目的探討維生素D受體（VDR）基因Fox I、Bsm I、Apa I和Tap I位點(diǎn)多態(tài)性與梅毒易感性之間是否存在關(guān)聯(lián)。方法應(yīng)用質(zhì)譜分析的方法檢測(cè)106例梅毒患者及134名健康對(duì)照者VDR基因Fox I、Bsm I、Apa I和Tap I位點(diǎn)基因型及等位基因分布頻率。結(jié)果病例組和對(duì)照組間VDR基因Fox I、Bsm I、Apa I和Tap I 4個(gè)基因位點(diǎn)基因型分布無(wú)明顯差異（Fox I: P=0.922；Bsm I: P=0.460；Apa I: P=0.287；Tap I: P=0.093）；兩組間等位基因分布也均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（Fox I C vs. T: P=0.742；Bsm I C vs. T: P=0.345；Apa I G vs. T: P=0.113；Tap I A vs. G: P=0.345）；兩組間在隱性遺傳模型和顯性模型下比較也未發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（Fox I CC vs. CT+TT: P=0.687; Fox I TT vs. CT+CC: P=0.905；Bsm I CC vs. CT+TT: P=0. 336; Apa I TT vs. GT+GG: P=0.438; Apa I GG vs. GT+TT: P=0.123；Tap I AA vs. AG+GG: P=0.204）。結(jié)論VDR基因Fox I、Bsm I、Apa I和Tap I位點(diǎn)多態(tài)性與梅毒易感性之間無(wú)顯著相關(guān)。

梅毒；VDR基因；單核酸多態(tài)性；遺傳易感性

胡文龍

梅毒是由蒼白螺旋體感染所致的性傳播疾病，近年來(lái)我國(guó)梅毒發(fā)病呈明顯上升趨勢(shì)[1,2]。梅毒的免疫發(fā)病機(jī)制尚不明確，人體感染梅毒螺旋體后，體內(nèi)發(fā)生一系列復(fù)雜的細(xì)胞免疫和體液免疫改變，但不同的患者在臨床表現(xiàn)、疾病進(jìn)程及轉(zhuǎn)歸上有較大差異，說(shuō)明人體對(duì)梅毒感染存在遺傳易感性。維生素D受體（vitamin D receptor，VDR）基因位于第12號(hào)染色體長(zhǎng)臂，是維生素D發(fā)揮作用的效應(yīng)基因，具有重要的生理作用。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，VDR基因多態(tài)性與多種感染性疾病的發(fā)生密切相關(guān)，本研究初步探討VDR基因Fox I、Bsm I、Apa I和Tap I位點(diǎn)多態(tài)性與梅毒易感性之間的關(guān)系。

1　對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象

1.1.1患者組選自2013年 7月—2014年10月在我科門(mén)診確診的106例梅毒患者，甲苯胺紅未加熱血清試驗(yàn)（TRUST）和梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)（TPPA）均為陽(yáng)性，TRUST滴度1:1～1:128；人免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）抗體檢測(cè)陰性；通過(guò)詢(xún)問(wèn)病史排除與梅毒無(wú)關(guān)的其他疾??；所有個(gè)體均無(wú)血緣關(guān)系。

1.1.2對(duì)照組 隨機(jī)選取我科門(mén)診健康體檢者134名，TRUST、TPPA及HIV檢測(cè)均為陰性；通過(guò)詢(xún)問(wèn)病史排除其他疾病；所有個(gè)體均無(wú)血緣關(guān)系。

1.2方法

1.2.1基因組DNA提取采用基因組 DNA純化試劑盒（天根生化科技公司，北京），按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。所得DNA樣本 -80 ℃保存。

1.2.2VDR基因檢測(cè)Fox I、Bsm I、Apa I和Tap I位點(diǎn)多態(tài)性檢測(cè) PCR擴(kuò)增引物見(jiàn)表1，引物由深圳華大基因公司合成。利用MassARRAY system（Agena公司，美國(guó)）對(duì)VDR基因Fox I（rs2228570）、Bsm I（rs1544410）、Apa I（rs7975232）和Tap I（rs731236）位點(diǎn)進(jìn)行基因分型。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS17.0軟件對(duì)不同組別基因型及等位基因頻率進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，通過(guò)計(jì)算Hardy-Weinberg平衡判斷樣本的代表性。

2　結(jié)果

2.1VDR Fox I基因多態(tài)性與梅毒易感性分析

患者組與對(duì)照組間基因型分布無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.162，P=0.922）；患者組C、T等位基因頻率分別為0.590和0.410，對(duì)照組C、T等位基因頻率分別為0.604和0.396，兩組間等位基因分布無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=0.109，P=0.742)；在隱性遺傳模型和顯性遺傳模型下，患者組和對(duì)照組均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（CC vs. CT+TT：χ2=0.162，P=0.687；TT vs. CT+CC：χ2=0.014，P=0.905）。對(duì)照組基因型分布符合Hard-Weinberg平衡（P=0.152）(表2)。

2.2VDR Bsm I基因多態(tài)性與梅毒易感性分析

病例組與對(duì)照組組間基因型分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.460）；病例組C、T等位基因頻率分別為0.972和0.028，對(duì)照組C、T等位基因頻率分別為0.955和0.045，兩組間等位基因頻率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=0.890，P=0.345)；在顯性遺傳模型下，病例組和對(duì)照組均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（CC vs. CT+TT：χ2=0.926，P=0. 336）。對(duì)照組基因型分布符合Hard-Weinberg平衡（P=0.587）（表2）。

表1　擴(kuò)增引物序列

表2　患者組、對(duì)照組VDR基因型及等位基因分布頻率比較

2.3VDR Apa I基因多態(tài)性與梅毒易感性分析

病例組與對(duì)照組組間基因型分布無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.494，P=0.287)；病例組G、T等位基因頻率分別為0. 821和0.179，對(duì)照組G、T等位基因頻率分別為0.761和0.239，兩組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=2.509，P=0.113)；在隱性遺傳模型和顯性遺傳模型下，病例組和對(duì)照組均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（TT vs. GT+GG: χ2=0.601，P=0.438；GG vs. GT+TT：χ2=2.384，P=0.123）。對(duì)照組基因型分布符合Hard-Weinberg平衡（P=0.865）(表2)。

2.4VDR Tap I基因多態(tài)性與梅毒易感性分析

病例組與對(duì)照組組間基因型分布無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.093）；病例組A、G等位基因頻率分別為0.972和0.028，對(duì)照組A、G等位基因頻率分別為0.955和0.045，兩組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（χ2=0.890，P=0.345）；在隱性遺傳模型下，病例組和對(duì)照組均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（AA vs. AG+GG：χ2=1.615，P=0.204）。對(duì)照組基因型分布符合Hard-Weinberg平衡（P=0.587）（表2）。

3　討論

VDR其配體為維生素D，維生素D作為一種甾體激素，在轉(zhuǎn)化為1,25（OH）2D3后發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用[3,4]。VDR可以直接影響干擾素（IFN）-γ的分泌，進(jìn)而抑制Th1細(xì)胞的功能[5]，促進(jìn)白細(xì)胞介素（IL-4）的分泌，進(jìn)而促進(jìn)Th2細(xì)胞的分化和功能，還可以誘導(dǎo)C/EBP蛋白的表達(dá)，進(jìn)而抑制Th17 細(xì)胞的功能[6]。Bruce等[7]研究發(fā)現(xiàn)VDR基因敲除后CD4+T淋巴細(xì)胞更易分化為T(mén)h17效應(yīng)細(xì)胞，且分泌IFN-γ和IL-17的量增加近2倍。此外，1,25（OH）2D3可以產(chǎn)生誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞（Treg），而調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞通過(guò)分泌IL-10和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TFG）-β等抑制效應(yīng)性T淋巴細(xì)胞的功能。Yu和Cantorna[8]研究發(fā)現(xiàn)VDR可導(dǎo)致NKT細(xì)胞發(fā)育終止，引起胸腺及外周NKT細(xì)胞的缺失。人類(lèi)VDR基因多態(tài)性位點(diǎn)主要位于第2外顯子、第8內(nèi)含子和第9外顯子上，分別為Fox I（rs2228570）、Bsm I（rs1544410）、Apa I（rs7975232）和Tap I（rs731236）。Fox I位點(diǎn)多態(tài)性位于第2外顯子區(qū)第1個(gè)起始密碼子上，T→C變異導(dǎo)致翻譯產(chǎn)生兩種不同的蛋白而引起不同的生物學(xué)功能。Tap I位點(diǎn)位于第9外顯子區(qū)，T→C變異為同義突變，并不改變氨基酸的順序。Bsm I和Apa I均位于第8內(nèi)含子區(qū)。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，VDR基因多態(tài)性與眾多感染性疾病相關(guān)。Huang等[9]和Xu等[10]通過(guò)薈萃分析的方法均發(fā)現(xiàn)Fox I多態(tài)性與結(jié)核桿菌易感性有關(guān)。Wu等[11]研究發(fā)現(xiàn)VDR基因多態(tài)性與丙型肝炎病毒（hepatitisc，HCV）易感性有關(guān)，而Cusato等[12]發(fā)現(xiàn)VDR基因多態(tài)性可影響部分亞型HCV感染治療的療效。Torres等[13]研究發(fā)現(xiàn)VDR基因多態(tài)性與HIV易感性有關(guān)，并且可影響獲得性人免疫缺陷綜合征（aequired immunodeficiency syndrome，AIDS）的發(fā)展進(jìn)程。

梅毒是由梅毒螺旋體感染引起的慢性性傳播疾病，宿主的免疫狀態(tài)與梅毒的歸轉(zhuǎn)密切相關(guān)[14]。梅毒的免疫反應(yīng)主要包括體液免疫和細(xì)胞免疫，體液免疫的保護(hù)作用較弱，由T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫對(duì)梅毒的感染、轉(zhuǎn)歸和預(yù)后產(chǎn)生有重要的影響[15]。目前研究發(fā)現(xiàn) T 淋巴細(xì)胞亞群主要包括 Th1、Th2、Th17和Treg 等，其分泌的多種細(xì)胞因子具有特定的免疫調(diào)節(jié)和殺傷功能，在機(jī)體抗梅毒螺旋體感染的過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，有多項(xiàng)研究表明梅毒的發(fā)病與T淋巴細(xì)胞亞群失衡密切相關(guān)[16,17]。

目前對(duì)梅毒的易感基因報(bào)道較少，鑒于梅毒的發(fā)病機(jī)制和VDR基因的生物學(xué)功能以及VDR基因在其他感染性疾病易感性中的作用，筆者首次探索了VDR 基因多態(tài)性與梅毒易感性之間的關(guān)系。本研究發(fā)現(xiàn)Fox I、Bsm I、Apa I和Tap I 4個(gè)基因位點(diǎn)基因型分布在患者組和對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，進(jìn)一步做了等位基因及顯性遺傳模型和隱性遺傳模型分析，均未發(fā)現(xiàn)兩組間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。既往研究發(fā)現(xiàn)，VDR基因多態(tài)性可通過(guò)影響樹(shù)突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的功能與部分感染性疾病易感性有關(guān)[13]，而本次研究提示VDR基因Fox I、Bsm I、Apa I和Tap I 4個(gè)位點(diǎn)多態(tài)性與梅毒易感性無(wú)相關(guān)性，其原因可能為梅毒螺旋體感染的免疫機(jī)制與其他感染性疾病之間存在差異，VDR在梅毒螺旋體感染中的作用特異性可能不強(qiáng)。但是，由于本次研究納入樣本較少，可能使結(jié)果產(chǎn)生偏移，還有待擴(kuò)大樣本進(jìn)一步研究。

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（本文編輯耿建麗）

Association of vitamin D receptor gene single nucleotide polymorphism with human susceptibility to syphilis

HU Wen-long，ZHANG Ting-ting，LIU Zhong-lun，et al
Department of Dermatology, Xuzhou Medical University Affiliated Lianyungang Municipal Frist People Hospital, Lianyungang 222002, China

Objective To explore the association of vitamin D receptor (VDR) gene Fox I, Bsm I, Apa I and Tap I single nucleotide polymorphism with human susceptibility to syphilis. Methods The study recruited 106 patients with syphilis and 134 health volunteers as the normal control. The Fox I, Bsm I, Apa I and Tap I single nucleotide polymorphism of VDR gene were detected in all subjects by MassArray system. Results No significant difference was found in genotypic frequencies of the 4 SNPs (Fox I, Bsm I, Apa I and Tap I) between the two groups (Fox I: P=0.922; Bsm I: P=0.460; Apa I: P=0.287; Tap I: P=0.093). The allelic frequencies of these SNPs also showed no significant difference between the two groups (Fox I C vs. T: P=0.742; Bsm I C vs. T: P=0.345; Apa I G vs. T: P=0.113; Tap I A vs. G: P=0.345). Furthermore, these 4 SNPs in the recessive model or dominant model showed no significant difference between the two groups (Fox I CC vs. CT+TT: P=0.687; Fox I TT vs. CT+CC: P=0.905; Bsm I CC vs. CT+TT: P=0. 336; Apa I TT vs. GT+GG: P=0.438; Apa I GG vs. GT+TT: P=0.123; Tap I AA vs. AG+GG: P=0.204). Conclusion The Fox I, Bsm I, Apa I and Tap I single nucleotide polymorphism of VDR gene may be not associated with the susceptibility to syphilis.

Syphilis；Vitamin D receptor gene；Single nucleotide polymorphism；Genetic susceptibility [J Pract Dermatol, 2016, 6(5):293-295]

R759.1

A

1674-1293(2016)05-0293-03

10.11786/sypfbxzz.1674-1293.20160502

連云港市科技局基金資助項(xiàng)目（SH1409）；連云港市衛(wèi)生局基金資助項(xiàng)目（SJ1307）

222002連云港，徐州醫(yī)科大學(xué)附屬連云港市第一人民醫(yī)院皮膚科（胡文龍，張婷婷，劉仲倫，任虹）

胡文龍，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：遺傳性皮膚病，E-mail: lyghuwl@163.com

任虹，E-mail: lygrenh@163.com

（2016-06-16

2016-08-24）