郝媛媛

(池州市食品藥品檢驗中心，安徽池州 247000)

高效液相色譜法同時測定食品中丙酸鈣（鈉）和雙乙酸鈉

郝媛媛

(池州市食品藥品檢驗中心，安徽池州 247000)

建立高效液相色譜法同時測定食品中的丙酸鈣（鈉）和雙乙酸鈉。采用Acclaim120 C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），以1.5 g／L磷酸氫二銨溶液（用1 mol／L磷酸溶液調(diào)pH至2.7～3.5）–甲醇混合液（體積比為95∶5）作為流動相，流量為1.0 mL／min，在214 nm波長下檢測。丙酸與雙乙酸鈉的質(zhì)量濃度在0.05～0.5 mg／mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.999。丙酸和雙乙酸鈉的加標回收率分別為95.58%～98.95%，96.12%～99.25%，測定結(jié)果的相對標準偏差分別為1.50%，1.41%(n=6)。該法適用于糕點及調(diào)味品中丙酸鈣（鈉）和雙乙酸鈉含量的檢測。

高效液相色譜法；食品；丙酸；丙酸鈣（鈉）；雙乙酸鈉

隨著社會的發(fā)展和生活質(zhì)量的提高，人們對食品安全的關(guān)注度不斷提升，食品中防腐劑的添加越來越受到人們的重視。近年，政府加強了對食品安全的監(jiān)管，加大了對食品中添加劑濫加行為的處置力度。

丙酸鈣（鈉）能有效防止食物變質(zhì)，對各類霉菌、革蘭氏陰性桿菌或好氧芽孢桿菌有較強的抑制作用，而且對酵母菌無害［1–2］。雙乙酸鈉為乙酸鈉與乙酸的分子復(fù)合物，無殘留，無致癌因素，是高效霉菌與細菌的抑制劑［3–4］。丙酸鈣（鈉）和雙乙酸鈉作為防腐劑被廣泛運用到各類食品中。但是由于丙酸鈣（鈉）和雙乙酸鈉均屬于化學(xué)物質(zhì)，長期過量食用會對人體造成不同程度的傷害，所以開展食品中的丙酸鈣（鈉）和雙乙酸鈉的限量檢測具有重要的意義。

針對食品中丙酸鈣（鈉）和雙乙酸鈉的測定，目前國家標準方法主要有氣相色譜法（GB／T 5009.120–2003）［5］，液相色譜法（GB/T 23382–2009，GB／T 23383–2009）［6–8］。在日常的檢驗工作中發(fā)現(xiàn)，氣相色譜法定性定量能力較差，液相色譜法更簡單，易操作，方法準確度更好。筆者參照相關(guān)標準及文獻［9–15］，建立一種高效液相色譜法，使其能同時測定食品中丙酸鈣（鈉）和雙乙酸鈉，該方法簡單快速、定量準確，時效性強，不僅可以避免長時間使用磷酸鹽緩沖鹽作為流動相對C18色譜柱分離度的影響，而且還可大幅提高檢驗機構(gòu)日常檢驗工作的工作效率。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：Ultimate 3000型，配二極管陣列檢測器，美國賽默飛世爾科技公司；

分析天平：XPE204型，感量為0.000 1 g，瑞士梅特勒–托利多公司；

超聲波儀：KQ3200E型，昆山市超聲儀器有限公司；

離心機：DT5–2B型，額定轉(zhuǎn)速5 000 r／min，北京時代北利離心機有限公司；

實驗室用超純水機：AKCD–UV–1840型，臺灣艾柯電器公司；

丙酸標準品：純度不小于99%，上海玉博生物科技有限公司；

雙乙酸鈉標準品：純度不小于99%，上海玉博生物科技有限公司；

甲醇：色譜純；

磷酸、磷酸氫二銨：分析純；

實驗室用水為超純水。

1.2 色譜條件

色 譜 柱：Acclaim120 C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm，美國賽默飛世科技公司）；流動相：1.5 g／L磷酸氫二銨溶液（用1 mol／L磷酸溶液調(diào)pH至2.7～3.5）–甲醇混合液（體積比為95∶5），流量為1.0 mL／min；柱溫：25℃；檢測波長：214 nm；進樣體積：10 μL。

1.3 實驗步驟

1.3.1 樣品預(yù)處理

準確稱取5 g（精確至0.01 g）樣品至50 mL具塞離心管中，加水20 mL，加入1 mol／L磷酸溶液0.5 mL，混勻，經(jīng)超聲浸提10 min后用1 mol／L磷酸溶液調(diào)pH值約為3，用水定容至標線，搖勻。以不低于4 000 r／min轉(zhuǎn)速離心10 min，取上清液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾后進樣，在1.2色譜條件下測定。

1.3.2 標準工作溶液配制及標準工作曲線繪制

準確稱取丙酸、雙乙酸鈉各1.0 g （精確至0.000 1 g）于2只100 mL容量瓶中，用水定容并搖勻，配制成質(zhì)量濃度均為10 mg／mL的標準儲備液。再分別吸取丙酸、雙乙酸鈉標準儲備液各0.25，0.5， 1.0，2.0，2.5 mL于50 mL容量瓶中，分別加入0.2 mL 1 mol／L磷酸溶液，用水定容至標線，搖勻，配制成丙酸、雙乙酸鈉系列混合標準溶液，質(zhì)量濃度分別為0.05，0.1，0.2，0.4，0.5 mg／mL?；旌蠘藴嗜芤哼^0.45μm微孔濾膜過濾，按照1.2色譜條件由低濃度到高濃度依次進行測定。以溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標，以色譜峰面積為縱坐標繪制標準工作曲線。利用標準曲線法計算樣品中丙酸的含量，然后換算成丙酸鈣（鈉）的含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測波長的選擇

丙酸和雙乙酸鈉在200 nm左右有最大的吸收峰，但200 nm左右樣液中的雜質(zhì)吸收峰比較多；而在214 nm處待測組分也有較大吸收峰，同時雜質(zhì)吸收峰較小，所以實驗選擇214 nm作為檢測波長。

2.2 流動相的選擇

國標方法GB／T 23382–2009與GB／T 23383–2009均采用1.5 g／L磷酸氫二銨溶液作為流動相進行測定，而在大批量檢驗過程中，長時間使用磷酸鹽緩沖鹽作為流動相會造成C18色譜柱分離度下降，色譜峰形變差。采用1.5 g／L磷酸氫二銨溶液–甲醇(體積比分別為90∶10，95∶5，92∶8)作為流動相進行比較試驗［16–19］，發(fā)現(xiàn)當流動相為1.5 g／L磷酸氫二銨溶液–甲醇（體積比為95∶5）時，色譜圖中待測組分分離效果很好，色譜峰形尖銳，滿足實驗要求，故本實驗選擇1.5 g／L磷酸氫二銨溶液–甲醇（體積比為95∶5）為流動相。

2.3 線性方程和檢出限

按照1.2色譜條件測定1.3.2的系列混合標準溶液，以待測組分的質(zhì)量濃度為橫坐標，以色譜峰面積為縱坐標，繪制標準工作曲線，計算得到線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)，見表1。由表1可知，兩種待測組分在質(zhì)量濃度為0.05～0.5 mg／mL的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.999，滿足實驗要求。以3倍信噪比計算檢出限，得出丙酸的檢出限為0.03 g／kg，雙乙酸鈉的檢出限為0.015 g／kg。

表1 丙酸、雙乙酸鈉的線性關(guān)系及相關(guān)系數(shù)

2.4 精密度試驗

按照1.2色譜條件對1.3.2中質(zhì)量濃度為0.1mg／mL的丙酸、雙乙酸鈉混合標準溶液依次平行測定6次，計算丙酸、雙乙酸鈉測定結(jié)果的相對標準偏差（RSD），結(jié)果見表2。由表2可知，丙酸測定結(jié)果的相對標準偏差為1.50% (n=6)，雙乙酸鈉測定結(jié)果的相對標準偏差為1.41% (n=6)，表明本法精密度良好，滿足實驗要求。

表2 精密度試驗結(jié)果

2.5 加標回收試驗

取空白樣品醬油、糕點、面包各1個，稱取均勻的空白樣品各5 g，加入3種不同濃度的丙酸、雙乙酸鈉混合標準溶液，按照1.3.1的前處理方法處理加標樣品，按照1.2色譜條件測定，根據(jù)測定結(jié)果計算加標回收率，結(jié)果見表3。由表3可知，丙酸的加標回收率為95.58%～98.95%，雙乙酸鈉的加標回收率為96.12%～99.25%，滿足實驗要求。

表3 丙酸、雙乙酸鈉的加標回收試驗結(jié)果

圖1為空白樣品加標色譜圖。由圖1可知，樣品基質(zhì)與被測成分丙酸、雙乙酸鈉的色譜峰分離良好，且兩種目標化合物色譜峰峰形尖銳、對稱，利于準確定量。

圖1 丙酸、雙乙酸鈉加標色譜圖

3 結(jié)語

建立了一種能同時測定食品中的丙酸、雙乙酸鈉含量的高效液相色譜法。該方法的回收率、精密度等技術(shù)指標均符合GB／T27404–2008［20］的要求，方法簡單快速、準確度高、實用性強，可以大大提高檢驗機構(gòu)大批量檢驗工作的工作效率。

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Simultaneous Determination of Propionic Acid and Sodium Diacetate in Food by HPLC

Hao Yuanyuan
(Chizhou Food and Drug Inspection Center, Chizhou 247000, China)

A method was established for simultaneous determination of calcium (sodium) propionate and sodium diacetate in food by HPLC. The chromatographic column was Acclaim120 C18(150 mm×4.6 mm, 5 μm), 1.5 g／L diammonium hydrogen phosphate solution (pH value was adjusted to 2.7–3.5 by using 1 mol／L phosphate solution)–methanol mixed liquor with volume ratio of 95∶5 was used as the mobile phase with the flow rate of 1.0 mL／min, and the detection wavelength was selected as 214 nm. The mass concentration of propionic acid and sodium diacetate has good linearity in the range of 0.05–0.5 mg／mL with the correlation coefficient greater than 0.999. The recovery of standard addition for propionic acid and sodium diacetate were 95.58%–98.95% and 96.12%–99.25%, respectively. The RSD for propionic acid and sodium diacetate was 1.50% and 1.41%(n=6), respectively. This method was suit for determination of calcium propionate and sodium diacetate in pastry and condiment.

high performance liquid chromatography; food; propionic acid; calcium propionate; sodium propionate; sodium diacetate

O657.7

A

1008–6145(2016)06–0059–03

10.3969／j.issn.1008–6145.2016.06.014

聯(lián)系人：郝媛媛；E-mail: 446903913@qq.com

2016–10–18