林道密，王宵燕

（1 福建省長(zhǎng)樂市首占鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，福建 長(zhǎng)樂 350202；2 揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，江蘇 揚(yáng)州 225009）

蘇姜豬早期消化酶分泌規(guī)律的研究

林道密1，王宵燕2

（1 福建省長(zhǎng)樂市首占鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，福建 長(zhǎng)樂 350202；2 揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，江蘇 揚(yáng)州 225009）

仔豬消化酶活性受日齡、日糧組成、斷奶日齡、遺傳等因素的影響。文內(nèi)對(duì)蘇姜仔豬0～75日齡消化酶分泌規(guī)律進(jìn)行了全面研究。結(jié)果顯示不同日齡小腸食糜消化酶活性差異顯著，且十二指腸、空腸和回腸食糜消化酶活性變化規(guī)律基本相同，以空腸食糜消化酶活性最高。胰臟中消化酶活性的變化規(guī)律與小腸食糜的變化規(guī)律基本一致，斷奶后60日齡各種酶活均有不同程度的下降，空腸的各項(xiàng)消化酶活性的指標(biāo)均高于十二指腸和回腸，說明空腸在仔豬的消化吸收生理中有重要的作用。

蘇姜豬；消化酶；分泌規(guī)律

仔豬消化酶包括胃酶、胰酶和小腸酶，許多研究表明，仔豬消化酶活性受日齡、日糧組成、斷奶日齡、遺傳等因素的影響［1，2］。Iubmb (1992)［3］指出仔豬胃黏膜上有4種蛋白酶：胃蛋白酶A、胃蛋白酶B、胃亞蛋白酶和胃凝乳蛋白酶。Cranwe11(1995)［4］報(bào)道仔豬出生后3～4周齡時(shí)胃蛋白酶B和胃凝乳蛋白酶是胃底腺黏膜的優(yōu)勢(shì)酶。

計(jì)成等(1997)［5］報(bào)道，仔豬剛出生時(shí)胰淀粉酶活性很低，一直到4周齡才有顯著增長(zhǎng)，仔豬斷奶后胰臟和小腸內(nèi)胰淀粉酶活性都有明顯下降。Han(2000)［6］指出，小腸分泌6種碳水化合物分解酶（乳糖酶、海藻糖酶、異麥芽糖酶、蔗糖酶、麥芽糖酶Ⅱ及Ⅲ）、4種蛋白質(zhì)分解酶和2種脂肪酶。Aumaitre等(1978)［7］報(bào)道，初生仔豬小腸內(nèi)麥芽糖酶和蔗糖酶活性都很低，而乳糖酶的活性較高，是腸道內(nèi)的優(yōu)勢(shì)酶，2～5周齡乳糖酶的活性持續(xù)下降，而麥芽糖酶和蔗糖酶活性迅速增加，到10～16日齡達(dá)到最高峰。

表1 ?日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

豬出生后消化酶的分泌是一種種質(zhì)屬性，由于豬的品種不同，遺傳基礎(chǔ)各異，因此分泌規(guī)律也不盡相同。本試驗(yàn)用新培育的含中外品種血統(tǒng)的姜曲海瘦肉型品種早期不同日齡（初生、15日齡、30日齡、45日齡、60日齡、75日齡）的母豬進(jìn)行消化酶分泌規(guī)律的研究，為進(jìn)一步選育和新品種種質(zhì)特性的建立提供必要的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

在江蘇省姜堰市種豬場(chǎng)選取姜曲海瘦肉型品種豬10窩，采用同期發(fā)情技術(shù)配種。分娩后選擇時(shí)間相差24 h之內(nèi)的初生體重接近的健康的24頭母仔豬用作屠宰試驗(yàn)，分別于初生、15日齡、30日齡、45日齡、60日齡和75日齡各屠宰4頭。試驗(yàn)豬群采用豬場(chǎng)常規(guī)飼養(yǎng)管理， 45日齡斷奶，換料前進(jìn)行為期1周的日糧過渡。

1.2 試驗(yàn)豬日糧配方和營(yíng)養(yǎng)水平

1.3 測(cè)定項(xiàng)目及方法

1.3.1 胰腺及腸道消化酶活性測(cè)定

取樣及現(xiàn)場(chǎng)測(cè)定：采用頸靜脈放血的方法處死。打開腹腔，立即結(jié)扎賁門瓣、幽門瓣、直腸遠(yuǎn)端，迅速取出肝、胃、胰及小腸。將胰剝除多余脂肪和組織，和肝分別稱重。胰腺稱重后迅速放入液氮中速凍。

小腸按解剖位置分為十二指腸、空腸、回腸3段，將十二指腸，空腸，回腸每段各取約10 cm腸段結(jié)扎后稱重（腸重+食糜），然后放入液氮中速凍，所用速凍樣品立即移入-20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 樣品前處理

胰腺上清液的制備：從冰箱中取出的胰腺在完全解凍前從頭、體、尾三個(gè)部位取至少0.5 g的胰腺，用其重量10倍體積（Vo1/wt）的0.4 mo1/L氯化鉀溶液勻漿45 s，勻漿管外設(shè)冰浴。勻漿液在4 ℃下離心15 min（15 000×g），將上清液置-20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆茫?］。

小腸食糜上清液的制備：置室溫下的小腸在完全解凍前沿腸管縱向切開，取出食糜，刮下黏膜后用4 ℃的0.4 mo1/L氯化鉀溶液按5倍（Vo1/wt）稀釋后其他處理過程同胰腺上清液的制備［8］。

1.3.3 測(cè)試指標(biāo)及測(cè)定方法

胰腺組織和食糜上清液的胰蛋白酶、糜蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶。

胰蛋白酶活性的測(cè)定以TAME（ρ-tosy1-ι-arginine methy1 ester，對(duì)甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯，C14H22N4O4S HCL，Sigma，T4626）為底物，采用Worthington法測(cè)定，胰蛋白酶將甲苯磺酰-L-精氨酸從TAME中釋放出來，用分光光度計(jì)于247 nm處測(cè)定由上述反應(yīng)引起的吸光度增大值。一個(gè)胰蛋白酶單位相當(dāng)于在規(guī)定條件（pH8.1，37 ℃，Ca2+濃度為0.01 mo1/L）下每分鐘釋放出1 μmo1對(duì)甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯時(shí)所需要的酶量。

糜蛋白酶（即α-凝乳蛋白酶）活性的測(cè)定以BTEE(N-benzoy1-ι-tyrosine ethy1 ester，N-苯甲酰-L-酪氨酸乙酯，C18H19NO4，Sigma，B4875)為 底 物， 采 用Humme1法 測(cè) 定， 在pH為7.8，37 ℃，Ca2+濃度為0.05 mo1/L的條件下，每分鐘水解1 μmo1BTEE的酶量為一個(gè)酶活單位。

胰腺組織在測(cè)定前加入等體積 的0.1%腸 激 酶（Enterokinase，Sigma，E5510）將蛋白酶原激活［2］。

淀粉酶的測(cè)定采用寧波慈城試劑廠生產(chǎn)的淀粉酶試劑盒，所用方法為碘比色法，測(cè)前做預(yù)試驗(yàn)確定稀釋倍數(shù)。

脂肪酶的測(cè)定以甘油三醋酸酯為底物，采用BP63法［9］測(cè)定，一個(gè)脂酶單位相當(dāng)于在試驗(yàn)條件下釋放出1 μmo1醋酸所需的酶量。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS軟件建立原始數(shù)據(jù)庫(kù)，數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的方式表示。 LSD統(tǒng)計(jì)差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

表2測(cè)定結(jié)果表明，不同日齡小腸食糜消化酶活性差異顯著，且十二指腸、空腸和回腸食糜消化酶活性變化規(guī)律基本相同，以空腸食糜消化酶活性最高。

2.1 小腸食糜淀粉酶活性的研究

初生仔豬哺乳前空腸食糜的淀粉酶活性約為569.7 μ/g食糜，到30日齡已升至3 110.5 μ/g食糜，此后有上升趨勢(shì)但差異不顯著。到60日齡時(shí)淀粉酶活性略有下降，估計(jì)是斷奶應(yīng)激所致，但到75日齡時(shí)淀粉酶活性極顯著上升至10 333.2μ/g食糜（P＜0.01），見圖1。

2.2 小腸食糜胰蛋白酶活性

胰蛋白酶活性在45日齡前隨著日齡增加而顯著提高，45日齡時(shí)升至最高值，而60日齡顯著下降，至75日齡時(shí)恢復(fù)增高趨勢(shì)，見圖2。

2.3 小腸食糜胰糜蛋白酶活性

胰糜蛋白酶活性在初生仔豬哺乳前很低，為0.4 μ/g食糜，到15日齡時(shí)達(dá)到高峰為1.5 μ/g食糜，隨后極顯著下降。斷奶對(duì)胰糜蛋白酶的活性影響不大，見圖3。

2.4 胰腺中消化酶的活性

如表3所示，胰腺中消化酶活性與小腸的消化酶活性在各日齡間變化趨勢(shì)基本相同，斷奶對(duì)胰腺淀粉酶，脂肪酶，胰蛋白酶的影響較大。胰蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶的活性在45日齡前隨著日齡增加而升高，45日齡達(dá)到最高值。如初生仔豬哺乳前胰淀粉酶活性已達(dá)到787.8 μ/g食糜，到45日齡顯著上升到8 171.3 μ/g食糜，斷奶后60日齡酶活有所下降，為6 282.3 μ/g食糜，但與斷奶時(shí)（45日齡）的酶活相比差異不顯著。胰蛋白酶的活性受斷奶的影響較大，斷奶后的60日齡的活性較45日齡顯著下降。而糜蛋白酶的活性除在15日齡時(shí)達(dá)到高峰外，初生及其他各日齡的活性基本相近，且差異不顯著。胰脂肪酶活性隨著日齡的增加而升高，且斷奶后的活性顯著降低。

圖1 各日齡小腸淀粉酶活性圖

圖2 各日齡小腸胰蛋白酶活性圖

圖3 各日齡小腸胰糜蛋白酶活性圖

表3 不同日齡胰臟消化酶活性觀測(cè)值

3 討論

小腸內(nèi)消化酶主要來自于胰腺和小腸黏膜上皮細(xì)胞，本試驗(yàn)表明，盡管初生仔豬消化道發(fā)育不完善，但為了滿足生理需要，消化酶分泌迅速。小腸中淀粉酶在45日齡時(shí)即達(dá)到相當(dāng)高水平，而斷奶后60日齡的淀粉酶活性降低，但差異不顯著，可能是因?yàn)閿嗄谭磻?yīng)和日糧改變引起的，但由于已經(jīng)距斷奶15 d之久，故已逐漸恢復(fù)。 Jensen等（1997）［9］報(bào)道，斷奶后淀粉酶活性顯著降低，斷奶后淀粉酶活性恢復(fù)時(shí)間可見，消化酶合成和分泌受影響后，并不能很快修復(fù)，這與分泌酶組織的細(xì)胞受到損傷有關(guān)。

胰蛋白酶和胰糜蛋白酶是蛋白質(zhì)消化分解過程中的兩種重要消化酶，由于它們分解肽鏈的方式不同，因此隨著仔豬日齡的增加和消化道中蛋白質(zhì)底物種類的改變，這兩種酶的比例發(fā)生適應(yīng)性的調(diào)整，張宏福等（2002）［10］指出，糜蛋白酶活性在哺乳期較高，至22日齡時(shí)達(dá)到峰值。本試驗(yàn)表明糜蛋白酶是哺乳期蛋白質(zhì)消化分解過程中的優(yōu)勢(shì)酶，具有特殊的作用，但隨著日齡和日糧的改變，其優(yōu)勢(shì)地位逐漸被胰蛋白酶代替。哺乳前由于沒有食物刺激作用，所以小腸食糜中兩種酶活性很低，但是15日齡時(shí)胰糜蛋白酶顯著增加，隨著仔豬補(bǔ)料的開始，糜蛋白酶的活性開始顯著下降，而胰蛋白酶在45日齡時(shí)開始顯著上升，說明消化道的蛋白酶系統(tǒng)發(fā)育較慢，這也許就是斷奶前仔豬對(duì)植物蛋白消化力不強(qiáng)的原因，本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)十二指腸和空腸的胰蛋白酶的活性在60日齡顯著下降，而有關(guān)報(bào)道［11］指出在改變?nèi)占Z蛋白質(zhì)水平時(shí)，胰液中糜蛋白酶就開始劇烈變化，但胰蛋白酶活性很少變化，這一差異原因有待進(jìn)一步查明。

Borgstrom報(bào)道，盡管胰脂肪酶含量不高，乳中脂肪消化率可達(dá)96%，斷奶時(shí)脂肪消化率下降為斷奶前的65%～80%，與本試驗(yàn)結(jié)果相似。仔豬出生開始哺乳后，胰脂肪酶活性提高很快，這也許不是年齡的作用，而是因?yàn)槟溉橹泻写罅康闹荆驗(yàn)槌錾蟮?～4周，乳中脂肪含量逐漸增加，脂肪酶活性與脂肪食入量有關(guān)。

胰臟中消化酶活性的變化規(guī)律與小腸食糜的變化規(guī)律基本一致，斷奶后60日齡各種酶活均有不同程度的下降，這與許多學(xué)者的報(bào)道相似。有報(bào)道指出，仔豬一般在斷奶后的7～12 d恢復(fù)正常。本試驗(yàn)采用45日齡斷奶，而60日齡的消化酶各項(xiàng)指標(biāo)均有不同程度的下降，說明仔豬斷奶后的恢復(fù)時(shí)間至少在15 d以上。

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，空腸的各項(xiàng)消化酶活性的指標(biāo)均高于十二指腸和回腸，說明空腸在仔豬的消化吸收生理中有重要的作用。

［1］ LUO X G， DOVE C R. Effect of dietary copper and fat on nutrient uti1ization， digestive enzyme activities， and tissue minera1 1eve1s in wean1ing pigs［J］. Journa1 of anima1 science， 1996， 74(8)： 1888-1896.

［2］ O’SULLIVAN N P， DUNNINGTON E A， LARSEN A S， et a1. Corre1ated Responses in Lines of Chickens Divergent1y Se1ected for Fifty-Six Day Body Weight. 3. Digestive Enzymes［J］. Pou1try science， 1992， 71(4)： 610-617.

［3］ WEBB E C. Enzyme nomenc1ature 1992. Recommendations of the Nomenc1ature Committee of the Internationa1 Union of Biochemistry and Mo1ecu1ar Bio1ogy on the Nomenc1ature and C1assification of Enzymes［M］. Academic Press， 1992.

［4］ Cranwe11 P D. Deve1opment of the neonata1 gut and enzyme systems［J］. The neonata1 pig： Deve1opment and surviva1， 1995， 1： 99-112.

［5］ 于旭華， 汪儆， 馮定遠(yuǎn). 斷奶仔豬消化酶的發(fā)育規(guī)律及其影響因素［J］. 動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)， 2002， 14(1)： 8-12.

［6］ HAN D S， LI F， HOLT L， et a1. Keratinocyte growth factor-2 (FGF-10) promotes hea1ing of experimenta1 sma11 intestina1 u1ceration in rats［J］. American Journa1 of Physio1ogy-Gastrointestina1 and Liver Physio1ogy， 2000， 279(5)：G1011-G1022.

［7］ AUMAITRE A， CORRING T. Deve1opment of digestive enzymes in the pig1et from birth to 8 weeks［J］. Anna1s of Nutrition and Metabo1ism，1978， 22(4)： 244-255.

［8］ 李長(zhǎng)忠. 斷奶日齡對(duì)仔豬胰腺和腸道胰糜蛋白酶和胰蛋白酶比值 (C/T) 的影響［J］. 黑龍江畜牧獸醫(yī)， 2000 (9)： 7-8.

［9］ Jensen M S， Jensen S K， Jakobsen K. Deve1opment of digestive enzymes in pigs with emphasis on 1ipo1ytic activity in the stomach and pancreas［J］. Journa1 of anima1 science， 1997， 75(2)： 437-445.

［10］ 張宏福，李長(zhǎng)忠，顧憲紅.斷奶日齡對(duì)仔豬腸道中乳糖酶活性的影響.乳豬營(yíng)養(yǎng)與飼料研究論文集.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧所，1999：68-72.

［11］ 楊全明. 仔豬消化道酶和組織器官生長(zhǎng)發(fā)育規(guī)律的研究［D］. 北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)， 1999.

2016-08-02）

江蘇省科技廳“九五”、“十五”科技攻關(guān)項(xiàng)目：“姜曲海豬瘦肉型品系的選育” (BE2001364)；江蘇省科技廳高新技術(shù)項(xiàng)目：“應(yīng)用現(xiàn)代遺傳育種技術(shù)選育姜曲海豬瘦肉型品系（3－5世代）”（BG2006303）；江蘇省科技廳科技支撐計(jì)劃：“應(yīng)用多基因聚合技術(shù)輔助選育姜曲海豬瘦肉型品系”(BE2009330-3)