于清偉，安秀榮，王慶武，蘭玉菲

（山東省泰安市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，山東泰安271000）

平菇泰山-20變異菌株的鑒別及其菌絲優(yōu)化培養(yǎng)*

于清偉，安秀榮，王慶武，蘭玉菲

（山東省泰安市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，山東泰安271000）

通過(guò)試驗(yàn)確定了變異菌株平菇泰山-20BY，探討了在不同碳源、氮源、溫度、pH值等條件下對(duì)變異菌株菌絲生長(zhǎng)的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明，菌絲生長(zhǎng)最適溫度24℃～26℃，最適pH值為6～7，最適碳源為葡萄糖，最適氮源為蛋白胨，最佳培養(yǎng)基配方為葡萄糖20 g·L-1、蛋白胨10 g·L-1、KH2PO43 g·L-1和MgSO40.5 g·L-1。

平菇；變異菌株；鑒別；碳氮源

平菇（Pleurotus ostreatus）隸屬于擔(dān)子菌門（Basidiomycota）層菌綱（Hymenomycetes）傘菌目（Agaricales）側(cè)耳科（Pleurotaceae）側(cè)耳屬（Pleurotus），為一類側(cè)耳屬食用菌菇類的商品名稱［1］。其栽培方法簡(jiǎn)單，成本低，產(chǎn)量高，周期短，營(yíng)養(yǎng)豐富，具有適應(yīng)性廣、抗逆性強(qiáng)、原料來(lái)源廣、經(jīng)濟(jì)效益高等特點(diǎn)，已經(jīng)發(fā)展成世界性菇類栽培品種［2］。

目前，食用菌育種手段仍以選擇育種、雜交育種和誘變育種為主［3］。在育種過(guò)程中，筆者發(fā)現(xiàn)1株變異菌株，并對(duì)該菌株菌絲生物學(xué)特性進(jìn)行了初步的研究。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1供試菌株

平菇泰山-20、平菇泰山-20BY（變異株），保藏于泰安市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院。

1.1.2儀器

電子分析天平（精度0.001 g），上海精科實(shí)業(yè)有限公司；立式壓力蒸汽滅菌器，上海申安醫(yī)療器械廠；生化培養(yǎng)箱，上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；超凈工作臺(tái)，蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司；FE20實(shí)驗(yàn)室pH計(jì)，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司等。

1.1.3供試培養(yǎng)基

基礎(chǔ)培養(yǎng)基：PDA［4］。

碳源供試培養(yǎng)基：蛋白胨0.2%、KH2PO40.1%、MgSO40.05%、瓊脂2%、碳源2%（葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、乳糖、果糖），pH自然［5］。

氮源供試培養(yǎng)基：葡萄糖2%、KH2PO40.1%、MgSO40.05%、瓊脂2%、氮源0.2%［蛋白胨、酵母膏、NH4Cl、（NH4）2SO4、NH4NO3］，pH自然［5］。

1.2方法

1.2.1變異菌株確定

將分離到的變異菌株無(wú)性繁殖10代，取第1代、第5代、第10代變異菌株與平菇泰山-20接入PDA培養(yǎng)基中，觀察菌絲拮抗現(xiàn)象，確定變異菌株是否退化，并采用十字交叉法測(cè)定比較變異菌株與平菇泰山-20的菌絲生長(zhǎng)速度。

1.2.2溫度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

制作PDA平板培養(yǎng)基，分別接入5 mm2菌齡一致的平菇泰山-20和變異菌株的母種菌塊，溫度設(shè)18℃、20℃、22℃、24℃、26℃、28℃、30℃共7個(gè)處理，測(cè)定菌落直徑大小，計(jì)算菌絲生長(zhǎng)速度，每處理重復(fù)5次，置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)［6-7］。

1.2.3pH對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

制作PDA平板培養(yǎng)基，接入5 mm2菌齡一致的平菇泰山-20BY母種菌塊，pH設(shè)4、5、6、7、8、9共6個(gè)處理，測(cè)定菌落直徑大小，計(jì)算菌絲生長(zhǎng)速度，每處理重復(fù)5次，置于25℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)［6-7］。

1.2.4不同碳源對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

按1.1.3中碳源供試培養(yǎng)基配方制備不同碳源培養(yǎng)基，接入5 mm2菌齡一致的平菇泰山-20BY母種菌塊，25℃下恒溫培養(yǎng)，測(cè)定菌落直徑大小，計(jì)算菌絲生長(zhǎng)速度。每處理重復(fù)5次［6-7］。

1.2.5不同氮源對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

按1.1.3中氮源供試培養(yǎng)基配方制備不同氮源培養(yǎng)基，接入5 mm2菌齡一致的平菇泰山-20BY母種菌塊，25℃下恒溫培養(yǎng)，測(cè)定菌落直徑大小，計(jì)算菌絲生長(zhǎng)速度。每處理重復(fù)5次［6-7］。

1.2.6最佳培養(yǎng)基優(yōu)化

試驗(yàn)選定適宜碳源、氮源后，與無(wú)機(jī)鹽KH2PO4、MgSO4進(jìn)行組合，采用L9（34）正交表進(jìn)行四因素三水平正交試驗(yàn)，組合成供試培養(yǎng)基，方法同1.2.4［6-7］。

2　結(jié)果與分析

2.1平菇變異菌株確定

平菇變異菌株形態(tài)特征見圖1。

由圖1中可以看出，變異菌株菌蓋顏色灰白色，菌褶白色，與原菌株形態(tài)相比差異較大。采用組織分離方式，分離得到平菇泰山-20BY菌株。

平菇變異菌株的鑒別情況見表1。

圖1　平菇變異菌株的子實(shí)體形態(tài)（A、B分別為子實(shí)體正面及腹面）Fig.1Morphological characteristics of mutant strains of Pleurotus ostreatus（A and B：The front and back of fruiting body）

表1　平菇變異菌株的鑒別Tab.1Identification on mutation strains of Pleurotus ostreatus

從表1可以看出，平菇泰山-20BY第1代到第10代與平菇泰山-20都有拮抗現(xiàn)象；但菌絲生長(zhǎng)速度相差不大，可確定平菇泰山-20BY穩(wěn)定性較強(qiáng)，未在其無(wú)性繁殖過(guò)程中發(fā)生回復(fù)突變。

2.2溫度對(duì)平菇菌絲生長(zhǎng)的影響

由于平菇泰山-20BY的菌蓋顏色為白色，而平菇耐高溫品種一般其菌蓋顏色也為白色。因此，溫度對(duì)菌絲生長(zhǎng)影響試驗(yàn)中，對(duì)平菇泰山-20與平菇泰山-20BY兩者進(jìn)行了試驗(yàn)比較。溫度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響見圖2。

圖2　溫度對(duì)平菇變異菌株菌絲生長(zhǎng)的影響Fig.2Effect of temperature on mycelial growth of mutation strains of Pleurotus ostreatus

從圖2中可以看出，2個(gè)菌株菌絲生長(zhǎng)速度差異性較小，在一定溫度范圍內(nèi)，隨著溫度升高，菌絲生長(zhǎng)速度呈現(xiàn)上升趨勢(shì)；超過(guò)26℃時(shí)菌絲生長(zhǎng)速度緩慢下降；平菇泰山-20BY在高溫區(qū)生長(zhǎng)速度稍快于平菇泰山-20，但最適溫度范圍依然都是24℃～26℃。

2.3pH對(duì)平菇變異菌株菌絲生長(zhǎng)的影響

pH對(duì)平菇變異菌株菌絲生長(zhǎng)影響情況見圖3。

圖3　pH對(duì)平菇變異菌株菌絲生長(zhǎng)的影響Fig.3Effect of pH on mycelial growth in mutation strains of Pleurotus ostreatus

由圖3可以看出，在pH值4～9的6個(gè)處理中，pH值6～7時(shí)，菌絲生長(zhǎng)速度最快，菌絲濃白，長(zhǎng)勢(shì)也最好；pH值4～5時(shí)菌絲生長(zhǎng)速度最慢，菌絲長(zhǎng)勢(shì)也最差。平菇泰山-20BY最適pH范圍為6～7，pH值8～9時(shí)次之，可能是由于調(diào)配培養(yǎng)基pH后滅菌，滅菌結(jié)束后培養(yǎng)基pH下降所致。

2.4不同碳源對(duì)平菇變異菌株菌絲生長(zhǎng)的影響

不同碳源對(duì)平菇變異菌株菌絲生長(zhǎng)的影響見表2。

表2　碳源對(duì)平菇變異菌株菌絲生長(zhǎng)的影響Tab.2Effect of carbon sources on the mycelial growth of mutation strains of Pleurotus ostreatus

由表2可見，以葡萄糖為碳源時(shí)，菌絲生長(zhǎng)速度最快，菌絲長(zhǎng)勢(shì)最好；以乳糖、果糖為碳源時(shí)，菌絲生長(zhǎng)速度及菌絲長(zhǎng)勢(shì)較差。因此，葡萄糖是變異菌株平菇泰山-20BY菌絲生長(zhǎng)的最佳碳源。

2.5不同氮源對(duì)平菇變異菌株菌絲體生長(zhǎng)的影響

5種氮源均可被平菇泰山-20BY菌絲生長(zhǎng)利用，其對(duì)菌絲體生長(zhǎng)的影響見表3。

表3　氮源對(duì)平菇變異菌株菌絲體生長(zhǎng)的影響Tab.3Effect of nitrogen sources on mycelial growth of mutation strains of Pleurotus ostreatus

從表3可以看出，蛋白胨作為氮源時(shí)，菌絲生長(zhǎng)速度最快，菌絲長(zhǎng)勢(shì)也最好；酵母膏次之；NH4Cl、（NH4）2SO4、NH4NO3作為氮源時(shí)，菌絲生長(zhǎng)速度及菌絲長(zhǎng)勢(shì)最差。由此可得出平菇泰山-20BY菌絲生長(zhǎng)的最佳氮源為蛋白胨。

2.6平菇變異菌株的最佳培養(yǎng)基優(yōu)化

確定平菇變異菌株的最佳碳源為葡萄糖、最佳氮源為蛋白胨后，與無(wú)機(jī)鹽組合進(jìn)行正交設(shè)計(jì)，見表4。L9（34）正交試驗(yàn)結(jié)果見表5。

表4　正交試驗(yàn)因素和水平Tab.4Factors and levels of orthogonal test

對(duì)表5中數(shù)據(jù)進(jìn)行直觀分析，由極差R值可以得出，碳源對(duì)平菇變導(dǎo)菌株菌絲生長(zhǎng)影響最大，氮源次之，而KH2PO4影響最小。對(duì)均值Ki值進(jìn)行分析，可篩選出培養(yǎng)基最佳組合配方為A2B3C2D1，即葡萄糖20 g·L-1、蛋白胨10 g·L-1、KH2PO43 g·L-1、MgSO40.5 g·L-1。

3　結(jié)論與討論

通過(guò)試驗(yàn)，變異菌株平菇泰山-20BY菌絲生長(zhǎng)最適溫度24℃～26℃，最適pH值為6～7，最適碳源為葡萄糖，最適氮源為蛋白胨，最佳培養(yǎng)基配方為葡萄糖20 g·L-1、蛋白胨10 g·L-1、KH2PO43 g·L-1、MgSO40.5 g·L-1。

在溫度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響試驗(yàn)中，平菇泰山-20BY耐高溫性能稍高于平菇泰山-20，但是否會(huì)在栽培出菇時(shí)更加耐高溫并不能確定，變異菌株的子實(shí)體形態(tài)特征等是否優(yōu)良等，還有待于進(jìn)一步的出菇試驗(yàn)。

表5　L9（34）正交試驗(yàn)結(jié)果Tab.5Results of L9（34）orthogonal test

［1］黃年來(lái).我國(guó)食用菌產(chǎn)業(yè)的現(xiàn)狀與未來(lái)［J］.中國(guó)食用菌，2000，19（4）：3-5.

［2］于富強(qiáng)，肖月芹，劉培貴.野生粗柄側(cè)耳的生物學(xué)特性及其人工栽培［J］.食用菌學(xué)報(bào)，2005，12（3）：33-37.

［3］張金霞.中國(guó)食用菌菌種學(xué)［M］.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2011：129.

［4］杜秉海.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)［M］.北京：北京農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，1994：226.

［5］王明才，于清偉，安秀榮，等.灰樹花泰山-1生物學(xué)特性研究［J］.山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，46（6）：73-75.

［6］王慶武，蘭玉菲，安秀榮.泰山赤靈芝菌株生物學(xué)特性研究［J］.山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，47（11）：64-67.

［7］楊菁，李洪榮，蔡丹鳳，等.無(wú)孢平菇的生物學(xué)特性研究［J］.食用菌學(xué)報(bào)，2010（增刊）：53-56.

Identification and Optimization on Mycelial Growth of Pleutotus ostreatus Variant Strain

YU Qing-wei，AN Xiu-rong，WANG Qing-wu，LAN Yu-fei
（Tai'an Academy of Agriculture Sciences，Tai'an 271000，China）

The effects of different carbon source，nitrogen source，temperature and pH on the mycelial growth of variant strain Taishan-20BY were studied in this paper.The results showed that the suitable temperature for mycelial growth was 24℃-26℃，the suitable pH was 6-7，the suitable carbon source was glucose and the suitable nitrogen source was peptone.The most appropriate culture media was glucose 20g·L-1，peptone 10g·L-1，KH2PO43g·L-1，MgSO40.5g·L-1.

Pleurotus ostreatus；variant strain；identification；carbon and nitrogen source

S646.1

A

1003-8310（2016）03-0040-04

10.13629/j.cnki.53-1054.2016.03.009

國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)（食用菌）產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)（CARS-24）。

于清偉（1983-），男，本科，農(nóng)藝師，主要從事食用菌育種、馴化栽培、病蟲害防控技術(shù)研究。E-mail：zsztyqw@126.com

2016-03-18