杜慶兵，弓建芳，張東超，李小慧，高珂珂，林靜，金天明

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天津某規(guī)?；i場(chǎng)一例仔豬水腫病的診斷分析

杜慶兵，弓建芳，張東超，李小慧，高珂珂，林靜，金天明通信作者

（天津農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)與醫(yī)學(xué)學(xué)院，天津300384）

2015年9月于天津某規(guī)?；i場(chǎng)發(fā)現(xiàn)疑似仔豬水腫病病例，經(jīng)無(wú)菌采集病變明顯的組織器官，通過(guò)細(xì)菌分離與培養(yǎng)、鏡檢、生化鑒定、病毒培養(yǎng)等實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法進(jìn)行綜合診斷，同時(shí)結(jié)合病豬的流行病學(xué)調(diào)查、臨床癥狀和病理剖檢變化，最終確診為仔豬水腫病。藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明,該分離株大腸桿菌對(duì)頭孢唑啉、多西環(huán)素等藥物高度敏感。該結(jié)果為仔豬水腫病的臨床快速診斷和用藥提供了借鑒。

仔豬水腫病；分離與培養(yǎng)；病理剖檢；生化鑒定；藥敏試驗(yàn)

仔豬水腫?。╬iglet edema disease，PED）是由溶血性大腸桿菌引起的仔豬腸毒血癥，以仔豬全身或四肢麻痹、面部水腫為主要特征，又稱豬胃腸水腫病[1-2]。該病發(fā)病率雖不高，但病死率高達(dá)85％，主要危害斷奶仔豬，常給豬場(chǎng)造成較大的經(jīng)濟(jì)損失[2-3]。

1 臨床癥狀

2015年9月，天津某規(guī)?；i場(chǎng)一頭35日齡左右的斷奶仔豬突然發(fā)病，病豬上下眼瞼、面部和下頜水腫，初期體溫略高、精神沉郁，食欲下降，呼吸快而淺；隨后，呼吸慢而深，繼而病豬四肢無(wú)力，共濟(jì)失調(diào)，部分豬側(cè)臥，肌肉震顫，四肢劃水狀動(dòng)作，最終抽搐而亡。

2 病理剖檢

剖檢瀕死豬可見(jiàn)心包、胸腔和腹腔均有淡色積液，空氣中暴露5 min后凝結(jié)成膠胨狀；肺出血、水腫；胃底黏膜水腫、充血、出血，尤以胃大彎水腫明顯；腸黏膜出血，腸系膜淋巴結(jié)彌漫性出血、水腫；肝臟和脾腫大、出血；腦膜充血，大腦皮層水腫。

3 實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)

3.1 方法

3.1.1 抹片鏡檢

無(wú)菌采取病死仔豬的肝、脾、肺、腎、胃、腸系膜淋巴結(jié)抹片，革蘭氏染色，鏡檢。

3.1.2 細(xì)菌分離培養(yǎng)

無(wú)菌采集病死仔豬的心、肝、脾、肺、腎、胃、腸系膜淋巴結(jié)，劃線接種于LB固體培養(yǎng)基，置37 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24 h，觀察并記錄細(xì)菌菌落形態(tài)。用接種環(huán)挑取單個(gè)菌落，接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基和伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基，置37 ℃恒溫箱培養(yǎng)24 h，觀察并記錄細(xì)菌菌落形態(tài)，取單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏染色，在顯微鏡下觀察。接種純化的單個(gè)菌落于LB液體培養(yǎng)基中擴(kuò)大培養(yǎng)，4 ℃保存，備用。

3.1.3 生化試驗(yàn)

對(duì)分離純化的細(xì)菌培養(yǎng)物進(jìn)行糖發(fā)酵試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)、枸櫞酸鹽試驗(yàn)、靛基質(zhì)試驗(yàn)、接觸酶試驗(yàn)、尿素酶試驗(yàn)、M-R試驗(yàn)、V-P試驗(yàn)、三鐵糖試驗(yàn)，37 ℃恒溫箱培養(yǎng)24 h，觀察并記錄結(jié)果。

3.1.4 藥敏試驗(yàn)

用滅菌棉簽蘸取稀釋至1～2×1011CFU/mL的菌液，均勻涂滿整個(gè)LB固體平板，待平板晾干后，用無(wú)菌鑷子將抗生素藥敏紙片均勻貼于上述平板上，37 ℃的恒溫箱中倒置培養(yǎng)48 h后，測(cè)量抑菌圈直徑，并根據(jù)判斷標(biāo)準(zhǔn)判定該細(xì)菌對(duì)各種抗生素的敏感性[4]。

3.1.5 病毒培養(yǎng)

無(wú)菌采集腦、心、肝、脾、肺、腎、胃、腸道、腸系膜淋巴結(jié)等病料，經(jīng)PBS液洗3次后液氮研磨，研磨過(guò)程中加入PBS制成勻漿，反復(fù)凍融3次，離心取上清，使其通過(guò)細(xì)菌濾器，將濾液接種于生長(zhǎng)良好的敏感細(xì)胞，觀察是否產(chǎn)生細(xì)胞病變。

3.2 結(jié)果

3.2.1 抹片鏡檢

鏡檢發(fā)現(xiàn)有革蘭氏陰性無(wú)芽胞的短小桿菌。

3.2.2 細(xì)菌菌落和菌體形態(tài)特征

分離菌在LB固體培養(yǎng)基上呈圓形、表面光滑濕潤(rùn)、邊緣整齊、灰白色半透明的中等大小的菌落；麥康凱瓊脂平板上形成圓形、表面光滑、中等大小的紅色菌落；伊紅美藍(lán)瓊脂上形成深黑色、圓形、中等大小、有黃綠色金屬光澤的菌落；三糖鐵瓊脂斜面和底部都變黃，產(chǎn)生氣泡，但不產(chǎn)生硫化氫。油鏡下可見(jiàn)短桿狀、兩端鈍圓、散在或成雙存在，無(wú)芽孢（圖1）。分離菌與大腸桿菌的菌落特征和菌體形態(tài)特性一致。

3.2.3 生化特征

該分離菌株能發(fā)酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖、山梨糖、甘露醇、木糖，均產(chǎn)酸產(chǎn)氣；M-R試驗(yàn)陽(yáng)性，V-P試驗(yàn)陰性，吲哚試驗(yàn)陽(yáng)性，靛基質(zhì)試驗(yàn)陽(yáng)性，不利用枸櫞酸鹽，接觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性，尿素酶試驗(yàn)陰性，不產(chǎn)生硫化氫（表1）。分離菌株與大腸桿菌的生化特性一致。

表1 分離菌株的生化試驗(yàn)結(jié)果

注：糖發(fā)酵試驗(yàn)中，⊕表示產(chǎn)酸產(chǎn)氣；＋表示產(chǎn)酸不產(chǎn)氣；－表示不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。其他試驗(yàn)中，＋表示陽(yáng)性；－表示陰性

3.2.4 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

分離株細(xì)菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示：對(duì)頭孢唑啉、多西環(huán)素、卡那霉素、氯霉素、呋喃唑酮高度敏感；對(duì)丁胺卡那、頭孢他啶、氧氟沙星、阿米卡星為中度敏感藥；對(duì)多黏菌素B、復(fù)方新諾明、環(huán)丙沙星不敏感；對(duì)四環(huán)素、青霉素耐藥（表2）。

表2 分離菌株的藥敏試驗(yàn)結(jié)果 mm

注：抑菌圈直徑＜15 mm為不敏感；15 mm≤≤20 mm為中度敏感；＞20 mm為高度敏感

3.2.5 病毒培養(yǎng)結(jié)果

顯微鏡下均未觀察到細(xì)胞病變。

4 小結(jié)與討論

根據(jù)發(fā)病豬的流行病學(xué)、臨床癥狀和病理剖檢變化，該病豬表現(xiàn)出仔豬水腫病的典型特征。實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果表明，分離菌株與大腸桿菌的形態(tài)特性一致；同時(shí)，將病料濾液接種細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)后未發(fā)現(xiàn)細(xì)胞病變，表明病豬未感染病毒。因此，可確診該豬病為仔豬水腫病。

大腸桿菌是條件性致病菌，斷奶仔豬在外界環(huán)境改變、更換飼料以及母源抗體消失等應(yīng)激條件下可誘發(fā)本病。由于養(yǎng)豬生產(chǎn)中抗生素的濫用，仔豬發(fā)病時(shí)最好先分離細(xì)菌并進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，采用有效的藥物和適當(dāng)劑量以提高治療效果[5]。

隨著規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)飼養(yǎng)密度的增加，豬缺乏運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致抵抗力下降，如不注意環(huán)境衛(wèi)生，豬很容易被細(xì)菌感染，因此，豬場(chǎng)日常應(yīng)保持圈舍清潔干燥，定期消毒，減少疾病的發(fā)生[6]。

參考文獻(xiàn)：

[1] 侯學(xué)英，蘇文華. 仔豬水腫病病原的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J]. 畜牧與飼料科學(xué)，2010，31（4）：114-116.

[2] 劉國(guó)平，吳斌，劉夢(mèng)元，等. 致仔豬水腫病大腸桿菌的分離、鑒定及生物學(xué)特性[J]. 中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2005，25（1）：31-33.

[3] Oanh T K，Nguyen V K，De Graxe H，et al. Protection of piglets against edema disease by maternal immunization with stx2e toxoid [J].，2012，80（1）：469-473.

[4] 中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì). WS/T125-1999 紙片法抗菌藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)[S]. 北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，1999.

[5] 郭伶，胡貴武，魏鳳靜. 仔豬水腫病病原菌的分離與鑒定[J]. 黑龍江畜牧獸醫(yī)，2014（6）：84-85.

[6] 陸紅霞，袁勛俊，顧紅標(biāo)，等. 斷奶仔豬大腸桿菌病的病例報(bào)告[J]. 中國(guó)畜牧獸醫(yī)文摘，2012，28（4）：161.

Diagnostic Analysis of Piglet Edema Disease from a Large Scale Pig Farm in Tianjin

DU Qing-bing, GONG Jian-fang, ZHANG Dong-chao, LI Xiao-hui, GAO Ke-ke, LIN Jing, JIN Tian-mingCorresponding Author

（College of Animal Science and Veterinary Medicine, Tianjin Agricultural University, Tianjin 300384, China）

In septemper 2015, the obvious lesion tissues and organs were isolated under sterile conditions from suspicious piglet edema disease from a large scale pig farm in Tianjin. Comprehensive diagnoses which included bacteria separation and culture, microscopy, biochemical tests and viral culture were performed. Considering the epidemiological investigation, clinical symptoms and pathological changes, it was confirmed that infected pigs suffered from piglet edema disease caused by. The drug sensitivity test revealed that the isolated bacterial strain was highly sensitive to cefazolin and doxycycline. The diagnosis results provide the reference for rapid diagnosis and clinical medication of the piglet edema disease.

piglet edema disease; separation and culture; pathological anatomy; biochemical test; drug sensitivity test

S828.9

A

1008-5394（2016）03-0055-02

2016-04-23

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目“mTERT與TYR啟動(dòng)子聯(lián)合調(diào)控HN基因溶瘤腺病毒的構(gòu)建及其對(duì)黑色素瘤靶向治療的研究”（31572492）；天津市獸醫(yī)生物技術(shù)優(yōu)秀科研創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)資助項(xiàng)目（TD12-5019）；國(guó)家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目“規(guī)?；i場(chǎng)主要細(xì)菌性傳染病的監(jiān)測(cè)及敏感藥物篩選”（201510061005）

杜慶兵（1991-），男，河南開(kāi)封人，本科在讀，主要從事動(dòng)物醫(yī)學(xué)研究。E-mail：353129329@qq.com。

金天明（1968-），男，內(nèi)蒙古通遼人，教授，博士，研究方向?yàn)榉肿用庖卟±韺W(xué)。E-mail：jtm680@163.com。