索淑會，崔海榮，閔　彥，孫志玉，胡成進

濟南地區(qū)946例抗核抗體檢測結(jié)果的臨床分析

索淑會，崔海榮，閔彥，孫志玉，胡成進＊

目的探討濟南地區(qū)臨床就診患者自身抗體的陽性分布情況及在自身免疫病中的臨床意義。方法采集濟南軍區(qū)總醫(yī)院檢測自身抗體標(biāo)本946例。采用間接免疫熒光法（IIF）對抗核抗體（ANA）進行初篩試驗，再采用免疫線性印跡法（LIA）檢測抗核抗體譜（ANAs）進行確證試驗。結(jié)果女性自身抗體的陽性率比男性高；ANA核型以核顆粒型、核均質(zhì)型、胞質(zhì)顆粒型及著絲點型較多；ANAs結(jié)果中以抗Ro-52抗體、抗SS-A抗體、抗SS-B抗體、ACA、AMA-M2較多。結(jié)論女性自身免疫病發(fā)病率較高。ANA與ANAs的聯(lián)合檢測可為自身免疫病的診療提供更全面的依據(jù)。

間接熒光抗體技術(shù)；抗核抗體；自身免疫病

DOI:10.14172/j.issn1671-4008.2016.10.006

近年來，自身免疫病（autoimmune diease，AID）的發(fā)生率呈明顯上升趨勢，其總體發(fā)生率占世界人口的3%～5%。早期診斷和及時治療能有效地控制病情的發(fā)展，保護器官功能，改善患者的生活質(zhì)量［1］。自身抗體是指抗自身細(xì)胞內(nèi)、細(xì)胞表面和細(xì)胞外抗原的免疫球蛋白，血液中存在高效價的自身抗體是自身免疫病的重要特征之一，某些自身免疫病伴有特征性的自身抗體（譜）。自身抗體檢測在自身免疫病的診斷、治療、病情監(jiān)測及早期預(yù)防過程中發(fā)揮越來越重要的作用。目前國內(nèi)外檢測自身抗體的常用方法有以下三種：（1）間接免疫熒光法（IIF）檢測抗核抗體（ANA）；（2）線性免疫印跡法（LIA）檢測抗核抗體譜（ANAs）；（3）酶聯(lián)免疫法（ELISA）定量檢測特異性抗體。其中，IIF法用于自身免疫病的初篩。LIA檢測ANAs，有助于進一步檢測特異性抗體。ELISA可以定量檢測特異性抗體的含量，以便于監(jiān)測病情的變化［2］。由于遺傳基因、飲食結(jié)構(gòu)、環(huán)境因素等方面的不同，造成ANA在不同的人群中陽性率有所差異［3］。為了深入了解濟南地區(qū)自身抗體的分布情況和特點，筆者收集2015年1月—2016年5月門診和住院自身抗體檢測結(jié)果，針對ANA及ANAs的結(jié)果進行回顧性分析，以了解自身抗體在臨床就診者的分布及其相關(guān)臨床意義。

1　資料與方法

1.1一般資料選擇2015年1月—2016年5月濟南軍區(qū)總醫(yī)院門診和住院檢測自身抗體的患者946例；男368例，年齡1～99歲；女578例，年齡1～99歲。在946例ANA檢測中，有423例患者同時做ANAs；男170例，女253例。均使用BD公司生產(chǎn)的含有分離膠+促凝劑真空采血管，采集患者5 ml全血，分離血清。

1.2方法（1）IIF檢測?；|(zhì)片購自德國歐蒙醫(yī)學(xué)實驗診斷公司。全自動間接免疫熒光和酶聯(lián)免疫分析系統(tǒng)QuantaLyser購自美國INOVA公司。Quanta Lyser將標(biāo)本自動稀釋加樣（同時設(shè)陰、陽對照）、孵育、清洗、加入熒光標(biāo)記二抗、孵育、清洗。最后人工加甘油封片在歐蒙熒光顯微鏡下判讀結(jié)果。ANA≥1∶100為陽性。（2）LIA檢測ANAs。免疫印跡條（以下簡稱：膜條）試劑盒及全自動免疫印跡分析儀EuroBlotMasterⅡ購自德國歐蒙醫(yī)學(xué)實驗診斷公司。免疫印跡條包被的特異性抗原包括：nRNP/Sm、Sm、SS-A、Ro-52、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1、著絲點蛋白 B（CENP B）、增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）、雙鏈DNA （dsDNA）、核小體 （Nukleosomen）、組蛋白（Histone）、核糖體P蛋白（Rib.P-Prot.）、線粒體-M2（AMA-M2）。免疫印跡分析儀將稀釋血清（稀釋度：1∶100）與膜條溫育30 min；洗滌3次（5 min/次）；加入1.5 ml酶標(biāo)記的抗人IgG，溫育30 min；洗滌3次（5 min/次）；加入底物15 min；蒸餾水清洗膜條終止反應(yīng)。采用配套軟件EUROBlotCamera進行結(jié)果掃描分析。結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)：0～5為陰性（-）；6～10為可疑；11～25為弱陽性；26～50為陽性 （+）；51～256為強陽性（+++）。

1.3統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS for Windows 13.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。資料的比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1946例患者的自身抗體總陽性率在946例患者中，IIF檢測ANA陽性患者為203例，陽性率為21.5% （203/946）。其中男性ANA陽性患者42例，陽性率11.4%（42/368），女性患者ANA陽性161例，陽性率為27.9%（161/578），兩組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=36.06，P＜0.005）。在946例患者中有593例患者同時檢測ANAs，ANAs陽性患者81例，陽性率為13.7%（81/593）。男性患者170例，ANAs陽性12例，陽性率7.06%（12/170），女性患者423例，ANAs陽性69例，陽性率16.31%（69/423），兩組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=6.938，P＜0.01）。

2.2ANA檢測陽性標(biāo)本核型分析細(xì)胞核顆粒型91例、細(xì)胞核均質(zhì)型45例、胞質(zhì)顆粒型33例、混合核型51例、著絲點型17例、核膜型4例、核點型4例、核仁型5例、少見核型2例。結(jié)果見圖1。

2.3特異性抗核抗體陽性率分布15種特異性抗體在就診人群中陽性率有差異，其中抗Ro-52抗體、抗SS-A抗體、抗SS-B抗體陽性率最高，陽性率分別為11.58%、8.98%、4.49%?？笿o-1抗體最低。結(jié)果見圖2。

圖 1　抗核抗體核型分布情況

圖 2　抗核抗體譜中特異性自身抗體陽性率分布

3　討論

自身抗體對自身免疫病的診斷及鑒別診斷，病情評估與監(jiān)測以及疾病預(yù)警都起到重要作用［4］。該研究對濟南地區(qū)946例自身抗體的檢測結(jié)果進行回顧性分析，ANA陽性率為21.5%。羅雯斌等對浙江省舟山海島地區(qū)11578例自身抗體的檢測結(jié)果進行回顧性分析，ANA陽性率為16.3%［5］。而周仁芳等對2004年—2008年到北京協(xié)和醫(yī)院就診患者102651例的ANA進行回顧性分析時，ANA陽性率為49%［6］。該研究得到的ANA陽性率高于羅雯斌等的研究，低于周仁芳等的研究。筆者認(rèn)為結(jié)果的差異可能有三點原因：（1）周仁芳等研究的就診人群中自身免疫病患者比例較高，而且是大樣本分析。（2）與效價判斷的主觀因素有關(guān)。目前國內(nèi)對ANA陽性判讀還未統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)和標(biāo)準(zhǔn)化報告程序，是造成各地ANA陽性率產(chǎn)生差異的重要因素。（3）與遺傳基因、飲食結(jié)構(gòu)、環(huán)境因素有關(guān)。羅雯斌等人的研究是南方人群，且在海島生活的比例較大，這種遺傳、飲食以及環(huán)境因素可能對自身免疫病發(fā)病率產(chǎn)生一定的影響。

該研究分析表明，女性ANA陽性率明顯高于男性陽性率（27.9%/11.4%）。該研究結(jié)果與周仁芳及羅雯斌的研究具有一致性。值得注意的是，老年女性體內(nèi)可能會產(chǎn)生生理性自身抗體，這種自身抗體不會引起自身免疫病，會導(dǎo)致老年女性ANA陽性，但是ANAs陰性［7］。女性ANA陽性率較高的原因可能與女性遺傳和激素水平有關(guān)。研究表明，女性的雌激素水平與自身免疫病的發(fā)生具有重要聯(lián)系。青春期女性及更年期女性是自身免疫病的高發(fā)人群。青春期女性的雌激素由低變高，而更年期的女性雌激素水平由高變低［8］。筆者認(rèn)為，雌激素對自身免疫病的發(fā)生具有一定影響，但應(yīng)該還有別的因素與雌激素一起，造成了自身免疫病在女性的高發(fā)病率。這種其他因素的找尋，可以最大程度使女性規(guī)避自身免疫病的發(fā)病風(fēng)險。

研究結(jié)果顯示，抗核抗體的核型以核顆粒型最高、其次是核均質(zhì)型、胞質(zhì)顆粒型及細(xì)胞核著絲點型。15項特異性自身抗體檢測中，抗Ro-52抗體、抗SS-A抗體、抗SS-B抗體、ACA、抗線粒體抗體-M2（AMA-M2）多見。核顆粒型分為核粗顆粒型和核細(xì)顆粒型。核細(xì)顆粒型的熒光模型常見于抗SS-A抗體、抗SS-B抗體，該抗體主要見于原發(fā)性干燥綜合征（pSS），也可見于系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）、原發(fā)性硬化性膽管炎（PBC）及多發(fā)性肌炎（PM）等患者中。核粗顆粒的熒光模型常見于抗Sm抗體、抗nRNP抗體?？筍m抗體對SLE的診斷有較高的診斷特異性，抗nRNP抗體特別是U1-nRNP抗體對結(jié)締組織病的診斷及鑒別診斷具有重要的臨床意義。核均質(zhì)型的熒光模型常見于抗dsDNA抗體、抗組蛋白抗體（AHA）或者抗核小體（ANuA）等。抗dsDNA主要見于SLE患者；AHA可以在多種結(jié)締組織病中出現(xiàn)，特別在藥物性狼瘡（DIL）患者中陽性率較高；ANuA主要見于SLE患者，并且與狼瘡腎有一定的相關(guān)性。細(xì)胞核著絲點型的熒光模型見于抗著絲點抗體（ACA）。該抗體是系統(tǒng)性硬化癥（SSc）的亞型CREST綜合征的特異性抗體。ACA還見于PBC、SLE、RA、SS、關(guān)節(jié)痛等自身免疫病。胞質(zhì)顆粒型的熒光模型見于抗線粒體抗體（AMA）。AMA存在若干亞型（M1-M9）。其中，M2對PBC的診斷及鑒別診斷有很高的特異性。AMA也可以出現(xiàn)在某些感染性疾病、結(jié)締組織病、藥物誘導(dǎo)性疾病及急性肝功能損傷等患者中［2，9］。研究對ANA核型檢出的頻次與相應(yīng)自身免疫病的高發(fā)病率呈正相關(guān)，ANAs與ANA結(jié)果具有高度一致性。本組研究與周仁芳等的研究具有一致性。周仁芳對協(xié)和醫(yī)院自身免疫病患者熒光模式進行回顧性分析得出結(jié)論：單一熒光模式以顆粒型和均質(zhì)型為主，混合熒光模式以顆粒/均質(zhì)型為主。AID組中的SLE、SS、RA、PM/DM（多肌炎/皮肌炎）患者單一熒光模式以顆粒型為主，PBC患者以核膜型、著絲點型為主。不同的自身免疫病可能有相同的核型，同一種自身免疫病也可能有不同的核型。高滴度的抗核抗體對自身免疫病的診斷具有重要意義［6］?？购丝贵w的結(jié)果要結(jié)合臨床癥狀來分析。一般而言，高滴度的抗核抗體伴隨著自身免疫?。灰灿袠O少數(shù)個體，具有高滴度的抗核抗體，但卻沒有任何臨床癥狀，這樣的患者不一定是自身免疫病的患者；也有一部分自身免疫病的患者，具有臨床癥狀，但是ANA是陰性的。周仁芳等在另一項研究中進行了ANA篩查試驗與ANAs確證試驗的相關(guān)性研究。結(jié)果表明，500例檢測自身抗體的試驗中，485例患者ANA與ANAs結(jié)果具有一致性，有15例僅有ANAs特異性抗體陽性，而ANA陰性。這15例中，有8例是臨床確診的自身免疫病患者。所以，臨床檢測中先以ANA進行篩查，再進行ANAs特異性抗體的確證試驗。但是，對于臨床疑似自身免疫病的患者，無論ANA初篩試驗陽性與否，均需進行各種針對特異性抗體的確證試驗；各種特異性抗體的確認(rèn)試驗不能完全替代ANA的篩查試驗［10］。

綜上，該研究對濟南地區(qū)946例自身抗體檢測結(jié)果進行了回顧性分析，發(fā)現(xiàn)，女性自身抗體的陽性率比男性高；ANA核型以核顆粒型、核均質(zhì)型、胞質(zhì)顆粒型及著絲點型較多；ANAs結(jié)果中以抗Ro-52、抗SS-A、抗SS-B抗體、抗ACA、AMA-M2較多。研究結(jié)果與全國其他地區(qū)的回顧性研究有類似處，也有不同?？购丝贵w在女性中發(fā)病率高，需要研究其中致病因素，以提示女性規(guī)避這些風(fēng)險因素。ANA與ANAs的聯(lián)合檢測可為自身免疫病提供更全面的證據(jù)。ANA以及ANAs結(jié)果的解釋，需要結(jié)合就診人群的臨床癥狀進行全面分析，以得出正確的結(jié)論。

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［2016-04-23收稿，2016-05-20修回］［本文編輯：吳蓉］

Retrospective analysis of autoantibodies detection results in 946 specimens from Jinan Area

SUO Shu-hui，CUI Hai-rong，MIN Yan，et al.Department of Laboratory Medicine，the General Hospital of Ji'nan Military Region，Jinan，Shandong 250031，China

ObjectiveTo explore the positive distribution of autoantibodies in the patients of Jinan Region，and investigate their clinical signficance in antoimmune disease.MethodsNine hundred and forty-six patients'（visited to author's hospital）serum samples were detected by indirect immunofluorcscence（IIF）for screening assay of ANAs，further using line immunoassay（LIA）for confirmed assay of specific ANAs.ResultsThe positive rate of female patients was significantly higher than the male patients.The major pure fluorescence patterns were speckled pattern，homogenous pattern，cytoplasmic dynein and centromere pattern.The most frequently occurred antibody were anti-Ro52，anti-SS-A，anti-SS-B，CENP-B and AMA-M2.ConclusionWomen face higher risk of developing autoimmune diseases（AID）.The combination of ANA and ANAs is useful for the diagnosis and treatment of AID.

Indirect immunofluorescence antibody technique；Antinuclear antibodies；Autoimmune disease

R446.6

A

250031山東濟南，濟南軍區(qū)總醫(yī)院實驗診斷科（索淑會，崔海榮，閔彥，孫志玉，胡成進）

胡成進，Email：hcj90@263.com