王興玲，于明新

(中國(guó)醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院，遼寧 沈陽(yáng) 110042)

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苦參堿聯(lián)合胸腺五肽對(duì)卵巢癌腹腔熱化療后大鼠一般狀態(tài)的影響

王興玲，于明新

(中國(guó)醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院，遼寧 沈陽(yáng) 110042)

目的探討苦參堿聯(lián)合胸腺五肽對(duì)經(jīng)腹腔熱化療干預(yù)的卵巢癌大鼠一般狀態(tài)的影響。方法將58只大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和觀察組，最后每組各有23只造模成功。2組造模成功大鼠均進(jìn)行腹腔熱化療(順鉑)并同時(shí)給予胸腺五肽腹腔灌注，觀察組在此基礎(chǔ)上給予苦參堿腹腔灌注，共干預(yù)3周。比較2組大鼠造模前后及干預(yù)后大鼠體質(zhì)量、腹圍，取血檢測(cè)CK、AST、LDH水平和CA125水平。采血完成后處死大鼠，觀察腹腔內(nèi)情況，測(cè)定腹水量及腫瘤質(zhì)量。結(jié)果2組大鼠造模后體質(zhì)量、腹圍及血清酶學(xué)指標(biāo)、CA125水平均明顯高于造模前(P均<0.05)，但是2組間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)；2組大鼠干預(yù)后體質(zhì)量、腹圍及血清酶學(xué)指標(biāo)、CA125水平均明顯高于造模后(P均<0.05)，但觀察組均明顯低于對(duì)照組(P均<0.05)。干預(yù)后觀察組腹水量及腫瘤質(zhì)量均明顯低于對(duì)照組(P均<0.05)。結(jié)論行腹腔熱化療的卵巢癌大鼠給予苦參堿聯(lián)合胸腺五肽，有助于改善卵巢癌大鼠的一般狀態(tài)并抑制腫瘤生長(zhǎng)，為臨床實(shí)踐提供一定理論基礎(chǔ)。

卵巢癌；苦參堿；胸腺五肽；腹腔熱化療；CA125

早期卵巢癌臨床癥狀不明顯，一般到晚期才出現(xiàn)臨床癥狀，發(fā)現(xiàn)較困難，這給該病的診斷帶來(lái)了困難，因此卵巢癌居?jì)D科惡性腫瘤病死率之首。臨床上往往采取綜合治療(手術(shù)結(jié)合化療)，但是其臨床療效仍較差，因此需要尋求一種新的治療方案[1]。腹腔熱化療(intraperitoneal hyperthermic chemotherapy，IPHC)是近年來(lái)出現(xiàn)的一種用于配合手術(shù)治療腹腔惡性腫瘤和腹腔腫瘤復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移的綜合化療方案，針對(duì)卵巢癌屬于熱敏感性腫瘤這一特點(diǎn)且轉(zhuǎn)移方式主要以腹腔內(nèi)局部浸潤(rùn)及種植轉(zhuǎn)移為主，因此非常適合采取IPHC[2-3]?？鄥A是從苦參中提取出來(lái)的一種抗腫瘤活性物質(zhì)，能通過(guò)激活腫瘤凋亡基因的表達(dá)及激活自身免疫活性來(lái)發(fā)揮抗腫瘤活性[4]。胸腺五肽是一種常用的免疫調(diào)節(jié)劑，廣泛用于惡性腫瘤輔助化療[5]。本實(shí)驗(yàn)成功建立卵巢癌大鼠模型，給予IPHC及免疫調(diào)節(jié)劑干預(yù)，旨在進(jìn)一步評(píng)價(jià)該治療方案的可行性及療效，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1　實(shí)驗(yàn)資料

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與卵巢癌細(xì)胞株的選擇選用58只近交系健康雌性Fischer344大鼠，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技有限公司，合格證號(hào)：SCXK(京)2012-0001，周齡8～10周，體質(zhì)量120～150 g；NuTu19卵巢癌細(xì)胞株(上海紀(jì)寧生物科研有限公司)。

1.2主要試劑苦參堿(粉末，純度>99%)由美國(guó)Sigma公司提供；胸腺五肽由深圳翰宇藥業(yè)股份有限公司提供(5 mg/支，白色粉末狀)；順鉑(20 mg/支，白色粉末狀)為齊魯制藥有限公司提供；酶聯(lián)免疫法檢測(cè)試劑盒(CA125)由美國(guó)Sigma公司提供；血清肌酸激酶(CK)、天門冬氨基酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、乳酸脫氫酶(LDH)檢測(cè)試劑盒均為南京建成生物技術(shù)公司提供。

1.3主要儀器Model2300CO2培養(yǎng)箱(美國(guó)Sheldon公司提供)；EG162型低溫離心機(jī)(美國(guó)Sigma公司提供)。

1.4實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1分組按照隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分為觀察組和對(duì)照組，每組29只。大鼠每4只一籠普通顆粒飼料喂養(yǎng)，自由飲水取食，人工控溫20～26 ℃，12 h光照，12 h黑暗。2組大鼠基礎(chǔ)資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1　2組大鼠造模前基本情況比較±s)

1.4.2細(xì)胞培養(yǎng)方案在RPMI-1640培養(yǎng)液(含10%小牛血清)中接種NuTu-19細(xì)胞，放于CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(37 ℃)。

1.4.3Fischer344大鼠上皮性卵巢癌動(dòng)物模型建立方法[6]用胰酶消化所培養(yǎng)出來(lái)的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期NuTu-19細(xì)胞并調(diào)整細(xì)胞計(jì)數(shù)，將細(xì)胞(5×106/只)注射入大鼠腹腔中，然后在SPF條件下飼養(yǎng)，每周測(cè)1次體質(zhì)量，觀察動(dòng)物生長(zhǎng)情況(體質(zhì)量增長(zhǎng))，記錄一般狀態(tài)(毛發(fā)情況、行動(dòng)速度、反應(yīng)速度、飲食情況)，飼養(yǎng)3周后進(jìn)行干預(yù)。

1.4.4干預(yù)方案根據(jù)NuTu-19細(xì)胞的生物學(xué)特征[6]及其體外細(xì)胞藥敏實(shí)驗(yàn)證實(shí)對(duì)順鉑敏感性高[半抑制濃度(IC50)值=0.83 μg/mL]，因此將順鉑注射液濃度用生理鹽水調(diào)整為0.83 μg/mL。2組大鼠均每日給予腹腔注射輔助性免疫增強(qiáng)劑胸腺五肽1 mg/(kg·d)、順鉑20 mL(每周三進(jìn)行，每周1次)，灌注液利用電熱恒溫水浴箱一次性加熱，使藥液進(jìn)入腹腔時(shí)溫度維持在43 ℃。觀察組在對(duì)照組干預(yù)基礎(chǔ)上給予腹腔注射苦參堿注射液1 mg/(kg·d)?？鄥A、胸腺五肽均溶解于生理鹽水中(1 mg/mL)配成混懸液，現(xiàn)用現(xiàn)配。2組均連續(xù)干預(yù)3周。

1.5檢測(cè)指標(biāo)①造模前后及干預(yù)后測(cè)大鼠體質(zhì)量、腹圍。②造模前后及干預(yù)后抽取靜脈血3 mL，注入玻璃試管中，靜置10 min，3 000 r/min離心10 min，提取血清在-70 ℃保存，按照試劑盒說(shuō)明檢測(cè)CK、AST、LDH水平。③造模前后及干預(yù)后抽取尾緣靜脈血2 mL，將血清1 000 r/min離心20 min后抽取上清液置于試管中，測(cè)定血清CA125水平，具體步驟依據(jù)試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。④采血完成后處死大鼠，觀察腹腔內(nèi)情況，分離瘤體，測(cè)定腹水量及腫瘤質(zhì)量。

2　結(jié)　　果

2.1大鼠造模情況及一般狀態(tài)58只大鼠成功造模46只，其中造模過(guò)程中死亡6只，造模后出現(xiàn)嚴(yán)重腹水導(dǎo)致惡病質(zhì)4只，造模未達(dá)到實(shí)驗(yàn)所需的卵巢癌模型2只。造模過(guò)程中大鼠均出現(xiàn)不同程度的腹圍增加與食欲減退、毛色暗淡、反應(yīng)力減慢。2組各有23只大鼠造模成功，干預(yù)中對(duì)照組死亡2只、觀察組死亡3只，對(duì)照組完成實(shí)驗(yàn)大鼠21只、觀察組完成實(shí)驗(yàn)大鼠20只。

2.22組造模前后及干預(yù)后體質(zhì)量、腹圍比較2組大鼠造模前體質(zhì)量、腹圍比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)；2組大鼠造模后體質(zhì)量、腹圍均明顯高于造模前(P均<0.05)，但是2組間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)；2組大鼠干預(yù)后體質(zhì)量、腹圍均明顯高于造模后(P均<0.05)，但觀察組均明顯低于對(duì)照組(P均<0.05)。見(jiàn)表2。

表2　2組造模前后及干預(yù)后體質(zhì)量、腹圍比較±s)

注：①與對(duì)照組比較，P<0.05。

2.32組造模前后及干預(yù)后血清酶學(xué)指標(biāo)比較2組大鼠造模前血清酶學(xué)指標(biāo)比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)；2組大鼠造模后血清酶學(xué)指標(biāo)均明顯高于造模前(P均<0.05)，但2組間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)；2組大鼠干預(yù)后血清酶學(xué)指標(biāo)均明顯高于造模后(P均<0.05)，但觀察組均明顯低于對(duì)照組(P均<0.05)。見(jiàn)表3。

2.42組造模前后及干預(yù)后血清CA125水平比較2組大鼠造模前血清CA125水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；2組大鼠造模后血清CA125水平均明顯高于造模前(P均<0.05)，但2組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；2組大鼠干預(yù)后血清CA125水平均明顯高于造模后(P均<0.05)，但觀察組明顯低于對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表3　2組造模前后及干預(yù)后血清酶學(xué)指標(biāo)比較±s,IU/L)

注：①與對(duì)照組比較,P<0.05。

表4　2組造模前后及干預(yù)后血清CA125水平 比較

注：①與對(duì)照組比較，P<0.05。

2.52組大鼠處死后腹腔內(nèi)情況及腹水、腫瘤質(zhì)量比較2組大鼠腹腔內(nèi)均有大量腹水，大網(wǎng)膜增厚并粘連，腹膜、腸管等處均有直徑1～3 mm粟粒狀結(jié)節(jié)，2組均未發(fā)現(xiàn)肝、肺轉(zhuǎn)移；且肉眼觀察發(fā)現(xiàn)觀察組大鼠腸粘連嚴(yán)重程度輕于對(duì)照組。觀察組腹水量與腫瘤質(zhì)量均明顯低于對(duì)照組(P均<0.05)。見(jiàn)表5。

表5　2組干預(yù)后腹水及腫瘤質(zhì)量比較±s)

3　討　　論

卵巢惡性腫瘤約90%來(lái)源于上皮，其主要的轉(zhuǎn)移途徑是腹盆腔內(nèi)播散種植，因該病早期臨床表現(xiàn)不明顯，大部分患者就診時(shí)就進(jìn)入晚期，腹腔內(nèi)已發(fā)生廣泛轉(zhuǎn)移，手術(shù)難以根治，5年生存率只有30%[7]。IPHC近年來(lái)廣泛應(yīng)用于臨床，Ⅱ期以上卵巢癌行減瘤術(shù)后常用該類方法治療[8]。順鉑是有著優(yōu)良臨床使用經(jīng)驗(yàn)的化療藥物，但同時(shí)存在不良反應(yīng)多(骨髓抑制、胃腸反應(yīng)為主)及患者耐受性差的缺點(diǎn)，降低了其臨床療效[9]。苦參堿是從中藥苦參的干燥根中提取的一類生物活性物質(zhì)，其具有較全面且較強(qiáng)的抗腫瘤活性，通過(guò)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化凋亡來(lái)達(dá)到抗腫瘤目的，同時(shí)能很好地抑制腫瘤的浸潤(rùn)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，抑制腫瘤新生血管的形成，可以增強(qiáng)宿主的自身免疫力與抗腫瘤活力，降低腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐藥性，治療過(guò)程中還有一定的止痛效果，可降低化療藥物的不良反應(yīng)，也可以用作腫瘤的預(yù)防性化療[10]。胸腺五肽是人工化學(xué)合成的免疫調(diào)節(jié)劑，是胸腺生成素Ⅱ第32～36位的氨基酸片段，但具有胸腺生成素的活性，胸腺五肽可誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞分化，促進(jìn)T淋巴細(xì)胞亞群發(fā)育成熟并活化，同時(shí)調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞亞群的比例，使之趨于正常[11]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，2組大鼠造模后體質(zhì)量、腹圍及血清酶學(xué)指標(biāo)、CA125水平均明顯高于造模前，但是2組間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；2組大鼠干預(yù)后體質(zhì)量、腹圍及血清酶學(xué)指標(biāo)、CA125水平均明顯高于造模后，但觀察組均明顯低于對(duì)照組。干預(yù)后觀察組腹水量及腫瘤質(zhì)量均明顯低于對(duì)照組。結(jié)果與尹艷英[2]、李盛等[12]研究結(jié)果相同。提示卵巢癌會(huì)導(dǎo)致腹水增加，而免疫調(diào)節(jié)劑能延緩腹水增加，化療藥物能抑制瘤體增生，且免疫調(diào)節(jié)劑能抑制化療藥物所致的肝細(xì)胞損傷。

綜上所述，行腹腔熱化療的卵巢癌大鼠給予苦參堿聯(lián)合胸腺五肽，有助于改善卵巢癌大鼠的一般狀態(tài)并抑制腫瘤生長(zhǎng)，為臨床實(shí)踐提供了一定理論基礎(chǔ)。

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Effects of matrine combined with thymopeptide-5 on general state in rats with ovariancarcinoma treated by intraperitoneal hyperthermic chemotherapy

WANG Xingling, YU Mingxin

(Tumor Hospital of China Medical University, Shenyang 110042, Liaoning, China)

Objective It is to study the effects of matrine combined with thymopeptide-5 on immune function in rats with ovariancarcinoma treated by intraperitoneal hyperthermic chemotherapy. Methods 46 rats which were successfully modelled ovariancarcinoma were randomly divided into two groups: observation group (n=23) and control group (n=23). The rats in both groups were given intraperitoneal hyperthermic chemotherapy (cis-platinum) and thymopeptide-5, whereas the rats in the observation group were given matrine on this basic, the course of treatment were 3 weeks. The waist circumference, weight, ascitic fluid, the weight of tumor mass, liver enzyme and the level of CA125 in the two groups of rats were compared before and after molding and after treatment.Results The level of waist circumference, weight, CA125 and liver enzyme indexes were higher than that before treatment in both groups(P<0.05), but the indexes in the observation group were lower than that in control group (P<0.05). Ascitic fluid, the weight of tumor mass were smaller in the observation group than that in control group after treatment (P<0.05).Conclusion Matrine combined with thymopeptide-5 can improve the general state and inhibit the growth of tumor in rats with ovariancarcinoma treated by intraperitoneal hyperthermic chemotherapy, and provide certain theoretical basis for clinical practice.

ovariancarcinoma; matrine; thymopeptide-5; intraperitoneal hyperthermic chemotherapy; general state; CA125

王興玲，女，碩士，主治醫(yī)師，從事婦科腫瘤方面研究工作。

于明新，E-mail：986193242@qq.com

遼寧省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2013225021)

10.3969/j.issn.1008-8849.2016.29.002

R-332

A

1008-8849(2016)29-3196-03

2016-04-10