亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        新生雞蛋中卵清蛋白、卵黃蛋白的提取、分離及電泳分析

        2016-11-03 05:01:59許朋鄭春輝項(xiàng)煒劉吉珺余蘭馮昆
        保健文匯 2016年12期
        關(guān)鍵詞:工作液電泳新生

        ● 許朋 鄭春輝 項(xiàng)煒 劉吉珺 余蘭 馮昆

        新生雞蛋中卵清蛋白、卵黃蛋白的提取、分離及電泳分析

        ● 許朋1鄭春輝2項(xiàng)煒2劉吉珺2余蘭1馮昆2

        本實(shí)驗(yàn)采用RIPA裂解法裂解雞新生蛋、雞普通蛋中的卵黃蛋白和卵清蛋白,然后采用BCA法對(duì)所提取的蛋白進(jìn)行蛋白定量,測(cè)定相同條件下的卵黃蛋白、卵清蛋白(總蛋白)表達(dá)量的差異。聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)法分析上述卵黃蛋白和卵清蛋白的表達(dá)豐度,從蛋白水平評(píng)價(jià)雞新生蛋、雞普通蛋營(yíng)養(yǎng)價(jià)值之差異,為生活中科學(xué)的選擇雞蛋提供參考價(jià)值和理論依據(jù)。

        卵清蛋白;卵黃蛋白;蛋白種類

        隨著人們生活水平的不斷提高,人們對(duì)直接自己生活的質(zhì)量要求越來越高,而雞蛋中含有好多我們平時(shí)所需要的蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)成分,我們平時(shí)一般每天早上都吃雞蛋補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)。我們所需的主要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)來自于卵清、卵黃蛋白[1]。新生雞蛋與普通雞蛋相比,其中富含的蛋白質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)成分并非完全相同,而新生雞蛋與普通雞蛋的卵清、卵黃蛋白的組成成分和含量也會(huì)存在一些差異。而這二者雞蛋中的卵黃和卵清蛋白的組分差異是什么、以及蛋白的含量差異是多少。蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)成分在新生雞蛋與普通雞蛋之間的差距具體又有多少。此項(xiàng)研究為雞蛋的儲(chǔ)存時(shí)間中卵清、卵黃蛋白的營(yíng)養(yǎng)成分和含量差異提供了一組數(shù)據(jù)。

        1 材料和設(shè)備

        1.1 材料

        雞新生蛋(市場(chǎng)購買)、雞普通蛋 ( 市場(chǎng)購買)、15ml離心管、EP 管、Premixed Protein Maker(Takara)、4×Protein SDS-PAGE Loading Buffer(Takara)、十二烷基磺酸鈉(SDS)、濾紙、甘氨酸、Tris,(除上述特別說明外,其他試劑均購于天津大茂試劑廠,均為分析純。)

        1.2 儀器

        搖床 (上海善志儀器設(shè)備有限公司 )、移液器(Eppendorf)、離心機(jī)(安徽中科中佳有限公司)、TS-2000A脫色搖床(海門市其林貝爾儀器制造有限公司)、PowerPac(Bio-RAD)、酶標(biāo)儀(Therm)、全自動(dòng)凝膠分體系統(tǒng)(Biu-Rad)、細(xì)胞培養(yǎng)孔板(NEST Biotechnology Co.LTD)

        2 實(shí)驗(yàn)方法

        2.1 樣品提取

        將分離后的卵清蛋白和卵黃蛋白各取1ml都加入RIPA裂解液(RIPA裂解液中含有50mmol/L PH7.4的Tris-HCl,150mmol/L NaCl,1%NP40,0.5%脫氧膽酸鈉,0.1%SDS,以及蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑)4ml[2],在冰浴條件下充分混勻上述兩支試管,靜置30min后,在4℃條件下12000rpm高速離心棄沉淀留上清,即得制備好的蛋白樣品原液。制備好的蛋白樣品原液,在﹣20℃條件下保存。

        2.2 蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的制備

        2.2.1 蛋白標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)存液的配置

        稱取20mg牛血清白蛋白(BSA)于一潔凈試管中[3],向上述試管中加入0.8ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液[4],充分震蕩、混勻、溶解至溶液澄清透明,即可配制成25mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)存液。

        2.2.2 蛋白標(biāo)準(zhǔn)工作液的配置

        取20μl 25mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)存液,加入980μl稀釋液,混合均勻后,既得濃度為0.5mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)工作液。

        2.3 BCA工作液的配制

        根據(jù)樣品數(shù)量,按50∶1(體積為50的BCA試劑A與體積為1的BCA試劑B)來配制適量BCA工作液,并充分混勻。在5mlBCA試劑A加100μl BCA試劑B,混勻,配制成5.1ml BCA工作液。新配置的BCA工作液應(yīng)該在24小時(shí)內(nèi)完成測(cè)定。

        2.4 蛋白濃度檢測(cè)

        A.取96孔板的標(biāo)準(zhǔn)品孔,并將標(biāo)準(zhǔn)品按0、1、2、4、8、12、16、20μl孔中,加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)足到20μl,相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)品濃度分別為0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/ml。

        B.將不同濃度的適量體積的樣品加入96孔板的樣品孔。

        C.各孔加入200μl BCA工作液,在37℃中孵育30min。在相同條件時(shí)間下觀察樣品顏色的變化,然后進(jìn)行吸光度測(cè)定,繪制標(biāo)準(zhǔn)品濃度-OD值圖像,既是蛋白濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線,在繪制完成后進(jìn)行相關(guān)性分析,相關(guān)性在0.99以上,相關(guān)性良好,可以作為定量依據(jù)。

        D.用酶標(biāo)儀測(cè)定樣品及標(biāo)準(zhǔn)品A562。

        E.計(jì)算樣品的蛋白濃度:將稀釋相同倍數(shù)的蛋白樣品平行進(jìn)行3次吸光度的測(cè)定取其均值后將相應(yīng)的OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線,即得蛋白測(cè)定液濃度,再乘以稀釋倍數(shù)既得蛋白測(cè)定原樣品濃度。

        2.5 電泳 (Electrophoresis)

        取上述制備好得蛋白樣品原液適當(dāng)稀釋后與4×Protein SDS-PAGE Loading Buffer 按照3:1的比例混合,震蕩均勻,于100℃沸水中水浴加熱5min,蛋白變性,變性后的蛋白樣品等體積上樣,每孔上樣10微升,卵黃、卵清蛋白各做三個(gè)重復(fù),其中,Maker 上樣量為5微升,各孔樣品上樣完畢后準(zhǔn)備電泳。濃縮膠電泳電壓為80V,經(jīng)過約15分鐘后當(dāng)樣品由濃縮膠進(jìn)入分離膠后將電壓調(diào)至120V繼續(xù)電泳,直至溴酚藍(lán)染料至底部電泳結(jié)束。在跑電泳過程中保證內(nèi)液保持在正常水位,電泳結(jié)束后小心取出凝膠,用蒸餾水清洗3次后用染色液染色2小時(shí)(30r/min),然后再用蒸餾水洗滌3次,最后用脫色液在搖床脫色一個(gè)晚上,待條帶清晰透明,放置于成像系統(tǒng)上進(jìn)行照片采集并保存[5]。

        3 結(jié)果與討論

        3.1 結(jié)果

        3.1.1 蛋白的定量分析

        用BCA法測(cè)定好蛋白質(zhì)的含量[9],可以清晰地觀察到溶液顏色變化的深淺,且顏色的變化與蛋白質(zhì)的含量是成正比的[10]。制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,以蛋白質(zhì)含量(mg/ml)為橫坐標(biāo),A(吸光度)為縱坐標(biāo)。同時(shí)還可以根據(jù)吸光值的大小求出待測(cè)蛋白溶液中蛋白質(zhì)的含量。

        3.1.2 電泳分析

        觀察電泳結(jié)果,通過蛋白質(zhì)條帶的變化來分析蛋白質(zhì)的大小,可以清晰地看出卵黃蛋白和卵清蛋白中蛋白種類的多少以及蛋白質(zhì)分子量的峰值。通過與Marker標(biāo)準(zhǔn)條帶的對(duì)照,可以推測(cè)出卵黃蛋白和卵清蛋白中蛋白質(zhì)的分子量。

        3.2 討論

        觀察電泳條帶,可以清楚地看到卵黃蛋白種類多于卵清蛋白種類,且卵黃蛋白和卵清蛋白中蛋白質(zhì)的分子量主要集中在35kD-117kD ,卵黃蛋白的峰值出現(xiàn)在117kD,而卵清蛋白的峰值出現(xiàn)在35kD-49kD。卵黃蛋白在35kD-120kD主要集中有9種蛋白質(zhì),卵清蛋白在19kD,35-117kD主要集中有4種蛋白質(zhì)。

        (作者單位:1遵義醫(yī)學(xué)院;2遵義醫(yī)學(xué)院珠海校區(qū))

        [1]劉建.雞蛋與健康[J].衛(wèi)生與健康,2011,8(3):14.

        [2]王登川,鄭惠玲,劉新光.種組蛋白提取方法的比較,廣東醫(yī)學(xué)院報(bào),2015,333(5):538-541.

        [3]Li G,Huang H,Yu B,Wang Y,Tao J,Wei Y,Li S,Liu Z,Xu Y,Xu R,2016,A Bioscaffolding Strategy for hierarchical zeolites with a nanotube-trimodal network,Chemical science,7(2):1582-1587

        [4]Niu Z,Yu C,He X,Zhang J,Wen Y,2017,Salting-out assisted liquid-liquid extraction combined with gas chromatography-mass spectrometry for the determination of pyrethroid insecticides in high salinity and biological samples,journal of pharmaceutical and biomedical analysis

        [5]Zastrozhin MS,Brodyansky VM,Skryabin VY,Grishina EA,Ivashcheko DV,Savchenko LM,Kibitov AO,Bryun EA,Sychev DA,2017,Pharmacodynamic genetic polymorphisms affect adverse drug reactions of haloperidol in patients with alcohol-use disorder,Pharmacogenomics and personalized medicine,10:209-215

        [6]Zhang S.,Zhang C.,Qiao Y.,Xing L.,Kang D.,Khan I.A.,Huang M.,Zhou G.,2017,Effect of Flavourzyme on proteolysis,antioxidant activity and sensory qualities of Cantonese bacon,Food Chem,15(237):779-785

        [7]郭宏儒,賀代群,棕殼、白殼雞蛋的蛋清、蛋黃蛋白質(zhì)聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)分析[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào),1988,19(2):91-94.

        [8]王興金.雞蛋卵黃蛋白聚丙烯酰胺凝膠電泳分析[J].江西畜牧獸醫(yī)雜志,1993,2:16-18.

        [9]韓富亮,袁春龍,郭安鵲,張予林,李運(yùn)奎.二喹啉甲酸法(BCA)分析蛋白多肽的原理、影響因素和優(yōu)點(diǎn)[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2014,40(11):202-207.

        [10]陳曉梅,劉雅文,程熠,孫靜,李勇,王韶.考馬斯亮藍(lán)法蛋白定量標(biāo)準(zhǔn)曲線穩(wěn)定性觀察[J].中國公共衛(wèi)生,2006,22(3):380-381.

        Extraction, separation and electrophoresis analysis of egg albumin and yolk protein in newborn eggs

        Xu P.1Zheng C.H.2Xiang W.2Liu J.J.2Yu L.1Feng K.2

        in this experiment by using RIPA cracking cracking chicken eggs, in the ordinary chicken egg yolk protein and the new ovalbumin, then using the BCA method for protein extraction of proteins by quantitative, determination of the same conditions of yolk protein, egg albumin (total) protein expression differences.Polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) method to analysis the yolk protein and the expression of ovalbumin abundance, from chicken new eggs, chicken protein level evaluation difference of ordinary eggs nutrition value, provide reference for the choice of the eggs of the life science value and theoretical basis.

        ovalbumin ; The yolk protein; Types of protein

        猜你喜歡
        工作液電泳新生
        重獲新生 庇佑
        中國慈善家(2022年1期)2022-02-22 21:39:45
        輔助陽極在輕微型廂式車身電泳涂裝中的應(yīng)用
        HSWEDM加工中工作液性能變化及其對(duì)電極絲損耗影響的研究
        堅(jiān)守,讓百年非遺煥新生
        海峽姐妹(2017年7期)2017-07-31 19:08:23
        PPG第四屆電泳涂料研討會(huì)在長(zhǎng)沙成功舉辦
        上海建材(2017年4期)2017-04-06 07:32:03
        改良的Tricine-SDS-PAGE電泳檢測(cè)胸腺肽分子量
        新生娃萌萌噠
        視野(2015年4期)2015-07-26 02:56:52
        裂縫性致密儲(chǔ)層工作液損害機(jī)理及防治方法
        新生改版
        中國記者(2014年1期)2014-03-01 01:37:29
        電火花成形機(jī)床工作液泵變頻控制技術(shù)的研究
        精品久久香蕉国产线看观看亚洲| 成人无码视频在线观看网站| 亚洲国产精品成人久久av| 国产白浆流出一区二区| 精品人妻中文av一区二区三区| 又色又爽又高潮免费视频观看| 国产精品-区区久久久狼| 国产精品麻豆A在线播放| 免费人成网在线观看品观网 | 粗大的内捧猛烈进出看视频| 亚洲啪av永久无码精品放毛片| 久久无码人妻一区二区三区午夜| 国产精品福利小视频| 久久久久无码精品国| 一本色道久久亚洲精品| 97色伦图片97综合影院| 国产美女精品一区二区三区| 老湿机香蕉久久久久久| 69av视频在线| 亚洲女同恋中文一区二区| 真实夫妻露脸自拍视频在线播放| 成人做受黄大片| 欧美激情a∨在线视频播放| 国产午夜精品一区二区三区视频| 日韩极品免费在线观看| 亚洲一区二区三区中国| 开心五月激情综合婷婷| 一区二区三区日韩亚洲中文视频| 久久久久久人妻一区精品| 免费视频一区二区三区美女| 强d乱码中文字幕熟女免费| 国产又色又爽又黄的| 亚洲无码一二专区| 国产亚洲精品一区二区在线播放| 久久婷婷五月综合色奶水99啪| 国产农村妇女精品一二区| 欧美性猛交xxxx乱大交蜜桃| 中文亚洲第一av一区二区| 亚洲av色欲色欲www| 亚洲乱码中文字幕综合| 欧美在线播放一区二区|