陳曉英 ，馬金英 ，宋天增 ，唐建華 ，趙彥玲 ，任子利 ，朱彥賓 ，王良潤

（1.西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，西藏 拉薩 850009；2.西藏自治區(qū)畜牧總站，西藏 拉薩 850000；3.西藏農(nóng)牧學(xué)院動物科學(xué)學(xué)院，西藏 林芝 860000；4.西藏牧樂農(nóng)業(yè)科技有限公司，西藏 拉薩 850009）

不同稀釋液對藏豬精液4℃保存效果的影響

陳曉英1，馬金英1，宋天增1，唐建華2，趙彥玲3，任子利3，朱彥賓1，王良潤4

（1.西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，西藏 拉薩 850009；2.西藏自治區(qū)畜牧總站，西藏 拉薩 850000；3.西藏農(nóng)牧學(xué)院動物科學(xué)學(xué)院，西藏 林芝 860000；4.西藏牧樂農(nóng)業(yè)科技有限公司，西藏 拉薩 850009）

為探討不同精液稀釋液對4℃保存藏豬精液的效果，保證優(yōu)良藏豬種公豬精液的合理、高效利用，該試驗選用5種常用的豬精液常溫保存稀釋液，并在藏豬精液4℃保存至第5天時檢查藏豬精子活力、精子畸形率、精子頂體完整率、精子質(zhì)膜完整率等。結(jié)果表明，在精液保存過程中，2號液對藏豬精液的保存效果最佳，精子活力在保存至第5天時仍然保持在0.54，且藏豬精子活力、精子畸形率、精子頂體完整率、精子質(zhì)膜完整率均高于其余4組（P＜0.05）。該試驗研究初步篩選了4℃保存藏豬精液的稀釋液，為今后藏豬精液的生產(chǎn)應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。

稀釋液；藏豬精液；4℃環(huán)境；精液品質(zhì)

藏豬主要分布于雅魯藏布江流域中游河谷區(qū)和藏東三江流域中游海拔為3 500 m左右的氣候條件惡劣的高原地帶，是我國唯一的高原豬種［1-2］。藏豬具有肉質(zhì)優(yōu)良、耐嚴(yán)寒、耐粗飼、抗逆性強等優(yōu)點。為降低養(yǎng)豬成本，可用藏豬在抗病性和適應(yīng)性等方面優(yōu)良的遺傳資源改良外種豬及其他地方豬的遺傳結(jié)構(gòu)［3］。

開展藏豬人工授精技術(shù)的應(yīng)用不僅可以提高優(yōu)良藏豬種公豬的利用率、提高母豬的受胎率和產(chǎn)仔數(shù)，而且可以減少種公豬的飼養(yǎng)頭數(shù)，達到降低生產(chǎn)成本的目的。同時，還可以避免通過交配傳播疾病，從而提高養(yǎng)豬生產(chǎn)的經(jīng)濟效益。豬精液的保存有液態(tài)保存和冷凍保存2種，目前在生產(chǎn)實踐中應(yīng)用的仍為液態(tài)保存中的常溫［4］或冷藏保存。冷凍可長期保存豬的精液，但該技術(shù)因解凍后人工授精的受胎率很低［5］而無法推廣應(yīng)用。與冷凍精液相比，常規(guī)液態(tài)保存精液人工授精后具有受胎率高、窩產(chǎn)仔數(shù)高、費用低、操作程序簡單等優(yōu)點［6］。

近年來，隨著豬人工授精技術(shù)的不斷完善，其在集約化、規(guī)?；B(yǎng)豬場中的推廣與應(yīng)用愈來愈廣泛。在高海拔地區(qū)，藏豬集約化、規(guī)?；潭容^低，放牧飼養(yǎng)較多，為適應(yīng)消費者對藏豬肉的大量需求和新建集約化藏豬養(yǎng)殖場對安全快繁技術(shù)的要求，藏豬精液的4℃保存技術(shù)和異地運輸問題越來越受到重視。

為探討不同精液稀釋液對4℃保存藏豬精液的效果以及精液保存中一些基本參數(shù)的變化，保證優(yōu)良藏豬種公豬精液的合理、高效利用，該試驗選用5種目前較常用的豬精液常溫保存稀釋液對藏豬精液進行4℃保存，保存至第5天時檢查藏豬精子活力、精子畸形率、精子頂體完整率、精子質(zhì)膜完整率等，探討常溫保存不同稀釋液對藏豬精液4℃保存效果的影響，以期為藏豬精液的4℃保存技術(shù)和異地運輸?shù)於ɑA(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與材料

1.1.1 實驗動物與試驗地點：實驗藏豬為3～5歲健康種公豬6頭。試驗時間為2015年5—7月，地點在西藏工布江達縣錯高鄉(xiāng)某藏豬養(yǎng)殖專業(yè)合作社、西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所和西藏農(nóng)牧學(xué)院動物科學(xué)學(xué)院。

1.1.2 主要設(shè)備與試劑：動物電刺激采精儀（MDW-1，成都華智開物科技有限公司），倒置熒光顯微鏡（IX73，奧林巴斯），電熱恒溫水槽（DKB-450A，上海森信），變頻冰箱（BCD-649WDVC，海爾）。

1～5號豬用精液稀釋粉，由西藏牧樂農(nóng)業(yè)科技有限公司提供。

新鮮藏豬精液，由西藏工布江達縣錯高鄉(xiāng)某藏豬養(yǎng)殖專業(yè)合作社提供。

1.2 試驗方法與內(nèi)容

1.2.1 精液稀釋液配制：按照說明書，將稀釋粉按比例用雙蒸水稀釋，然后攪拌均勻，并用水浴鍋加熱至與精液等溫，備用。

1.2.2 精液采集及處理：采用速眠新Ⅱ（0.1 mL/kg）肌肉注射麻醉健康藏豬種公豬，用動物電刺激采精儀于3 V、50 mA條件下電刺激法采集健康藏豬精液。

藏豬精液經(jīng)濾紙過濾后保存于保溫杯中，1 h內(nèi)帶回實驗室。經(jīng)過初步檢查，選擇色澤和氣味正常，精子活率在 0.8 以上，密度為 3×108～5×108個/mL的精液用于試驗研究。

1.2.3 精子質(zhì)量評價：精子活力和精子畸形率2項精液常規(guī)性狀參照世界衛(wèi)生組織（WHO）的標(biāo)準(zhǔn)［7］測定，具體方法如下：

精子活力：精液過濾后立即在顯微鏡下觀察精子活力，采用百分制法，直線前進精子數(shù)占總精子數(shù)的百分比為精子活力。

精子畸形率：采用龍膽紫酒精溶液染色法，將精子涂片染色，在400倍顯微鏡下觀察，計算不同視野500個精子中畸形精子所占的比例即為畸形率（取3次計算的平均值）。

精子頂體完整率和精子質(zhì)膜完整率2項精液性狀參照文獻［8］進行評價：

精子頂體完整率：考馬斯亮藍(lán)R250染色法。精子質(zhì)膜完整率：低滲腫脹試驗（HOST）。

1.3 試驗設(shè)計 將每次采集的精液分成3份，按照2∶1的比例緩慢將等溫稀釋液加入精液中，輕輕搖晃混勻。用6層以上紗布包裹后放入培養(yǎng)箱中，17℃平衡2 h后，放入冰箱4℃保存。每隔12 h搖動精液1次，保存至第5天時檢查藏豬精子活力、精子畸形率、精子頂體完整率和精子質(zhì)膜完整率。試驗重復(fù)3次。

1.4 數(shù)據(jù)處理 所得試驗數(shù)據(jù)用Excel進行前期處理，再用SPSS 11.5軟件進行One-way ANOVA方差分析，并進行多重比較，試驗結(jié)果用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，檢驗誤差為5%和1%。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同稀釋液對藏豬精液4℃保存精子活力的影響 第5天時，不同稀釋液對藏豬精液4℃保存精子活力的影響見圖1。由圖1可以看出，用2號精液稀釋液保存藏豬精液4℃保存到第5天時，藏豬精子活力最高，且顯著高于其余4組（P＜0.05）。

圖1 不同稀釋液對藏豬精液4℃保存精子活力的影響

2.2 不同稀釋液對藏豬精液4℃保存精子畸形率、精子頂體完整率和質(zhì)膜完整率的影響 第5天時，不同稀釋液對藏豬精液4℃保存精子畸形率、精子頂體完整率和精子質(zhì)膜完整率的影響見表1。由表1可以看出，該試驗選用5種不同稀釋液研究在溫度、稀釋倍數(shù)等條件相同情況下保存豬精液，用2號稀釋液的藏豬精液保存至第5天時，精子畸形率、精子頂體完整率、精子質(zhì)膜完整率均高于其余4 組（P＜0.05）。

3 討論

豬精液常溫保存時，其稀釋液成分對精液的保存效果至關(guān)重要。精液稀釋后不僅可以擴大容積，還可以為精子代謝提供所需的能量物質(zhì)［9-10］。因此，稀釋液中含有營養(yǎng)物質(zhì)、抗氧化劑、酶和激素等各種成分，能夠維持或延長精子活率［11-16］。該試驗選用5種不同稀釋液研究在4℃、稀釋倍數(shù)相同的條件下保存藏豬精液的效果，結(jié)果表明，2號稀釋液的保存效果最好，精子活力在保存至5 d時還保持在0.54，藏豬精子畸形率、精子頂體完整率、精子質(zhì)膜完整率等均高于其余4組（P＜0.05）。這5種稀釋液均為進口產(chǎn)品，并未注明稀釋液的具體成分，該研究只是根據(jù)說明書進行藏豬精液的稀釋保存，旨在尋找適合于藏豬精液保存的稀釋液，今后可在該基礎(chǔ)上探索進一步改進方法，以提高藏豬精液的4℃保存技術(shù)和異地運輸效果。

表1 不同稀釋液對藏豬精液4℃保存精子畸形率、精子頂體完整率和精子質(zhì)膜完整率的影響 %

4 結(jié)論

該研究初步找到了適合藏豬精液保存的稀釋液，今后可在該基礎(chǔ)上加以改進，以進一步提高藏豬精液的4℃保存技術(shù)和異地運輸效果。

［1］強巴央宗，謝莊，田發(fā)益.高原藏豬現(xiàn)狀與保種策略［J］.中國畜牧雜志，2001，37（6）：46-47.

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［3］周琳，王蜀金.藏豬生理學(xué)研究進展［J］.家畜生態(tài)學(xué)報，2014，35（7）：7-12.

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Preservation Effect of Different Extenders on Tibetan Boar Semen at 4℃

CHEN Xiao-ying1，MA Jin-ying1，SONG Tian-zeng1，TANG Jian-hua2，ZHAO Yan-ling3，REN Zi-li3，ZHU Yan-bin1，WANG Liang-run4
（1.Institute of Animal Science and Veterinary Medicine，Tibet Academy of Agricultural and Animal Husbandry Sciences，Lhasa 850009，China；2.Tibet Animal Husbandry Service Station，Lhasa 850000，China；3.Faculty of Animal Science，Tibet Agricultural and Animal Husbandry College，Nyingchi 860000，China；4.Tibet Mulo Agricultural Sciences and Technology Co.，Ltd.，Lhasa 850009，China）

This study was conducted to investigate the preservation effect of different extenders on Tibetan Boar semen at 4 ℃ and to provide scientific basis for reasonable and high-efficient utilization of excellent Tibetan Boar breeder semen.Five different extenders commonly used for preservation of Tibetan Boar semen in room temperature were selected.The sperm motility,sperm deformity rate，and the integrity rate of sperm acrosome and plasma membrane preserved by the five extenders at the 5thday of preservation period at 4℃were statistically evaluated and compared.The results revealed that the NO.2 extenders exhibited the best preservation effect with the sperm motility of 0.54 at the 5thday of preservation period,and the sperm motility,sperm deformity rate and the integrity rate of sperm acrosome and plasma membrane preserved with NO.2 extenders were higher than those of the semen preserved with the other four extenders （P＜0.05）.This study preliminary selected the appropriate extenders for Tibetan Boar semen used at 4℃and laid the foundation for the production and application of Tibetan Boar semen in the future.

extenders；Tibetan Boar semen；environment at 4 ℃；semen quality

S828.34

A文章順序編號：1672-5190（2016）10-0022-03

2016-09-28

項目來源：西藏自治區(qū)2016年高校青年教師創(chuàng)新支持計劃項目（QCZ2016-47）；院（校）企合作技術(shù)開發(fā)項目（YXQ2015ZZ-01）；西藏自治區(qū)2016年農(nóng)林業(yè)科技成果轉(zhuǎn)化與推廣（農(nóng)牧業(yè)技術(shù)推廣）項目“特色畜禽（藏豬）營養(yǎng)調(diào)控研究”。

陳曉英（1981—），女，助理研究員，碩士，主要從事高原畜禽繁殖技術(shù)研究工作。

宋天增（1980—），男，助理研究員，碩士，主要研究方向為動物繁殖營養(yǎng)調(diào)控與遺傳育種。

（責(zé)任編輯：慕宗杰）