焦　德　路　煒　張學(xué)東

(聊城市人民醫(yī)院乳腺及甲狀腺外科，山東　聊城　252000)

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低氧誘導(dǎo)因子-1α、Delta樣配體4在不同乳腺癌分子亞型組織中的表達(dá)及臨床意義

焦德路煒1張學(xué)東2

(聊城市人民醫(yī)院乳腺及甲狀腺外科，山東聊城252000)

目的探討低氧誘導(dǎo)因子(HIF-)1α、Delta樣配體(DLL)4在不同乳腺癌分子亞型組織中的表達(dá)及臨床意義。方法采用免疫組織化學(xué)法檢測乳腺癌組織〔基底細(xì)胞樣型17例、人表皮生長因子受體(HER)-2過表達(dá)型21例、Luminal A型54例、Luminal B型23例與普通乳腺樣型23例〕與癌旁組織(對照組)HIF-1α、DLL4表達(dá)。結(jié)果115例乳腺癌組織HIF-1α、DLL4分別為70.43%、69.57%，明顯高于對照組(25.00%、22.00%)(P<0.05)，其中基底細(xì)胞樣型、HER-2過表達(dá)型、Luminal A型與Luminal B型乳腺癌組織HIF-1α、DLL4的陽性表達(dá)率均明顯高于對照組(P<0.05)，基底細(xì)胞樣型乳腺癌組織HIF-1α、DLL4的陽性表達(dá)率明顯高于Luminal A型， HER-2過表達(dá)型乳腺癌組織HIF-1α的陽性表達(dá)率明顯高于Luminal A型與Luminal B型(P<0.05)。乳腺癌組織HIF-1α、DLL4表達(dá)與年齡、組織學(xué)分級無明顯的關(guān)系(P>0.05)，與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期具有明顯的關(guān)系，其中中青年乳腺癌患者HIF-1α、DLL4陽性表達(dá)較高，腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者上述因子陽性表達(dá)率更高，Ⅲ/Ⅳ期上述因子陽性表達(dá)率更高(P<0.05))。結(jié)論HIF-1α、DLL4在基底細(xì)胞樣型、HER-2過表達(dá)型乳腺癌組織中的表達(dá)較高，而在Luminal A、B型乳腺癌組織中的表達(dá)較低；其可能與臨床病理特征及預(yù)后狀況有一定的關(guān)系。

HIF-1α；DLL4；乳腺癌

隨著基因芯片技術(shù)與乳腺癌研究的不斷深入，根據(jù)不同分子標(biāo)志物表達(dá)將乳腺癌分子亞型分為基底細(xì)胞樣型、HER-2過表達(dá)型、Luminal A型與Luminal B型。為了充分準(zhǔn)確評估乳腺癌臨床預(yù)后并指導(dǎo)制定個體化治療方案，深入研究不同乳腺癌分子亞型組織的相關(guān)分子標(biāo)志物在指導(dǎo)乳腺癌的診治中具有重要的意義〔1〕。相關(guān)文獻(xiàn)顯示，低氧誘導(dǎo)因子(HIF)-1α、Delta樣配體(DLL)4是決定乳腺癌微環(huán)境狀況的主要分子標(biāo)志物〔2〕。

1　資料與方法

1.1臨床資料選取2012年1月至2015年1月我院乳腺癌患者115例，納入標(biāo)準(zhǔn)：全部患者均具有手術(shù)適應(yīng)證，手術(shù)病理組織學(xué)檢查明確乳腺癌的診斷〔3〕，自愿參加本研究并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：具有手術(shù)禁忌證，術(shù)前接受化療、放療與內(nèi)分泌治療，合并肝腎功能障礙、其他惡性腫瘤與精神性疾病患者。年齡29～78歲，平均(49.8±6.32)歲。腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(≥4枚)61例，無腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移54例，組織學(xué)分級參照美國癌癥聯(lián)合委員會(AJCC)分級標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ級24例，Ⅱ級71例，Ⅲ級20例。根據(jù)雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、人表皮生長因子受體(HER)-2。檢測結(jié)果將患者分為基底細(xì)胞樣型(17例)、HER-2過表達(dá)型(21例)、Luminal A型(54例)與Luminal B型(23例)。同時采集癌旁組織(距癌組織>3 cm處)100例作為對照組。

1.2檢測方法全部乳腺癌組織均采用免疫組織化學(xué)法檢測。①試劑與儀器：兔抗人HIF-1α多克隆抗體、即用型兔抗人DLL4多克隆抗體(中國武漢博士德公司)，KIT-5020即用型快捷免疫組化檢測試劑盒、DAB-0031氨基聯(lián)苯胺顯色試劑盒(福州邁新公司)。②操作步驟：手術(shù)期間采集乳腺癌組織與癌旁組織，全部組織標(biāo)本經(jīng)10%中性甲醛固定，石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，EDTA抗原或0.01 mmol/L檸檬酸鹽緩沖溶液修復(fù)，采用免疫組化法染色，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。

1.3觀察指標(biāo)HIF-1α、DLL4定位于細(xì)胞質(zhì)，陽性反應(yīng)為棕黃色染色，100倍顯微鏡下隨機觀察5個不同視野，每個視野計數(shù)250個細(xì)胞，陽性細(xì)胞比例>75%計4分，50%～75%計3分，25%～50%計2分，<25%計1分，無陽性細(xì)胞計0分；染色強度：無著色計0分，淡黃色計1分，棕黃色計2分，棕褐色計3分，總分=陽性細(xì)胞比例分值+染色強度分值，總分≤2分作為陰性，≥3分作為陽性。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS18.0軟件行χ2檢驗。

2　結(jié)　果

2.1不同乳腺癌分子亞型組織HIF-1α的表達(dá)115例乳腺癌組織HIF-1α的陽性表達(dá)率為70.43(81/115)，明顯高于對照組(25.00%)(χ2=44.18，P<0.05)，其中基底細(xì)胞樣型〔15例(94.12%)〕、HER-2過表達(dá)型〔21例(95.04%)〕、Luminal A型〔30例(53.70%)〕與Luminal B型〔15例(65.22%)〕乳腺癌組織HIF-1α的陽性表達(dá)率均明顯高于對照組(P<0.05)，基底細(xì)胞樣型乳腺癌組織HIF-1α的陽性表達(dá)率明顯高于Luminal A型， HER-2過表達(dá)型乳腺癌組織HIF-1α的陽性表達(dá)率明顯高于Luminal A型與Luminal B型(P<0.05)。

2.2不同乳腺癌分子亞型組織DLL4的表達(dá)115例乳腺癌組織DLL4的陽性表達(dá)率為69.57%(80/115)，明顯高于對照組(22.00%)(χ2=48.53，P<0.05)，其中基底細(xì)胞樣型〔16例(94.12%)〕、HER-2過表達(dá)型〔20例(95.24%)〕、Luminal A型〔29例(53.70%)〕與Luminal B型〔15例(65.22%)〕乳腺癌組織DLL4的陽性表達(dá)率均明顯高于對照組(P<0.05)，基底細(xì)胞樣型、HER-2過表達(dá)型乳腺癌組織DLL4的陽性表達(dá)率均明顯高于Luminal A型與Luminal B型(P<0.05)。

2.3乳腺癌組織HIF-1α、DLL4表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系乳腺癌組織HIF-1α表達(dá)與組織學(xué)分級無明顯的關(guān)系(P>0.05)，與年齡腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期具有明顯的關(guān)系，其中中青年人群、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者HIF-1α陽性表達(dá)率更高，Ⅲ/Ⅳ期DLL4陽性表達(dá)率更高(P<0.05)；乳腺癌組織DLL4表達(dá)與組織學(xué)分級無明顯的關(guān)系(P>0.05)，與年齡、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期具有明顯的關(guān)系，其中中青年人群、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者DLL4陽性表達(dá)率更高，Ⅲ/Ⅳ期DLL4陽性表達(dá)率更高，比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1 。

表1　乳腺癌組織HIF-1α、DLL4表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系〔n(%)〕

3　討　論

目前，關(guān)于乳腺癌的病理原因尚未明確，乳腺癌的個體差異性較高，根據(jù)ER、PR、HER-2表達(dá)的情況將乳腺癌分為4種分子亞型，即基底細(xì)胞樣型(ER-、PR-、HER-2-)、HER-2過表達(dá)型(ER-、PR-、HER-2+)、Luminal A型(ER+或PR+、HER-2-)與Luminal B型(ER+或PR+、HER-2+)。相關(guān)文獻(xiàn)顯示，基底細(xì)胞樣型與HER-2過表達(dá)型乳腺癌的預(yù)后狀況最差，而Luminal A 型乳腺癌的預(yù)后狀況最佳〔4〕。微環(huán)境對細(xì)胞生物學(xué)行為具有重要的調(diào)控作用，當(dāng)細(xì)胞癌變形成后，腫瘤容易產(chǎn)生多種生長因子，降解基膜與細(xì)胞外基質(zhì)，誘導(dǎo)腫瘤新生血管形成，促進腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移與浸潤〔5〕。

DLL4是Notch信號通路配體，在正常人血管結(jié)構(gòu)中幾乎不表達(dá)，但在膀胱腫瘤、腎臟腫瘤與胃臟腫瘤等組織中的表達(dá)明顯增高，促進腫瘤新生血管形成，與腫瘤的生長繁殖具有緊密的關(guān)系〔6〕。DLL4位于血管內(nèi)皮生長因子信號下游，通過激活Notch信號通路，從而擴寬血管腔，增加腫瘤血流灌注量，降低耗氧量，促進腫瘤的生長繁殖。大量研究顯示，DLL4在多種腫瘤組織中的表達(dá)上調(diào)，其在參與腫瘤發(fā)生與發(fā)展中具有重要的作用〔7，8〕。本研究結(jié)果顯示，DLL4在乳腺癌組織中的表達(dá)顯著上調(diào)，預(yù)后欠佳的基底細(xì)胞樣型、HER-2過表達(dá)型乳腺癌組織DLL4的陽性表達(dá)率均明顯高于預(yù)后較佳的Luminal A型與Luminal B型乳腺癌組織，揭示了DLL4表達(dá)可能與預(yù)后狀況具有緊密的關(guān)系，其中DLL4陽性表達(dá)含量越高，其預(yù)后越差，且與相關(guān)文獻(xiàn)〔9〕具有一致性。同時，乳腺癌組織DLL4表達(dá)與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期具有明顯的關(guān)系。因此，其中DLL4陽性高表達(dá)者不僅促進腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，且促進腫瘤臨床分期的進展。另一方面，腫瘤是細(xì)胞異常增殖分化的最終產(chǎn)物，腫瘤組織生長繁殖過快必然導(dǎo)致腫瘤微環(huán)境低氧改變。HIF-1α為細(xì)胞耐受缺氧表達(dá)的主要因子之一。乳腺癌在微氧環(huán)境缺氧期間，HIF-1α通過激活糖酵解酶與葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白，從而促進葡萄糖的轉(zhuǎn)運與攝取，滿足腫瘤缺氧缺血微環(huán)境下的迅速增殖的能量需求〔10〕。相關(guān)文獻(xiàn)顯示，HIF-1α具有促進腫瘤細(xì)胞增殖生長、轉(zhuǎn)移與侵襲的作用，多種實質(zhì)性腫瘤組織HIF-1α表達(dá)均明顯上調(diào)〔11〕。本研究結(jié)果顯示，HIF-1α在乳腺癌組織中的表達(dá)顯著上調(diào)，其中基底細(xì)胞樣型、HER-2過表達(dá)型乳腺癌組織HIF-1α陽性表達(dá)率較高，而Luminal A、B型乳腺癌組織HIF-1α陽性表達(dá)率較低，揭示HIF-1α可能與乳腺癌預(yù)后狀況具有緊密的關(guān)系。DLL4通過促進腫瘤新生血管形成，增加腫瘤細(xì)胞的血流灌注量，從而改變腫瘤的缺氧性改變，促進惡性腫瘤發(fā)展；而HIF-1α通過為腫瘤微環(huán)境缺氧提供能量需求，從而改變腫瘤細(xì)胞缺氧，促進惡性腫瘤發(fā)展。因此，DLL4、HIF-1α通過改變腫瘤細(xì)胞微環(huán)境狀態(tài)，從而促進乳腺癌的發(fā)生發(fā)展。

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〔2016-01-12修回〕

(編輯李相軍)

焦德(1979-)，男，碩士，主要從事乳腺腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移機制研究。

R739

A

1005-9202(2016)17-4248-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.17.055

1婦產(chǎn)科2病理科