朱玉峰　祁　明　于曉東　尹遜天

(遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院普外微創(chuàng)肝膽病區(qū)，遼寧　錦州　121000)

?

肝細(xì)胞癌中轉(zhuǎn)化生長因子β激酶1、核因子-κB和P53的表達(dá)

朱玉峰祁明1于曉東尹遜天

(遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院普外微創(chuàng)肝膽病區(qū)，遼寧錦州121000)

目的檢測(cè)肝細(xì)胞癌中轉(zhuǎn)化生長因子β激酶(TAK)1、核因子(NF)-κB和突變型P53基因(P53)的表達(dá)，分析其臨床意義。方法58例肝細(xì)胞癌術(shù)后存留的蠟塊組織作為觀察組，30例距腫物邊緣大于3 cm的正常肝組織術(shù)后存留的蠟塊組織作為對(duì)照組。應(yīng)用免疫組化SP法檢測(cè)二組中TAK1、NF-κB和P53的表達(dá)。結(jié)果二組中TAK1、NF-κB和P53的陽性率差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。觀察組中TAK1、NF-κB和P53的陽性率均與腫瘤的分化程度、腫瘤最大徑、脈管內(nèi)癌栓密切相關(guān)。相關(guān)分析顯示觀察組中TAK1和NF-κB的表達(dá)呈正相關(guān)性。結(jié)論肝細(xì)胞癌中TAK1、NF-κB和P53高表達(dá)對(duì)腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展均有重要作用。TAK1和NF-κB可能具有正向協(xié)同作用。

肝細(xì)胞癌；轉(zhuǎn)化生長因子β激酶(TAK)1；核因子(NF)-κB；P53；免疫組化

肝細(xì)胞癌是起源于肝細(xì)胞的惡性腫瘤，病變形成過程中可以出現(xiàn)蛋白的表達(dá)異?！?〕。轉(zhuǎn)化生長因子β激酶(TAK)1是絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，又名MAP3K7，屬于絲裂原活化蛋白激酶(MAPKs)中的一種，其在腫瘤中介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路主要是應(yīng)激反應(yīng)、炎癥免疫反應(yīng)，TAK1在腫瘤中常高表達(dá)〔2，3〕。核因子(NF)-κB是一種多向性、多功能的核轉(zhuǎn)錄因子，可以調(diào)控細(xì)胞凋亡和增殖過程，在上皮細(xì)胞癌變過程中發(fā)揮重要作用〔4，5〕。突變型P53基因(P53)高表達(dá)是腫瘤進(jìn)展的重要因素〔6〕。本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)肝細(xì)胞癌中TAK1、NF-κB和P53的表達(dá)，關(guān)注其臨床意義。

1　材料和方法

1.1臨床資料我院行手術(shù)治療的肝細(xì)胞癌患者作為觀察組，共58例，均留取術(shù)后蠟塊組織，年齡47～75歲，平均62.3歲，其中男30例，女28例。均經(jīng)術(shù)后病理醫(yī)師閱片確診。30例距腫物邊緣大于3 cm的正常肝組織術(shù)后存留的蠟塊組織作為對(duì)照組，年齡48～72歲，平均61.7歲，其中男15例，女15例。二組一般資料無明顯差別。

1.2TAK1、NF-κB和P53的檢測(cè)方法免疫組化檢測(cè)應(yīng)用SP法，均由主管技師完成，按說明書操作，做好質(zhì)控。

1.3TAK1、NF-κB和P53的判定方法TAK1和NF-κB以細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，P53以細(xì)胞核中呈現(xiàn)棕黃色為陽性，低倍鏡下選擇上皮細(xì)胞集中的區(qū)域，于400倍下進(jìn)行計(jì)數(shù)，共選擇5個(gè)高倍視野的細(xì)胞，計(jì)算陽性率，并取平均值，以<10%定為陰性，以≥10%定為陽性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SAS6.12軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)或線性相關(guān)分析。

2　結(jié)　果

2.1二組中TAK1、NF-κB和P53陽性率的比較二組中TAK1、NF-κB和P53的陽性率差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

表1　二組中TAK1、NF-κB和P53陽性率的比較〔n(%)〕

2.2觀察組中TAK1、NF-κB和P53陽性率在不同臨床特征中的比較觀察組中TAK1、NF-κB和P53的陽性率均與腫瘤的分化程度、最大徑和脈管內(nèi)癌栓密切相關(guān)。見表2。

表2　觀察組中TAK1、NF-κB和P53陽性率在不同臨床特征中的比較〔n(%)〕

2.3觀察組中TAK1、NF-κB和P53的相關(guān)性TAK1和NF-κB(r=0.46，P<0.05)具有正相關(guān)性。其他指標(biāo)之間未見明顯相關(guān)性(P>0.05)。

3　討　論

肝細(xì)胞癌患者既往或現(xiàn)在有不同原因的慢性肝病史，發(fā)生腫瘤的臨床危險(xiǎn)因素主要是肝硬化〔7，8〕。腫瘤的大小與大體特征與肝硬化有關(guān)，有肝硬化的腫瘤可表現(xiàn)為膨脹性生長，伴有纖維包膜和腫瘤內(nèi)分隔；而無肝硬化的腫瘤趨向于呈巨塊型和無包膜。不同程度的浸潤性生長、門靜脈瘤栓和肝內(nèi)轉(zhuǎn)移在進(jìn)展期腫瘤很常見，并呈現(xiàn)不同的肉眼形態(tài)。腫瘤的另一個(gè)特征是侵犯血管，尤其是門靜脈。肝內(nèi)轉(zhuǎn)移多是由于腫瘤通過門靜脈分支擴(kuò)散所致。組織病理學(xué)顯示病變由類似肝細(xì)胞的腫瘤細(xì)胞組成，間質(zhì)由襯覆單層內(nèi)皮細(xì)胞的血竇樣腔隙組成，與正常的肝組織血竇內(nèi)皮細(xì)胞不同，其內(nèi)皮細(xì)胞免疫組化CD34和F8因子陽性。超微結(jié)構(gòu)觀察顯示在內(nèi)皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞小梁間有基底膜樣結(jié)構(gòu)，這種腔隙似毛細(xì)血管，此種特征也稱為毛細(xì)血管化。腫瘤的病變結(jié)構(gòu)表現(xiàn)為小梁狀、假腺樣和腺泡型、實(shí)性型和硬化型，病變的形成和進(jìn)展中均可見相關(guān)蛋白的表達(dá)失調(diào)〔9〕。本實(shí)驗(yàn)提示TAK1、NF-κB和P53高表達(dá)是肝細(xì)胞癌形成的重要促進(jìn)因素。TAK1近年來研究較多，被認(rèn)為與腫瘤的形成有關(guān)〔10，11〕。生理狀態(tài)下MAPKs主要調(diào)控細(xì)胞生長、分化、凋亡、促進(jìn)細(xì)胞發(fā)育和維持組織內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，病理狀態(tài)下則參與腫瘤性病變，尤其是炎性相關(guān)腫瘤的發(fā)生發(fā)展〔12〕。近來研究顯示TAK1的表達(dá)可能與NF-κB有一定的協(xié)同作用〔13，14〕。NF-κB是近年來發(fā)現(xiàn)的一種轉(zhuǎn)錄因子，其表達(dá)與腫瘤的浸潤、黏附、轉(zhuǎn)移行為密切相關(guān)〔15，16〕。有學(xué)者認(rèn)為NF-κB引起腫瘤細(xì)胞浸潤、黏附、轉(zhuǎn)移的原因是由于NF-κB激活后導(dǎo)致許多黏附分子、血管生成因子及基質(zhì)金屬蛋白酶釋放，同時(shí)促進(jìn)腫瘤性的增殖反應(yīng)引起的〔17，18〕，其作用具有多元性。P53分為野生型和突變型，野生型P53主要通過細(xì)胞周期阻滯、DNA修復(fù)和凋亡等機(jī)制維持正常細(xì)胞的生長，進(jìn)而抑制細(xì)胞的惡性增殖〔19〕。而突變型P53則喪失了其抑癌作用，促使細(xì)胞進(jìn)入增殖周期，使細(xì)胞分化能力下降，凋亡受到抑制，形成永生化，進(jìn)而形成腫瘤〔20，21〕。本文提示TAK1、NF-κB和P53的三種蛋白參與腫瘤的分化過程，三者高表達(dá)使腫瘤的分化發(fā)生障礙，腫瘤細(xì)胞趨于幼稚。三種蛋白高表達(dá)時(shí)腫瘤生長加速，腫瘤的體積增大，浸潤能力增強(qiáng)。三種蛋白高表達(dá)時(shí)參與腫瘤細(xì)胞的脈管浸潤，腫瘤易于遷移及播散。TAK1和NF-κB具有正向協(xié)同作用。其協(xié)同作用機(jī)制有學(xué)者認(rèn)為TAK1去磷酸化負(fù)向調(diào)控腫瘤壞死因子和白細(xì)胞介素1，進(jìn)而誘導(dǎo)NF-κB的激活而形成腫瘤〔22，23〕。但是其具體機(jī)制有待更多實(shí)驗(yàn)證實(shí)。

1Kan G，Dong W.The expression of PD-L1 APE1 and P53 in hepatocellular carcinoma and its relationship to clinical pathology〔J〕.Eur Rev Med Pharmacol Sci，2015；19(16)：3063-71.

2Meng F，Li Y，Tian X，etal.Identification of TGF-β-activated kinase 1 as a possible novel target for renal cell carcinoma intervention〔J〕.Biochem Biophys Res Commun，2014；453(1)：106-11.

3Yao Y，F(xiàn)ang ZP，Chen H，etal.HGFK1 inhibits bone metastasis in breast cancer through the TAK1/p38 MAPK signaling pathway〔J〕.Cancer Gene Ther，2012；19(9)：601-8.

4Cheng D，Zhao L，Zhang L，etal.p53 controls hepatitis C virus non-structural protein 5A-mediated downregulation of GADD45α expression via the NF-κB and PI3K-Akt pathways〔J〕.J Gen Virol，2013；94(2)：326-35.

5Scolastici C，de Conti A，Cardozo MT，etal.β-ionone inhibits persistent preneoplastic lesions during the early promotion phase of rat hepatocarcinogenesis：TGF-α，NF-κB，and p53 as cellular targets〔J〕.Nutr Cancer，2014；66(2)：234-41.

6You J，Yang H，Lai Y，etal.ARID2，p110α，p53，and β-catenin protein expression in hepatocellular carcinoma and clinicopathologic implications〔J〕.Hum Pathol，2015；46(7)：1068-77.

7Purohit V，Rapaka R，Kwon OS，etal.Roles of alcohol and tobacco exposure in the development of hepatocellular carcinoma〔J〕.Life Sci，2013；92(1)：3-9.

8Leng AM，Liu T，Yang J，etal.The apoptotic effect and associated signalling of HSP90 inhibitor 17-DMAG in hepatocellular carcinoma cells〔J〕.Cell Biol Int，2012；36(10)：893-9.

9Zhang L，Wang JN，Tang JM，etal.VEGF is essential for the growth and migration of human hepatocellular carcinoma cells〔J〕.Mol Biol Rep，2012；39(5)：5085-93.

10Wei C，Lai YQ，Li XX，etal.TGF-β-activated kinase-1：a potential prognostic marker for clear cell renal cell carcinoma〔J〕.Asian Pac J Cancer Prev，2013；14(1)：315-20.

11Cao X，Yue L，Song J，etal.Inducible HSP70 antagonizes IL-1β cytocidal effects through inhibiting NF-kB activation via destabilizing TAK1 in HeLa cells〔J〕.PLoS One，2012；7(11)：e50059.

12Yang Y，Xia F，Hermance N，etal.A cytosolic ATM/NEMO/RIP1 complex recruits TAK1 to mediate the NF-kappaB and p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK)/MAPK-activated protein 2 responses to DNA damage〔J〕.Mol Cell Biol，2011；31(14)：2774-86.

13Freudlsperger C，Bian Y，Contag Wise S，etal.TGF-β and NF-κB signal pathway cross-talk is mediated through TAK1 and SMAD7 in a subset of head and neck cancers〔J〕.Oncogene，2013；32(12)：1549-59.

14Greten FR.TAK1：Another mesh in the NF-κB-JNK controlled network causing hepatocellular carcinoma〔J〕.J Hepatol，2011；55(3)：721-3.

15白雪，黃可欣，馬洪喜，等.宮頸癌患者血清和癌組織中NF-κB及TNF-a蛋白的表達(dá)及其意義〔J〕.吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2013；39(4)：773-5.

16丁一，章倩倩，劉翼龍，等.靶向NF-κB信號(hào)通路的胰腺癌治療研究進(jìn)展〔J〕.廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2013；29(3)：341-4.

17夏麗，薛秀珍.NF-κBp65，c-IAP2，Caspase-3在宮頸癌中的表達(dá)及意義〔J〕.現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展，2011；20(5)：353-5.

18李麗，趙江海.NF-κB和MMP-9在胰腺癌中的表達(dá)及意義〔J〕.江蘇醫(yī)藥，2011；37(5)：538-40.

19翟秋嬋，成曉燕.P53及VEGF在子宮頸癌及癌前病變組織中的表達(dá)及意義〔J〕.中國婦幼保健，2014；29(22)：3670-2.

20李妍，張淑蘭.Survivin在卵巢癌組織中的表達(dá)及其與P53表達(dá)相關(guān)性的研究〔J〕.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2009；19(5)：684-6.

21劉鵬，唐躍，李艷春.膽管癌浸潤轉(zhuǎn)移過程中PTEN與P53的表達(dá)及相互關(guān)系的研究〔J〕.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2009；19(11)：1720-2.

22Wang Y，Tu Q，Yan W，etal.CXC195 suppresses proliferation and inflammatory response in LPS-induced human hepatocellularcarcinoma cells via regulating TLR4-MyD88-TAK1-mediated NF-κB and MAPK pathway〔J〕.Biochem Biophys Res Commun，2015；456(1)：373-9.

23Ataie-Kachoie P，Badar S，Morris DL，etal.Minocycline targets the NF-κB Nexus through suppression of TGF-β1-TAK1-IκB signaling in ovarian cancer〔J〕.Mol Cancer Res，2013；11(10)：1279-91.

〔2015-01-22修回〕

(編輯杜娟)

朱玉峰(1985-)，男，碩士，主治醫(yī)師，主要從事普外微創(chuàng)肝膽疾病研究。

R735

A

1005-9202(2016)17-4246-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.17.054

1遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院超聲科