張殿文　李木石　王　清　李　響　吳　迪　邵世博　楊　光　李　偉

(吉林省中醫(yī)藥科學院，吉林　長春　130012)

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豨薟精醇對大鼠的抗栓作用及機制

張殿文李木石1王清李響吳迪邵世博楊光李偉

(吉林省中醫(yī)藥科學院，吉林長春130012)

目的探討豨薟精醇的抗栓作用及其作用機制。方法采用大鼠體內(nèi)、外血栓形成實驗、血小板聚集和黏附功能實驗等方法。結(jié)果豨薟精醇可明顯延長大鼠體內(nèi)血栓形成時間、縮短血栓長度、減輕血栓干重并能顯著抑制大鼠體內(nèi)外血小板集聚和黏附。結(jié)論豨薟精醇具有明顯的抗栓作用，其作用機制可能與抑制血小板聚集和黏附有關(guān)。

豨薟精醇；抗栓作用；血小板聚集；血小板黏附

豨薟草為常用中藥，近年研究結(jié)果表明，家兔靜脈注射豨薟草提取物，可使血栓濕重明顯減輕，其抑制率為51.4%〔1〕；腺梗豨薟草有效組分具有明顯的抗血栓、抑制血小板聚集及抗凝作用〔2，3〕。為闡明豨薟草抗栓作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，本研究從腺梗豨薟中提取出單體成分豨薟精醇，并對其體內(nèi)外抗栓、抗血小板聚集和黏附作用進行了實驗研究。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1動物及藥物Wistar大鼠，體重200～220 g，雌雄均用；購于吉林大學基礎(chǔ)醫(yī)學院動物實驗中心，動物許可證號：SCXK-(吉)2008-0005。豨薟精醇，純度99%，北京大學天然藥物及仿生藥物國家重點實驗室提供。

1.1.2分組大劑量組，取豨薟精醇200 mg，以適量吐溫-80研勻，加0.5%羧甲基纖維素鈉(0.5%CMC-Na)至200 ml，配制成0.1%濃度的混懸液，實驗前將上述混懸液分別稀釋1倍、2倍作為中、小劑量組。陽性對照組藥物為阿司匹林腸溶片，沈陽奧吉娜藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號：080904，規(guī)格25 mg/片。配制方法：取一片阿司匹林研碎，加0.5% CMC-Na至50 ml，配制成0.05%濃度的混懸液。

1.1.3試劑與儀器二磷酸腺苷(ADP)，大連美侖生物技術(shù)有限公司分裝，批號：20080308；羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)，國藥集團化學試劑有限公司，批號：20080406。BT87-3型實驗性體內(nèi)血栓測定儀，包頭醫(yī)學院心血管研究室制造；SPA-4型多功能血小板聚集儀，上?？七_測試儀器廠；體外血栓形成和血小板黏附兩用儀，江蘇無錫醫(yī)療電子儀器廠。

1.2方法

1.2.1對大鼠體內(nèi)血栓形成的影響參照文獻方法〔4〕，取大鼠50只，隨機等分為五組，第一組為溶媒對照組，第二組為阿司匹林10 mg/kg，第三、四、五組分別為豨薟精醇20、10和5 mg/kg，灌胃給藥，每日1次，連續(xù)7 d，體積均為20 ml/kg，溶媒對照組給予等體積0.5% CMC-Na。于末次給藥后1 h將大鼠以3%的水合氯醛0.3 g/kg麻醉，分離頸總動脈。采用BT87-3型實驗性體內(nèi)血栓測定儀，依法測定大鼠體內(nèi)血栓形成時間。

1.2.2對大鼠體外血栓形成的影響參照文獻方法〔5,6〕測定大鼠體外血栓形成。取大鼠50只，隨機等分為五組，第一組為溶媒對照組，第二組為阿司匹林20 mg/kg，第三、四、五組分別為豨薟精醇20、10和5 mg/kg，灌胃給藥，每日1次，連續(xù)5 d，體積均為20 ml/kg，溶媒對照組給予等體積0.5% CMC-Na。于末次給藥后1 h，將大鼠以3%的水合氯醛0.3 g/kg腹腔注射麻醉，腹主動脈取血1.8 ml，立即注入已硅化的體外血栓膠管，將管的兩端對接形成圓環(huán)，放置在體外血栓形成和血小板黏附兩用儀上旋轉(zhuǎn)15 min，測量血栓長度、干重、濕重。

1.2.3對大鼠體內(nèi)血小板聚集性和黏附率的影響〔5，6〕取大鼠50只，隨機等分為溶媒對照組、阿司匹林20 mg/kg組、豨薟精醇20、10和5 mg/kg組，灌胃給藥，每日1次，連續(xù)5 d，體積均為20 ml/kg，溶媒對照組給予等體積0.5% CMC-Na。于末次給藥后1 h，將大鼠以3%的水合氯醛0.3 g/kg腹腔注射麻醉，腹主動脈取血3.6 ml，注入內(nèi)含有0.4 ml 3.8%枸櫞酸鈉的試管中，搖勻，取1 ml放入圓形黏附球內(nèi)，將黏附球插入體外血栓形成和血小板黏附兩用儀上，3 r/min，黏附15 min，于顯微鏡下計數(shù)黏附前后血小板數(shù)，計算黏附率。將余下的血離心1 000 r/min,10 min，慢慢吸取上層富血小板血漿(PRP)，將上述已吸取過PRP再次離心，3 000 r/min，10 min，吸取上層貧血小板血漿(PPP)。取PPP 200 μl放到測試杯內(nèi)(PPP<1萬/mm3)預熱5 min后調(diào)零，再取PRP 200 μl放到測試杯內(nèi)(PRP<20 萬/mm3)預熱5 min后，立即加入0.5 mmol/L的ADP誘導劑10 μl，測定3 min內(nèi)血小板聚集率和最大聚集率。

1.2.4對大鼠體外血小板聚集的影響〔3〕PRP 和PPP制備，采用水合氯醛300 mg/kg麻醉大鼠，腹主動脈取血4.5 ml，以3.8%枸櫞酸鈉按1∶9比例準確抗凝，離心1 000 r/min，10 min，慢慢吸取上層PRP，將剩余血漿再次離心3 000 r/min×10 min，小心吸取PPP。取PPP 200 μl放到測試杯內(nèi)(PPP<1萬/mm3)預熱5 min后調(diào)零，再取PRP 200 μl放到測試杯內(nèi)(PRP<20萬/mm3)預熱5 min后，分別加入蒸餾水、阿司匹林水溶液10、5、2 μg/ml及豨薟精醇水溶液10、5、2 μg/ml 10 μl后，立即加入0.5 mmol/L的ADP誘導劑10 μl，測定血小板最大聚集率。

1.3統(tǒng)計學方法采用SPSS12.0軟件行t檢驗。

2　結(jié)　果

2.1對大鼠體內(nèi)血栓形成的影響豨薟精醇20、10、5 mg/kg和阿司匹林20 mg/kg均可明顯延長大鼠體內(nèi)血栓形成時間〔(22.4±5.94)、(19.7±4.34)、(17.4±3.66)、(19.8±5.36)min〕，與溶媒對照組〔(14.3±2.34)min〕比較，在相同劑量條件下二者作用強度相似，豨薟精醇20 mg/kg抑制血栓形成作用優(yōu)于阿司匹林10 mg/kg，提示豨薟精醇抗栓作用具有一定的量效關(guān)系。

2.2對大鼠體外血栓形成的影響見表1。豨薟精醇20 mg/kg和阿司匹林20 mg/kg均可明顯縮短血栓長度、減輕血栓干重，對血栓濕重有一定的降低，但無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。

表1　對大鼠體外血栓形成的影響±s,n=10)

與溶媒對照組比較：1)P<0.05,2)P<0.01,下表同

2.3對大鼠體內(nèi)血小板聚集性和黏附率的影響見表2。豨薟精醇20、10 mg/kg和阿司匹林20 mg/kg均可明顯降低1、2 min血小板聚集率和最大聚集率，在相同劑量時二者作用相近；豨薟精醇10、5 mg/kg對血小板黏附率有一定降低作用，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

2.4豨薟精醇水溶液對體外血小板聚集的影響豨薟精醇水溶液10、5、2 μg/kg和阿司匹林水溶液10、5 μg/kg對體外血小板最大聚集率均有明顯的抑制作用〔(22.9±12.3)%、(32.0±14.2)%、(42.7±14.4)%、(34.1±15.6)%、(43.1±15.9)%〕，與溶媒對照組〔(58.9±15.1)%〕比較差異顯著(P<0.05)，且在相同劑量時，豨薟精醇作用優(yōu)于阿司匹林(P<0.05)。

表2　對大鼠體內(nèi)血小板聚集性和黏附率的影響±s,n=10)

3　討　論

血栓形成與血小板聚集和黏附密切相關(guān)，本實驗結(jié)果表明，豨薟精醇能明顯延長大鼠體內(nèi)血栓形成時間、縮短血栓長度、減輕血栓干重，同時其能顯著抑制大鼠體內(nèi)外血小板集聚和黏附。由此可見，豨薟草中的單體成分豨薟精醇具有明顯的抗栓作用，其作用機制可能與抑制血小板聚集和黏附有關(guān)。上述研究結(jié)果為豨薟草治療血栓性疾病提供了一定的科學依據(jù)。

1鄭占虎，董澤宏，佘靖.中藥現(xiàn)代研究與應(yīng)用(第五卷)〔M〕.北京：學苑出版社，1998:4634-6.

2侴桂新，金若敏，王崢濤，等.豨薟草抗血栓有效組分篩選研究〔J〕.上海中醫(yī)藥大學學報，2005；19(3)：39-41.

3孟倩超，金若敏，王蚺,等.豨薟草抗血栓組分對血小板聚集的影響〔J〕.上海中醫(yī)藥雜志，2008；42(5)：89-91.

4王洋，劉偉.脈通膠囊對大鼠體內(nèi)血栓形成的影響〔J〕.中醫(yī)藥信息，2005；22(1)：53-4.

5萬素君，鄭君，毛艷英.外傷復明膠囊對血小板粘附功能和血栓形成影響的實驗研究〔J〕.中國中醫(yī)眼科雜志，1997；7(2)：74-6.

6陳奇.中藥藥理研究方法學〔M〕.第2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：505-6.

〔2015-06-12修回〕

(編輯郭菁)

吉林省衛(wèi)生廳2011年課題(2010Z028)

王清(1973-)，女，副主任藥師，主要從事心血管藥理研究。

張殿文(1969-)，男，副主任藥師，主要從事心血管藥理研究。

R28

A

1005-9202(2016)17-4157-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.17.009

1吉林大學生命科學院