張艷秋　王　靜　袁子民　張振秋

遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧　大連　116600

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藥物研究

HPLC法測定都梁丸中阿魏酸的含量

張艷秋王靜袁子民張振秋

遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧大連116600

目的：建立HPLC法測定都梁丸中阿魏酸的含量。方法：采用Diamonsil C18色譜柱，以甲醇-0.1%磷酸(65∶35)為流動相，柱溫35 ℃，測定波長321nm。結(jié)果：阿魏酸進(jìn)樣量在0.0144～0.288μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.9997，平均加樣回收率為98.3%，RSD為1.02%。結(jié)論：該法準(zhǔn)確、快速、重復(fù)性好，可用于都梁丸中阿魏酸的含量測定。

都梁丸；阿魏酸；高效液相色譜法

都梁丸(大蜜丸)由白芷(酒燉)、川芎兩味藥組成，具有祛風(fēng)散寒，活血通絡(luò)的功效，臨床主要用于風(fēng)寒瘀血阻滯脈絡(luò)所致的頭痛，癥見頭脹痛或刺痛、痛有定處、反復(fù)發(fā)作、遇風(fēng)寒誘發(fā)或加重。該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《中國藥典》2015版一部(HPLC法)[1]。目前，藥典都梁丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測項下及文獻(xiàn)報道[2]的都梁丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究中均只測定了白芷中歐前胡素的含量，缺少對川芎中阿魏酸的質(zhì)量控制。本研究采用高效液相色譜法(HPLC法)，測定都梁丸中阿魏酸含量，為都梁丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高提供實驗依據(jù)。

1　儀器與材料

1.1儀器 Agilent1100高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)。

1.2材料阿魏酸對照品(批號：0738-200108中國食品藥品檢定研究院)；甲醇為色譜純，水為娃哈哈純凈水；都梁丸(大蜜丸，市售)。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱：Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相：甲醇-0.1%磷酸(65∶35)；柱溫：35℃，檢測波長：321nm，流速：1.0mL/min。

2.2對照品溶液的制備取阿魏酸對照品適量，精密稱定，置棕色容量瓶中，加70%甲醇制成每1mL含0.0144mg的對照品溶液備用。

2.3供試品溶液的制備取重量差異項下的本品，剪碎，混勻，取約3g，精密稱定，精密加入等量的硅藻土，研勻，取約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70 %甲醇25mL，密塞，稱定重量，加熱回流30min，放冷，再稱定重量，以70%甲醇補足減失的重量，搖勻，靜置，取上清液，濾過，取續(xù)濾液過0.45μm微孔濾膜后置棕色量瓶中，即得。

2.4專屬性試驗按處方量取白芷細(xì)粉，按都梁丸制法制備陰性樣品，再按“2.3”供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液，分別精密吸取供試品溶液、陰性對照液及對照品溶液各10μL，按“2.1”色譜條件依法測定，結(jié)果陰性對照溶液在阿魏酸相同保留時間處無色譜峰干擾，HPLC色譜圖見圖1。

2.5標(biāo)準(zhǔn)曲線制備分別精密吸取“2.2”項下的對照品溶液1.0、5.0、10.0、15.0、20.0μL，按“2.1”項下的色譜條件依法測定，記錄各色譜峰峰面積，以阿魏酸色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)，阿魏酸對照品的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=4710X-0.284，r=0.9997。表明進(jìn)樣量在0.0144～0.288μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6穩(wěn)定性試驗精密吸取同一供試品溶液(批號20150910)，分別在0、2、4、6、8、10 h進(jìn)樣測定，記錄色譜峰面積，結(jié)果供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定，RSD為1.93%。

2.7重復(fù)性試驗取同一批次供試樣品(批號20150910)，按“2.3”供試品溶液制備方法，同法制備6份供試品溶液，分別精密吸取各供試品溶液10 μL依法測定，記錄各色譜峰峰面積，并按外標(biāo)一點法計算含量。結(jié)果平均含量為0.177mg/g，RSD為1.73%。

2.8精密度試驗精密吸取同一供試品溶液(批號20150910)10μL，分別連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖及各色譜峰峰面積，結(jié)果表明該法精密度良好，RSD為1.86%。

2.9回收率試驗取已知含量重量差異項下的本品(0.177mg/g，批號20150910)，剪碎，混勻，取約3g，共取6份，分別精密稱定，各精密加入等量的硅藻土，研勻，取約1g，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，各精密加入阿魏酸對照品溶液(0.085mg/mL)1.0mL，再分別精密加入70%甲醇24mL，其余按“2.3”供試品溶液制備方法制備供試品溶液，并依法測定，結(jié)果見表1，表明回收率符合相關(guān)規(guī)定。

表1　回收率試驗測定結(jié)果

2.10含量測定取20150910、20150915、20150923批樣品，分別按“2.3”供試品溶液的制備方法制備，按“2.1”色譜條件依法測定，按外標(biāo)一點法計算含量，結(jié)果阿魏酸的含量分別為0.177mg/g、0.168mg/g、0.186mg/g(n=3)。

3　討論

3.1本品川芎采用原粉入藥，實驗中參考藥典川芎中阿魏酸的含量測定方法[3]，對供試品溶液的制備方法中所用溶劑(甲醇、70%甲醇)、提取時間(20min、30min、40min)、提取方法(回流、超聲)進(jìn)行了考察，結(jié)果回流法優(yōu)于超聲法，提取30min基本提取完全[4]。本品由于含有大量蜂蜜，實驗中加入了硅藻土，主要目的為降低黏性，易于溶劑浸潤、滲透提取。

3.2文獻(xiàn)對都梁滴丸(白芷、川芎提取后入藥)采用HPLC同時測定了阿魏酸、5-甲氧基補骨脂素、歐前胡素的含量[5]，后續(xù)研究中對于都梁丸也可以嘗試同時測定阿魏酸、歐前胡素、異歐前胡素、氧化前胡素等多種成分，以進(jìn)一步提高本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2015:1325.

[2]曹紅，邢俊波，陳玉敏，等.都梁丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報 2012，28(5)：417-419．

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2015:41.

[4]RP-HPLC法測定天麻頭痛片中阿魏酸含量[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)刊，2011，13(2)：330-331．

[5]席海為，馬強(qiáng)，李強(qiáng)，等.HPLC法同時測定都梁滴丸中阿魏酸、5-甲氧基補骨脂素、歐前胡素[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2011，17(16)：81-85.

(編輯：熊金富)

Determination of Ferullic Acid in Duliang Pills by HPLC

ZHANG YanqiuWANG JingYUAN ZiminZHANG Zhenqiu

Liaoning university of TCM, Dalian 116600,China

Objective To establish HPLC for determining the content of ferullic acid in Duliang Pills.Method An HPLC method was developed.The chromatographic conditions were as follow: Diamonsil C18 column and methanol-0.1% phosphoric acid (65∶35) as mobile phase, The column temperature was 25℃，detection wavelength at 321nm.Result The recovery range of ferullic acid was 0.0144～0.288μg,r=0.9997.The average recovery rate was 98.3% andRSDwas 1.02%.Conclusion The method is simple and accurate,with good repeatability,and can be used for determination of ferullic acid in Duliang Pills.

Duliang Pills; Ferullic acid; HPLC

2016-05-25

張艷秋，女，研究生在讀，研究方向為中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。E-mail:syzhangyanqiu @126.com

袁子民，男，副教授，研究方向為藥物制劑及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。E-mail:yuanzmin@163.com

R286.0

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1007-8517(2016)15-0015-02