天津市寶坻區(qū)藥品檢驗所（301800）王海鳳 李季靜

復方青蒿安乃近片是由安乃近、馬來酸氯苯那敏、青蒿、馬鞭草、羌活、南板藍根、葛根、毛冬青、石膏組成的復方制劑，主要用于發(fā)熱、鼻塞、咽喉腫痛、咳嗽、四肢酸痛及流行性感冒引起的癥狀?，F(xiàn)代藥理研究表明青蒿具有抗菌、消炎、鎮(zhèn)咳和祛痰的作用[1]。為更好地控制該制劑的質(zhì)量，采用HPLC法測定青蒿素的含量，為該制劑的質(zhì)量控制提供了依據(jù)。

1 儀器、試劑及試藥

HPLC LC-2010CHT(日本島津)高效液相色譜儀；電子天平AB265-S(梅特勒)。乙醇為色譜純，水為重蒸水，其余試劑均為分析純；青蒿素購自中國藥品生物制品檢定所，批號：100202-201505。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 色譜分析條件 色譜柱：phenomenex C185μm×250 mm×4.6mm；流動相：甲醇-0.01mol／L磷酸二氫鈉/磷酸氫二鈉緩沖液(60∶40)；流速：1.0ml/min，檢測波長：260nm，柱溫：25℃，進樣量5μl。

2.2 標準曲線測定 精密稱取青蒿素對照品25.01mg，置25ml量瓶中，加乙醇溶解并定容至刻度，搖勻分別精密吸取上述溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0m1分別置10ml量瓶中，補充乙醇至1ml，加4.0ml0.2%氫氧化鈉溶液搖勻，于50℃水浴中反應(yīng)30min。冷卻至室溫，加0.4%冰醋酸至刻度，搖勻，精濾。分別精密量取上述對照品溶液各5μ1，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進行實驗。色譜圖見附圖1，結(jié)果見附表1。

附圖1 青蒿素對照品HPLC圖譜

附圖2 樣品含量測定HPLC圖譜

以進樣量A(μ g)為橫坐標，測得的峰面積積分值C為縱坐標繪制標準曲線，得一過原點的直線，回歸方程為：A=3536372.091C+84117.6,r=0.9994；結(jié)果表明，在此色譜測定條件下，青蒿素在進樣量為0.1012～2.024μg范圍內(nèi)，其色譜峰面積與進樣量呈良好的線性關(guān)系。

2.3 供試品溶液的制備 取本品數(shù)片，研細，精密稱定10g，加入75%乙醇100ml，密塞，精密稱定，45℃水浴加熱回流1.5h，取出樣品，振搖、冷卻,稱定重量，用75%乙醇補足減失的重量，過濾，精密量取濾液0.5ml置10ml量瓶中，補充乙醇至1ml，加4.0ml0.2%氫氧化鈉溶液搖勻，于50℃水浴中反應(yīng)30min。冷卻至室溫，加0.4%冰醋酸至刻度，搖勻，精濾，即得。

2.4 精密度試驗 取同一批號復方青蒿安乃近片樣品溶液，連續(xù)進樣5次，按上述擬定的色譜方法測定樣品中青蒿素的含量，結(jié)果見附表2。由上述結(jié)果可以看出，此方法測定本品中青蒿素的含量，儀器精密度較好。

2.5 重復性試驗 平行取6份樣品(同一批號復方青蒿安乃近片樣品)，按供試品溶液制備方法制得，并按上述擬定的色譜方法測定樣品中青蒿素的含量，結(jié)果見附表3。由上述結(jié)果可以看出，此方法測定本品中青蒿素的含量，重復性良好。

2.6 回收率試驗 取已知含量的本品(2.012/片)1g，共取6份，精密稱定，分別精密加青蒿素對照品溶液(濃度為1.0g/m1)，按上述擬定的供試品溶液的制備方法制備。按上述擬定的青蒿素含量測定方法測定，計算6次平均回收率為98.39%，RSD值為1.09%。結(jié)果表明用此方法測定樣品中青蒿素含量的方法專屬性強。

2.7 樣品含量測定 按照“2.3供試品溶液制備方法”進行制備，分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20μl，進樣，按上述色譜條件測定，結(jié)果測得樣品每片青蒿素的含量均大于2.0mg，色譜圖見附圖2。

附表1 青蒿素含量測定線性關(guān)系試驗結(jié)果

附表2 復方青蒿安乃近片中青蒿素含量測定精密度試驗結(jié)果

附表3 復方青蒿安乃近片中青蘺素含量測定重復性試驗結(jié)果

3 討論

青蒿素是我國科學工作者從青蒿中分離出來的含有過氧橋的新型倍半萜內(nèi)酯，其化學結(jié)構(gòu)完全不同于喹啉類藥物，具有速效、高效和低毒的抗瘧性能，對兇險型瘧疾和抗氯喹株的患者療效更為顯著[2]。國內(nèi)對于青蒿素的提取也進行了大量研究,借鑒前期研究基礎(chǔ)和相關(guān)文獻報道[3]。綜合考慮安全性、低毒性、廉價性和環(huán)保性，本文選用了乙醇作為提取溶劑。

由于青蒿素僅在紫外區(qū)203nm處有較弱的末端吸收，但與堿反應(yīng)后，產(chǎn)生一化合物(Q292)，該物質(zhì)在292nm處有最大吸收，然而，由于反應(yīng)后有無機堿存在，易損壞色譜柱，不適宜直接進樣測定。但化合物Q292在pH5.58～6.04條件下，又可定量地轉(zhuǎn)化為化合物Q260，該物質(zhì)在260nm處有最大吸收，可以用于做HPLC測定[4]。本文經(jīng)大量試驗探索建立了復方中青蒿素含量HPLC的測定方法，研究結(jié)果表明，本方法簡便，準確，重復性好，可應(yīng)用于生產(chǎn)過程中的質(zhì)量控制。