白富瑾　羅　莉*　陳任孝　陳擁軍　林　肯　黃　旺　馬建偉

(1.西南大學動物科技學院，淡水魚類資源與生殖發(fā)育教育部重點實驗室，重慶400716；2.重慶市開縣和謙鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，重慶405424)

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3種無機磷源在吉富羅非魚上的應用效果比較

白富瑾1羅莉1*陳任孝1陳擁軍1林肯1黃旺1馬建偉2

(1.西南大學動物科技學院，淡水魚類資源與生殖發(fā)育教育部重點實驗室，重慶400716；2.重慶市開縣和謙鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，重慶405424)

本試驗旨在比較3種無機磷源對吉富羅非魚生長、體組成、營養(yǎng)物質表觀消化率及血清生化指標的影響。以含總磷0.91%的基礎飼料為對照(Dcontrol組)，在此基礎上分別添加2.0%的磷酸二氫鈣(MCP，DMCP組)、2.3%的磷酸氫鈣(DCP，DDCP組)和2.0%的磷酸一二鈣(MDCP，DMDCP組)，配制4種等氮(粗蛋白質32.5%)等能(粗脂肪6.5%)的試驗飼料，飼喂初始均重為(29.40±0.15) g的吉富羅非魚幼魚56 d。每種飼料設置3個重復，每個重復放魚25尾。結果表明：1)DMCP和DDCP組的末均重、增重率和特定生長率均顯著高于Dcontrol和DMDCP組(P<0.05)；DMCP組的飼料系數顯著低于Dcontrol和DMDCP組(P<0.05)，但與DDCP組差異不顯著(P>0.05)；Dcontrol組的臟體比顯著高于3個試驗組(P<0.05)。2)3個試驗組全魚和組織粗脂肪含量均顯著低于Dcontrol組(P<0.05)，而全魚粗灰分和總磷含量則顯著高于Dcontrol組(P<0.05)。3)DMCP和DDCP組的干物質、粗灰分和總磷表觀消化率顯著高于Dcontrol和DMDCP組(P<0.05)，Dcontrol和DMDCP組之間差異不顯著(P>0.05)。吉富羅非魚對MCP、DCP、MDCP的利用率依次為91.88%、86.03%和54.17%。4)3種無機磷對血清谷丙轉氨酶活性和丙二醛含量無顯著影響(P>0.05)，但顯著影響血清堿性磷酸酶和超氧化物歧化酶活性(P<0.05)，二者均以DMCP組最高，DMDCP組最低，DDCP組居中。由此可見，MCP和DCP可作為吉富羅非魚(體重30～150 g)飼料的無機磷源，而MDCP不適宜。

吉富羅非魚；磷源；生長；體組成；表觀消化率

目前，用于飼料添加劑的無機磷主要為磷酸二氫鈣[Ca(H2PO4)2·H2O,MCP]、磷酸氫鈣(CaHPO4·2H2O,DCP)和磷酸一二鈣[Ca(H2PO4)2·H2O+CaHPO4·2H2O,MDCP][11]，因其對魚類的營養(yǎng)價值不同，且營養(yǎng)價值參數不全面，同時價格也有較大差別，從而導致配方設計受限，而此3種無機磷在吉富羅非魚飼料中的應用比較尚未見報道?；诖?，本試驗以吉富羅非魚幼魚為研究對象，通過養(yǎng)殖和消化率試驗，對上述3種無機磷進行營養(yǎng)學評價，旨在為吉富羅非魚飼料中無機磷源的科學選用提供理論依據。

1　材料與方法

1.1試驗飼料

根據羅非魚營養(yǎng)需求，以魚粉、豆粕、棉籽粕、菜籽粕、面粉、米糠、豆油等為主要原料配制基礎飼料(表1)。以基礎飼料為對照(Dcontrol組)，然后在基礎飼料中分別添加2.0%的MCP(DMCP組)、2.3%的DCP(DDCP組)和2.0%的MDCP(DMDCP組)，經微晶纖維素調平，共配制成4種等氮等脂的試驗飼料。Dcontrol組飼料實測總磷含量為0.91%，DMCP、DDCP和DMDCP組飼料實測總磷含量均為1.28%。MCP和DCP來自四川川恒化工股份有限公司，MDCP來自四川龍蟒集團，均為飼料級。其中，MCP、DCP和MDCP實測磷含量分別為19.09%、16.63%和19.21%。飼料原料均過40目篩，各試驗飼料擠壓成直徑為2.0 mm的顆粒，自然風干后雙層塑料袋包裝并封口，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2試驗魚與飼養(yǎng)管理

試驗魚購自重慶市北碚區(qū)歇馬魚種場，先經濃度為3%的食鹽溶液消毒后，在室內水族箱中暫養(yǎng)，以基礎飼料馴化10 d。正式試驗前，選擇體質健壯、平均體重(29.40±0.15) g的吉富羅非魚300尾，隨機分為4組，每組3個重復，每個重復放養(yǎng)25尾，水族缸體積為392 L，水源為曝氣自來水。每天投喂4次(08:00、11:30、15:00、18:30)，日投喂量為體重的3%～5%，根據增重情況，每隔7 d調整1次投喂量。每晚100%換水1次，正式試驗持續(xù)8周。飼養(yǎng)期間水溫22～28 ℃，溶解氧濃度>6.0 mg/L，氨氮濃度<0.10 mg/L，pH 6.6～7.0，亞硝酸鹽濃度<0.05 mg/L。

1.3樣品采集、制備

養(yǎng)殖試驗結束后，饑餓24 h，每個重復選取11尾體重均勻的試驗魚，測定每尾魚的體重、體長和體高。其中，2尾魚用于全魚營養(yǎng)組成測定；3尾魚用1 mL一次性無菌注射器尾靜脈采血，4 ℃靜置3 h后，4 000 r/min(4 ℃)離心10 min，提取血清，-80 ℃保存，用于血清生化指標測定；另6尾魚在冰盤中進行解剖，取出內臟團，分離出肝胰臟和腸系膜脂肪并稱重，然后自魚體兩側頭蓋骨后至尾鰭前取體背肌肉樣品，-20 ℃保存待用。

表1　基礎飼料組成及營養(yǎng)水平(風干基礎)

1)預混料為每千克飼料提供The premix provided the following per kg of the diet：Fe 150 mg，Cu 3.2 mg，Zn 34.1 mg，Mn 13.0 mg，I 5.7 mg，Se 0.3 mg，Co 1.24 mg，VA 2 000.0 IU，VD 2 000.0 IU，VE 100.0 mg，VK310.0 mg，VB15.0 mg，VB210.0 mg，煙酸 niacin acid 100.0 mg，VB610.0 mg，泛酸鈣 calcium pantothenic acid 40.0 mg，葉酸 folic acid 5.0 mg，VB120.02 mg，生物素 biotin 1.0 mg，VC 300 mg，肌醇 inositol 100 g。

2)實測值Measured values。

1.4指標測定

養(yǎng)殖試驗結束后，停食24 h，準確稱量魚體和飼料重，計算其特定生長率(specific growth rate,SGR)、飼料系數(feed conversion ratio,FCR)、增重率(weight gain rate,WGR)、肥滿度(condition factor,CF)和臟體比(viscerosomatic index,VSI)，計算公式如下：

SGR(%/d)=100×(lnWt-lnW0)/d；

FCR=F/(Wt-W0)；

WGR(%)=100×(Wt-W0)/W0；

CF(%)=100×W/L3；

VSI(%)=100×Wv/W。

式中：W0為初始魚尾均重(g)；Wt為終末魚尾均重(g)；d為養(yǎng)殖試驗天數(d)；F為尾均攝食量(g)；W為體重(g)；L為體長(cm)；Wv為內臟重(g)。

參照文獻[12]的方法測定樣品的營養(yǎng)成分，其中粗脂肪含量采用索氏抽提法測定，粗蛋白質含量采用凱氏半微量蒸餾定氮法測定，水分含量采用恒溫干燥法測定，粗灰分含量采用高溫灼燒法測定，總磷含量采用鉬黃比色法測定。

血清谷丙轉氨酶(GPT)、堿性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量均采用南京建成生物工程研究所生產的試劑盒測定。

1.5磷源和飼料中無機磷含量以及飼料中營養(yǎng)物質表觀消化率、有效磷含量的測定

磷源和飼料中無機磷含量：MCP和DMCP組飼料無機磷含量參考GB/T 22548—2008方法測定，DCP、MDCP以及DMCP和DDMCP組飼料無機磷含量參考GB/T 22549—2008方法測定。

飼料中營養(yǎng)物質表觀消化率：分別用0.5%(占飼料干重)的三氧化二鉻(Cr2O3)替代試驗飼料中的微晶纖維素，配制成含有Cr2O3指示劑的飼料。選取平均體重為(29.40±0.15) g的吉富羅非魚300尾，隨機分為4個組，每組3個重復，每個重復放養(yǎng)25尾，飼養(yǎng)于體積為392 L的水族缸中，用4種試驗飼料馴養(yǎng)2周，每天投喂2次(08:00和15:00)。2周后，每天在投飼1 h后清除殘餌，3 h后用虹吸法收集成形的糞便，選擇包膜完整的糞便于65 ℃烘干后，置-20 ℃冰箱保存。采用濕式灰化定量法測定飼料及糞便中Cr2O3含量，計算飼料中營養(yǎng)物質的表觀消化率：

ADi(%)=100×[1-(Cc×CFi)/(Cf×CCi)]。

式中：ADi為營養(yǎng)物質的表觀消化率；Cc為飼料中Cr2O3含量；CFi為糞便中營養(yǎng)物質的含量；Cf為糞便中Cr2O3含量；CCi為飼料中營養(yǎng)物質的含量。

3種無機磷的利用率和飼料中有效磷含量的計算公式如下：

Di(%)=100×(PCi×ADPi-PC0×ADP0)/IPi；

AP0(%)=100×PC0×ADP0；

APi(%)=100×PCi×ADPi。

式中：Di為無機磷的利用率；AP0為對照組飼料中有效磷含量；APi為試驗組飼料中有效磷含量；PCi為試驗組飼料總磷含量；ADPi為試驗組飼料總磷表觀消化率；PC0為對照組飼料總磷含量；ADP0為對照組飼料總磷表觀消化率；IPi為試驗組飼料中無機磷含量。

1.6數據處理

試驗結果用SPSS 19.0對數據進行單因素方差分析(one-way ANOVA)，用Duncan氏多重比較法分析組間差異顯著性，顯著水平為P<0.05，數據用平均值±標準差(mean±SD)形式表示。

2　結　果

2.13種無機磷源對吉富羅非魚生長性能、飼料利用和形體指標的影響

由表2可知，DMCP和DDCP組的末均重(FABW)、WGR和SGR差異不顯著(P>0.05)，但兩者均顯著高于Dcontrol和DMDCP組(P<0.05)。DMCP組的FCR顯著低于Dcontrol和DMDCP組(P<0.05)，但與DDCP組差異不顯著(P>0.05)。Dcontrol組的VSI顯著高于DMCP、DDCP和DMDCP組(P<0.05)。3個試驗組的CF低于Dcontrol組，體長/體高(L/H)正好相反，同時DMCP組與Dcontrol組差異顯著(P<0.05)。

2.23種無機磷源對吉富羅非魚全魚營養(yǎng)組成和組織粗脂肪含量的影響

由表3可知，全魚粗蛋白質含量表現為DMCP和DMDCP組顯著高于Dcontrol組(P<0.05)，但和DDCP組差異不顯著(P>0.05)。全魚粗脂肪含量表現為3個試驗組顯著低于Dcontrol組(P<0.05)，而粗灰分和總磷含量則表現為3個試驗組顯著高于Dcontrol組(P<0.05)。腸系膜、肝胰臟和肌肉中粗脂肪含量均表現為3個試驗組顯著低于Dcontrol組(P<0.05)，同時腸系膜粗脂肪含量DMCP和DDCP組顯著高于DMDCP組(P<0.05)，肝胰臟粗脂肪含量正好相反，為DMCP和DDCP組顯著低于DMDCP組(P<0.05)，肌肉粗脂肪含量DMCP組顯著高于DDCP和DMDCP組(P<0.05)。

表2　3種無機磷源對吉富羅非魚生長性能、飼料利用和形體指標的影響

同行數據肩標無字母或相同字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下表同。

In the same row, values with no or the same letter superscripts mean no significant difference (P>0.05), while with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below.

表3　3種無機磷源對吉富羅非魚全魚營養(yǎng)組成和組織粗脂肪含量的影響(鮮物質基礎)

2.33種無機磷源對吉富羅非魚對飼料營養(yǎng)物質表觀消化率的影響

由表4可知，干物質、粗灰分和總磷表觀消化率DMCP和DDCP組之間差異不顯著(P>0.05)，但2組均顯著高于Dcontrol和DMDCP組(P<0.05)，DMCP和DDCP組的總磷表觀消化率分別較DMDCP組高19.28%和16.29%。粗蛋白質和粗脂肪表觀消化率各組間無顯著差異(P>0.05)。

2.4無機磷利用率和飼料中有效磷含量

根據各組飼料總磷表觀消化率及總磷和無機磷含量計算得出吉富羅非魚對3種無機磷的利用率和飼料中的有效磷含量，結果見表5?？芍?，羅非魚對MCP和DCP的利用率較MDCP分別高69.61%和58.81%。

2.53種無機磷源對吉富羅非魚血清生化指標的影響

由表6可知，DMCP組血清AKP活性顯著高于其他組(P<0.05)，分別較DDCP和DMDCP組高13.12%和20.12%。血清SOD活性DMCP和DDCP組之間差異不顯著(P>0.05)，但兩者均顯著高于DMDCP組(P<0.05)。血清GPT活性和MDA含量3個試驗組間無顯著差異(P>0.05)。

表4　3種無機磷源對吉富羅非魚對飼料營養(yǎng)物質表觀消化率的影響

表5　無機磷利用率和飼料中有效磷含量

表6　3種無機磷源對吉富羅非魚血清生化指標的影響

3　討　論

不同無機磷源對魚類的營養(yǎng)價值不同，對黑鯛[6]、奧尼羅非魚[2]和花[10]等的研究表明，SGR、WGR和飼料效率均按MCP、DCP和磷酸鈣(TCP)的順序呈減小趨勢，但劉仙欽[8]的研究發(fā)現，TCP對軍曹魚的促生長效果優(yōu)于DCP。本試驗中沒有設計含TCP飼料，但MCP和DCP的應用結果與前人研究一致，同時生長性能MCP和DCP組之間差異不顯著，說明兩者均可作為吉富羅非魚的無機磷源，而MDCP的效果相對較差，可能與該組飼料中有效磷含量不足和營養(yǎng)物質的消化率較低有關。羅非魚對有效磷的需要量為0.76%～0.86%，缺乏和過量均不利于生長[13-15]，DMCP(有效磷含量為0.86%)和DDCP組飼料(有效磷含量為0.84%)中有效磷含量均符合羅非魚對其的需要量，而DMDCP組飼料(有效磷含量為0.72%)中有效磷含量則低于需要量，同時，DMDCP組干物質、粗灰分和總磷的表觀消化率均顯著低于DMCP和DDCP組，且吉富羅非魚對MDCP的利用率(54.17%)遠低于MCP(91.88%)和DCP(86.03%)。以上可能是導致DMDCP組吉富羅非魚生長緩慢和飼料利用率下降的原因。

本試驗結果表明，3種無機磷源對羅非魚全魚常規(guī)營養(yǎng)成分和總磷含量均無顯著影響，但顯著影響魚體組織中粗脂肪含量，其中肝胰臟粗脂肪含量按MCP、DCP、MDCP順序依次升高，而肌肉和腸系膜粗脂肪含量正好相反。同對照組相比，飼料中磷的供給會提高魚體蛋白質的沉積并減少全魚及組織中脂肪的沉積，說明添加無機磷可促進吉富羅非魚脂肪的氧化代謝，保障魚體能量的需要，從而減少魚體脂肪的沉積，尤其是在肝胰臟中的沉積，有效預防脂肪肝的發(fā)生[13]。其原因可能是磷為ATP 2個高能磷酸鍵的斷裂提供了能量，增強了體內脂肪酸的活化作用，進而增加糖原生成，使脂肪沉積減少[16]。同時，3個試驗組的VSI降低是由于腸系膜和肝胰臟粗脂肪含量的下降使得內臟脂肪沉積量下降所致，而CF的下降與魚體粗脂肪含量下降和骨骼系統、鱗片快速生長發(fā)育使魚體變長有關[17]。

總磷表觀消化率可反映飼料中磷的利用率[10]。不同磷源對奧尼羅非魚[2]、花[10]、建鯉[3]和軍曹魚[8]等影響的研究表明，魚類對添加了磷酸二氫鈉、磷酸二氫鉀和MCP的飼料中磷的利用率較高，為33.41%～71.59%，而對以DCP和TCP為磷源的飼料的磷利用率比磷酸二氫鹽差，分別為26.05%～51.51%和22.04%～45.43%。因為飼料組成、魚種、魚規(guī)格和養(yǎng)殖環(huán)境不同，存在原料磷含量和利用率差異造成的誤差[1]，同時，不同磷酸鹽由于分子結構不同，具有相同含磷量的不同磷酸鹽，其生物學效價也不同[10]。而無機磷的利用率代表了魚消化道對無機磷源中磷的消化吸收，比增重能更直接地反映出磷的可利用性[10]。鰤魚對MCP、DCP和TCP的利用率依次為92.4%、59.2%和48.8%[18]；軍曹魚對MCP和DCP的利用率分別為44.55%和13.81%[8]。本試驗中吉富羅非魚對3種無機磷MCP、DCP、MDCP的利用率依次為91.88%、86.03%和54.17%。結果與前人的研究有所差異，因為影響礦物質吸收利用的因素很多，主要有動物種類、生理狀態(tài)、體內對礦物質的貯存狀態(tài)和魚類消化道的pH等[19]；同時，吉富羅非魚對MDCP的利用率顯著低于DCP，可能是由于MDCP原料或生產過程中伴入重金屬等有害物(砷、鎘、鉛、汞、氟等)而對磷的利用率造成了影響[20]，且磷酸鹽摻雜造假、原料來源和加工工藝不同[21]及飼料鈣磷比例失衡等[19]都會影響魚類對無機磷的利用，具體原因有待進一步研究。另外，本研究還發(fā)現，在吉富羅非魚飼料中可以用DCP完全替代MCP。在魚類飼料中DCP替代MCP的相關報道較少，僅有袁萬安等[22]在長薄鰍的試驗中發(fā)現，當DCP替代40%以上MCP時會降低魚體的生長和飼料利用率，與本研究結果存在差異，可能是魚種不同所致。

魚類血液與機體的代謝、營養(yǎng)狀況及疾病有著密切的關聯[23]。GPT主要分布于肝細胞中，當肝細胞受到損傷時，GPT從肝細胞中釋放致使其在血清中的活性升高，升高程度與肝細胞受損程度一致[24]。SOD活性可作為水產動物機體的免疫性指標[19]，MDA含量可反映自由基的產生量和生物膜的損傷程度[25]，AKP活性高低反映了成骨細胞的活躍程度，并間接反映機體鈣和磷的營養(yǎng)狀況[10]。本試驗表明，添加無機磷有利于保護吉富羅非魚的肝臟功能，提高機體抗氧化能力，增強磷代謝利用，促進骨骼礦化，其中MCP表現最佳。

4　結　論

以生長、體組成、營養(yǎng)物質表觀消化率及血清生化指標為判據，在本試驗條件下，MCP和DCP均可作為吉富羅非魚(體重30～150 g)飼料的無機磷源，而MDCP不適宜。

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*Corresponding author, associate professor, E-mail: luoli1972@163.com

(責任編輯菅景穎)

A Comparison of Application Effect among Three Kinds of Inorganic Phosphorus Sources on Genetic Improvement of Farmed Tilapia (Oreochromisniloticus)

BAI Fujin1LUO Li1*CHEN Renxiao1CHEN Yongjun1LIN Ken1HUANG Wang1MA Jianwei2

(1. College of Animal Science and Technology of Southwest University, Key Laboratory of Freshwater Reproduction and Development, Ministry of Education, Chongqing 400716, China; 2. Animal Husbandry and Veterinary Station of Heqian Town in Kai County of Chongqing, Chongqing 405424, China)

This experiment was conducted to compare the effects of three kinds of inorganic phosphorus sources on growth, body composition, nutrient apparent digestibility and serum biochemical indices of genetic improvement of farmed tilapia (GIFT,Oreochromisniloticus). Four isonitrogenous (crude protein 35.5%) and isolipidic (crude lipid 6.5%) diets were formulated with no extra phosphorous inclusion (Dcontrolgroup, contained 0.91% of total phosphorus), 2.0% monocalcium phosphate (MCP, DMCPgroup), 2.3% dicalcium phosphate (DCP, DDCPgroup) and 2.0% mono-calcium and di-calcium phosphate (MDCP, DMDCPgroup), respectively. Each diet was fed to triplicate groups of 25 juvenile GIFT with initial body weight of (29.40±0.15) g for 56 d. The results showed as follows: 1) DMCPand DDCPgroups obtained significantly higher final body weight, weight gain rate and specific growth rate compared with Dcontroland DMDCPgroups (P<0.05). Feed conversion rate of DMCPgroup was significantly lower than that of Dcontroland DMDCPgroups (P<0.05), but it was not significantly different from that of DDCPgroup (P<0.05). Viscerosomatic index of Dcontrolgroup was significantly higher than that of three experimental groups (P<0.05). 2) Crude lipid content of whole body and tissues of three experimental groups was significantly lower than that of Dcontrolgroup (P<0.05), whereas ash and total phosphorus contents of whole body were significantly higher than those of Dcontrolgroup (P<0.05). 3) The apparent digestibility of dry matter, ash and total phosphorus of DMCPand DDCPgroups was significantly higher than that of Dcontroland DMDCPgroups (P<0.05), but no significant differences were observed between DMCPand DDCPgroups (P>0.05). The utilization of MCP, DCP and MDCP of GIFT was 91.88%, 86.03% and 54.17%, respectively. 4) Three kinds of inorganic phosphorus sources did not change serum glutamic-pyruvic transaminase activity and malondialdehyde content of GIFT (P>0.05), but serum alkaline phosphatase and superoxide dismutase activities were significantly influenced (P<0.05), with the highest value in DMCPgroup, followed by DDCPgroup and the lowest in DMDCPgroup. In conclusion, MCP and DCP can be used as inorganic phosphorous sources in the diet of GIFT (body weight is 30 to 150 g), while the MDCP is unsuitable.[ChineseJournalofAnimalNutrition, 2016, 28(9)：2969-2976]

GIFT; phosphorus source; growth; body composition; apparent digestibility

10.3969/j.issn.1006-267x.2016.09.037

2016-03-07

國家自然科學基金(31101909)；中央高?；究蒲袠I(yè)務費(SWU114039，XDJK2015C080)

白富瑾(1990—)，男，寧夏中衛(wèi)人，碩士研究生，研究方向為水產動物營養(yǎng)與飼料學。E-mail： bfj0705@126.com

羅莉，副教授，碩士生導師，E-mail： luoli1972@163.com

S963

A

1006-267X(2016)09-2969-08