徐瑩瑩，龔建玲，嚴(yán)亞丹，沈月爽

慢性乙型肝炎病毒感染者血清脂聯(lián)素水平與體液免疫功能的相關(guān)性研究

徐瑩瑩，龔建玲，嚴(yán)亞丹，沈月爽

目的研究慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者血清脂聯(lián)素（ADI）水平與體液免疫功能的相關(guān)性。方法選取正常對照組50例，慢性乙型肝炎(CHB)221例（其中慢性非活動性HBV攜帶組40例，活動性肝炎60例，重癥肝炎24例，肝硬化59例，肝癌38例），分別測定ADI、白介素-6（IL-6）、干擾素-（IFN-）、體液免疫功能指標(biāo)[免疫球蛋白A(IGA)、免疫球蛋白G（IGG）、免疫球蛋白M(IGM)、補(bǔ)體3（C3）、補(bǔ)體4(C4)]，比較上述指標(biāo)在CHB不同臨床階段的差異性，分析ADI與上述指標(biāo)的相關(guān)性。結(jié)果正常對照組與慢性非活動性HBV攜帶組上述指標(biāo)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均＞0.05），HBV感染患者（除外慢性非活動性HBV攜帶組）的ADI、IGA、IGG、IGM、IL-6，IFN-均明顯高于正常對照組和慢性非活動性HBV攜帶組，隨著機(jī)體免疫反應(yīng)的加強(qiáng)，ADI、IGA、IGG、IGM、IL-6、IFN-等指標(biāo)越來越高；而C3、C4均明顯低于正常對照組和慢性非活動性HBV攜帶組（均＜0.05），隨著機(jī)體免疫反應(yīng)的加強(qiáng)，C3、C4逐漸耗盡，越來越低。ADI與IGA、IGG、IGM、IL-6，IFN-顯著正相關(guān)，與C3、C4呈顯著負(fù)相關(guān)。結(jié)論ADI可以作為評價HBV感染時肝臟免疫反應(yīng)程度的指標(biāo)，對CHB的體液免疫反應(yīng)的影響尚不確定。

肝炎，乙型，慢性；脂聯(lián)素；體液免疫

血清脂聯(lián)素（ADI）是由脂肪組織分泌的一種細(xì)胞因子，已有研究很多集中在非酒精性脂肪肝和ADI的相關(guān)性，大量研究證實，非酒精脂肪肝群體的ADI是低于正常對照組的[1]。ADI與慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染的相關(guān)性研究甚少，在已有的研究中ADI對機(jī)體的免疫功能影響結(jié)論也不統(tǒng)一，有研究認(rèn)為ADI會通過抑制白介素-6（IL-6）、干擾素-（IFN-）的分泌減弱機(jī)體的免疫反應(yīng)[2]。筆者在預(yù)實驗中發(fā)現(xiàn)，隨著機(jī)體免疫反應(yīng)的進(jìn)行，ADI的水平會明顯升高，這與已有的研究結(jié)果[3]是相吻合的；但同時，筆者的預(yù)實驗表明隨ADI升高，IL-6、IFN-的水平與ADI表現(xiàn)出很強(qiáng)的正相關(guān)性，那ADI對于機(jī)體免疫反應(yīng)的抑制作用就無法證實。為驗證筆者的預(yù)實驗，分析ADI在HBV感染者體液免疫中的作用，筆者就HBV感染的不同階段的ADI水平與IL-6、IFN-及相關(guān)的免疫功能指標(biāo)進(jìn)行檢測，比較上述指標(biāo)在不同臨床階段的差異性，分析ADI與各個指標(biāo)的相關(guān)性?，F(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料選擇2012年6月至2013年12月浙江省慈溪市人民醫(yī)院（標(biāo)本在浙江醫(yī)院檢測）收治的221例HBV感染者。其中男121例，女100例；年齡17～79歲，平均（34.53±8.01）歲。CHB患者根據(jù)肝炎活動程度分為慢性非活動性HBV攜帶組40例、活動性肝炎60例、重癥肝炎24例、肝硬化59例、肝癌38例，診斷、分型符合參考文獻(xiàn)[4]。所有病例均通過血清學(xué)檢測排除其他肝炎病毒感染，排除合并惡性腫瘤、自身免疫性肝病、酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝病和糖尿病等。正常對照組50例，其中男25例，女25例；年齡18～74，平均（36.33±7.37）歲。

1.2研究方法所有標(biāo)本采用日本積水創(chuàng)公司生產(chǎn)的黃管（含分離膠及促凝劑），均與清晨空腹抽取靜脈血5 ml，以3 000 r/min的速度離心10 min，離心后留取血清保存于－70℃冰箱，待所有標(biāo)本收齊后一起檢測。用ELISA法(試劑盒均購自 eBioscience有限公司)檢測ADI、IL-6、IFN-水平，BECKMAN-IMMAGE免疫比濁法（BECKMAN原裝配套試劑）檢測免疫球蛋白A(IGA)、免疫球蛋白G（IGG）、免疫球蛋白M(IGM)、補(bǔ)體3（C3）、補(bǔ)體4(C4)。

1.3統(tǒng)計方法運用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組比較采用單因素方差分析，多組間兩兩比較采用LSD-比較；脂聯(lián)素與其他變量資料行Spearman等級相關(guān)分析。＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1ADI、IFN-、IL-6、IGA、IGG、IGM、C3及C4在各組的比較ADI和IFN-水平在HBV感染者（除外慢性非活動性HBV攜帶組）的水平均顯著高于正常對照組和慢性非活動性HBV攜帶組（均＜0.05）；肝硬化組、肝癌組、重癥肝炎組的水平均顯著高于活動性肝炎組（均＜0.05）；重癥肝炎組顯著高于肝硬化和肝癌組（均＜0.05）。IL-6在HBV感染者患者（除外慢性非活動性HBV攜帶組）的水平均顯著高于正常對照組和慢性非活動性HBV攜帶組（均＜0.05）；肝硬化組、肝癌組、重癥肝炎組差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均＞0.05），但均顯著高于活動性肝炎組（均＜0.05）。肝硬化組、肝癌組、重癥肝炎組IGA、IGM水平均顯著高于正常對照組和慢性非活動性HBV攜帶組；活動性肝炎組與正常對照組和慢性非活動性HBV攜帶組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（＞0.05）；肝硬化組、肝癌組、重癥肝炎組的水平均高于慢性活動性肝炎組（均＜0.05）；IGM重癥肝炎組顯著高于肝硬化和肝癌組（均＜0.05）。IGG在HBV感染者（除外慢性非活動性HBV攜帶組）的水平均顯著高于正常對照組和慢性非活動性HBV攜帶組，重癥肝炎組的水平顯著高于肝硬化組和肝癌組，高于活動性肝炎組（均＜0.05）。C3在HBV感染者（除外慢性非活動性HBV攜帶組）的水平均顯著低于正常對照組和慢性非活動性HBV攜帶組（均＜0.05）；與活動性肝炎和肝癌組相比，肝硬化和重癥肝炎的水平更低；重癥肝炎的水平要低于肝硬化。C4水平HBV感染者（除外慢性非活動性HBV攜帶組）的水平均低于正常對照組和慢性非活動性HBV攜帶組，與活動性肝炎、肝硬化、肝癌組比較，重癥肝炎組顯著降低。見表1～2。

2.2HBV感染者血清ADI水平與體液免疫功能指標(biāo)的的相關(guān)分析ADI濃度與IGA、IGA、IGG IL-6、IFN-呈正相關(guān)，與C3、C4呈負(fù)相關(guān)。見表3。

3　討論

HBV感染臨床表現(xiàn)多樣化，隨著病程的進(jìn)展，機(jī)體的免疫系統(tǒng)會有不一樣的反應(yīng)，反應(yīng)的強(qiáng)烈程度，可以通過幾個體液免疫IGA、IGG、IGM、C3和C4來衡量。免疫反應(yīng)加強(qiáng)時，IGA、IGG、IGM分泌升高，隨著免疫反應(yīng)加強(qiáng)，C3、C4耗盡水平下降。近年來，免疫因素在CHB發(fā)病過程中的作用越來越受到重視。HBV感染機(jī)體后，宿主免疫反應(yīng)的強(qiáng)弱、促炎和抗炎細(xì)胞因子相互斗爭的結(jié)果都影響著乙型肝炎發(fā)病及其轉(zhuǎn)歸，并與肝臟損傷密切相關(guān)。研究表明，各型乙型肝炎患者體內(nèi)都存在明顯的促炎和抗炎細(xì)胞因子失衡。當(dāng)然HBV感染機(jī)體的免疫反應(yīng)十分復(fù)雜，有太多的因素會影響IFN-、IL-6等具有清除HBV作用因子的分泌，這也是目前研究CHB免疫反應(yīng)的熱點。

表1　病例組與正常對照組血清脂聯(lián)素及各指標(biāo)水平比較

ADI是因首先在小鼠脂肪細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)而得名。因其有廣泛的生理作用，尤其具有抗炎作用，而成為近年慢性肝病的研究熱點。ADI是通過與其在細(xì)胞膜上的受體結(jié)合起作用的。目前已被克隆的人脂聯(lián)素受體主要有兩種：AdipoR1 和AdipoR2，前者主要表達(dá)于心肌和骨骼肌，后者主要表達(dá)于肝臟。ADI與其相應(yīng)受體結(jié)合后，通過活化AMP激酶（AMPK)和過氧化物酶體增殖物激活受體-（PPAR-）在心血管疾病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等疾病時發(fā)揮抗炎、調(diào)節(jié)免疫力等作用[5-8]。目前關(guān)于CHB和ADI的研究甚少，究其原因就是因為ADI對CHB的影響機(jī)制不明確?；谏鲜鲈?，筆者將ADI與IFN-、IL-6等體液免疫相關(guān)指標(biāo)關(guān)聯(lián)性作為研究的主旨。

本文結(jié)果顯示IGA、IGG、IGM水平大體上是重癥肝炎組＞肝硬化組、肝癌組＞活動性肝炎組＞正常對照組及慢性非活動性HBV攜帶組；C3、C4與之相反，可以認(rèn)為HBV感染患者機(jī)體的免疫反應(yīng)程度：重癥肝炎組＞肝硬化組、肝癌組＞活動性肝炎組＞正常對照組及慢性非活動性HBV攜帶組。IFN-、IL-6的水平，其趨勢與IGA、IGG、IGM一致，表明IFN-、IL-6的確在加強(qiáng)體液免疫上起到正向作用。分析ADI的水平發(fā)現(xiàn)，ADI的水平與IFN-、IL-6、IGA、IGG、IGM水平正相關(guān)，與C3、C4負(fù)相關(guān)。這就意味著，CHB患者血清ADI水平與IFN-、IL-6水平變化是一致的，ADI沒有抑制IFN-、IL-6，或者說ADI對CHB患者的體液免疫反應(yīng)沒有起到抑制作用。這與以往的研究結(jié)果[2，9]是不同的，證明HBV感染時，ADI對體液免疫無影響。但ADI與肝臟的免疫反應(yīng)程度是正相關(guān)的，ADI可作為評價肝臟免疫反應(yīng)程度的指標(biāo)。

表3　ADI水平與各指標(biāo)的相關(guān)性

HBV感染患者ADI水平升高的原因有：（1）受損肝細(xì)胞可誘導(dǎo)ADI的表達(dá)。有研究提示 ADI也可在肝臟中產(chǎn)生，HBV感染患者在因HBV介導(dǎo)的免疫反應(yīng)肝細(xì)胞受損后，促使免疫反應(yīng)加強(qiáng)，故IGA、IGG、IGM分泌升高，而C3、C4耗盡水平下降，同時受損肝細(xì)胞將誘導(dǎo)ADI的表達(dá)升高[10]。（2）ADI排泄障礙。Tacke等[11]的研究說明ADI可能經(jīng)由膽道排泄。重癥肝炎時肝細(xì)胞大量壞死同時伴膽汁淤積，這導(dǎo)致ADI的排泄障礙，循壞中的ADI堆積。這可能就是在本試驗中重癥肝炎組ADI的水平明顯高于其他組的一個原因。這與以往的研究結(jié)果[12]是相同的。（3）與炎癥因子的對抗性上升。有研究顯示酒精性肝病患者ADI水平明顯上升，與腫瘤壞死因子水平正相關(guān)[13]。HBV感染患者尤其是重型肝炎患者在進(jìn)展中，將產(chǎn)生大量腫瘤壞死因子等炎癥因子[12]。本試驗中IL-6、IFN-等促炎細(xì)胞因子在重型肝炎患者明顯高于其他組，作為對炎癥的控制和對機(jī)體的保護(hù)，ADI對抗性上升也明顯。ADI對CHB的免疫反應(yīng)的影響尚不確定，還需研究機(jī)制方向解決；隨著深入研究，其有望成為HBV感染患者提供有效治療和控制病情的一種新途徑。

[1]Aqrawal RP,Sheroan V,Oia V,et al. Hepatocyte growthfactor,diponectinand hepatic Q in non-alcoholic steatohepatitis[J]. J Assoc Physicians India,2013,61(11): 789-792.

[2]Chenq X,Folco EJ,Shimizu K,et al.Adi ponectin induces pro-inflammatory programs in human macrophages and CD4+T cells[J].J Biol Chem,2012,26:287-290.

[3]Liu CJ,Chen CJ,Lai MY.High serum adiponectincorrelates withadvancedliver disease in patients with chronic hepatitis B virus infection[J].Hepatol Int,2009,3(2): 364-370.

[4]中華醫(yī)學(xué)會.病毒性肝炎防治方案[J].中華肝臟病雜志,2000,8(6)：324-329.

[5]Esmaili S,Xu A,George J.The multifaceted and controversial immunometabolic actions of adiponectin[J].TrendsEndocrinol Metab,2014,2:1043-1047.

[6]Jenke A,Holzhauser L,Lobel M,et al. Adiponectin promotes coxsackievirus B3 myocarditis by suppression of acute anti--viral immune responses[J].Basic Res Cardiol,2014,109(3):408-411.

[7]Scotece M,Conde J,Lopez V,et al.Adiponectinandleptin:new targetsin inflammation[J].Basic Clin Pharmacol Toxicol, 2014,114(1):97-102.

[8]Fantuzzi G.Adiponectin in inflammatory and immune-mediated diseases[J].Cytokine,2013,61(1):1-10.

[9]Picicio L,Cantoni C,Henderson JG,et al. Lack of adiponectin leads to increased lymphocyte activation and increased diseaseseverityinamousemodelofmultiple sclerosis[J].Eur J Immunol,2013,43(8): 2018-2100.

[10]Yoda M,Urakami M,Taniguchi M,et a1. Change inexpression of GBP28/adiponectin in carbon tetrachloride-administrated mouse liver[J].Biochem Biophys Res Commun,2001,285(2):372-377.

[11]Tacke F,Wustefeld T,Horn R,et al.High adiponectin in chronic liver disease and cholestasissuggestsbiliaryrouteofadiponectinexcretion invivo[J].Hepatol,2005, 42(5):666-673.

[12]張貴利,李強(qiáng),李友生,等.慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者血清脂聯(lián)素水平與肝功能及相關(guān)因素的關(guān)系[J].臨床肝膽病雜志,2010,26(2):184-186.

[13]Kaser S,Moschen A,Kaser A,et a1.Cir culating adiponectin reflects severity of liver disease but not insulin sensitivityin livercirrhosis[J].InternMed,2005,258(3): 274-280.

10.3969/j.issn.1671-0800.2016.05.016

R575.1

A

1671-0800(2016)05-0592-03

2016-02-18

（本文編輯：姜曉慶）

315300浙江省慈溪，慈溪市人民醫(yī)院（徐瑩瑩、龔建玲、嚴(yán)亞丹）；浙江醫(yī)院（沈月爽）

徐瑩瑩，Email：xyy9610@ sina.com