謝曉芳

(菏澤醫(yī)學(xué)專科學(xué)校臨床系，山東 菏澤 274000)

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MIF及VEGF在RSA患者血清和蛻膜中的表達(dá)及其意義

謝曉芳

(菏澤醫(yī)學(xué)?？茖W(xué)校臨床系，山東 菏澤 274000)

目的研究巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(macrophagemigrationinhibitoryfactor,MIF)及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(yascularendotnelialgrowthfactor,VEGF)在復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)(recurrentspontaneousabortion,RSA)患者血清和蛻膜中的表達(dá)及意義。方法選擇RSA患者28例(RSA組)及同孕齡正常早孕婦女30例(正常早孕組)，采用雙抗體夾心ABC-ELISA法檢測(cè)2組外周血清和蛻膜組織中MIF、VEGF水平，并對(duì)血清和蛻膜組織中MIF與VEGF的表達(dá)水平進(jìn)行簡(jiǎn)單直線相關(guān)分析。結(jié)果RSA組血清和蛻膜組織中MIF和VEGF水平均低于正常早孕組(均P<0.01)。簡(jiǎn)單直線相關(guān)分析結(jié)果顯示：血清和蛻膜組織中MIF與VEGF水平呈正相關(guān)(r=0.72、0.65，均P<0.01)。結(jié)論妊娠期母胎界面MIF和VEGF的異常降低，可能在早期復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。

巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子； 可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子； 復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)； 血清； 蛻膜

recurrentspontaneousabortion;serum;decidua

在妊娠過(guò)程中自然流產(chǎn)的發(fā)生率逐漸增高，最高可達(dá)到全部妊娠活動(dòng)的20%[1]。流產(chǎn)是妊娠不足28周、胎兒體質(zhì)量不足1000g而發(fā)生的妊娠終止現(xiàn)象，分為自然流產(chǎn)和人工流產(chǎn)。復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)(recurrentspontaneousabortion,RSA)是指連續(xù)發(fā)生2次或2次以上的自然流產(chǎn)[2]，該病病因復(fù)雜，涉及醫(yī)學(xué)多個(gè)學(xué)科領(lǐng)域，是婦產(chǎn)科比較棘手的一種疾病，目前仍有1/2的病因不明。胎盤是胎兒的重要附屬物，幾乎替代了胎兒的一切功能。近年來(lái)的研究[3-4]表明，如果胎盤組織動(dòng)靜脈血管網(wǎng)絡(luò)不能及時(shí)建立，則會(huì)影響胎兒氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)從而導(dǎo)致RSA的發(fā)生。

巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(macrophagemigrationinhibitionfactor，MIF)是一種多功能細(xì)胞因子，與胚胎的分化發(fā)育和胎盤血管網(wǎng)絡(luò)的建立關(guān)系密切。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)是促血管生長(zhǎng)作用最強(qiáng)的細(xì)胞因子。為此，本研究通過(guò)比較RSA患者和正常早孕婦女血清和蛻膜組織中MIF、VEGF的水平變化，探討其在RSA中的作用。

1　對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象

選擇2013年11月至2014年8月在菏澤市立醫(yī)院婦科門診就診的婦女58例。其中RSA患者28例(RSA組)，年齡(26.6±5.6)歲，流產(chǎn)時(shí)間(7.7±2.5)周；流產(chǎn)次數(shù)2次者16例，≥3次者12例。女方婦科檢查、內(nèi)分泌檢查均正常；男方精液檢查正常，無(wú)精索靜脈曲張；夫妻雙方染色體核型正常。選擇同期要求人工流產(chǎn)的正常早孕婦女30例(正常早孕組)，年齡(25.8±3.3)歲，流產(chǎn)時(shí)間(7.6±1.8)周；既往月經(jīng)規(guī)律，無(wú)異常妊娠病史。此次妊娠各項(xiàng)檢查提示母體、胚胎各項(xiàng)指標(biāo)正常。2組年齡和孕周比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2研究方法

1.2.1標(biāo)本采集

2組研究對(duì)象均在就診時(shí)收集標(biāo)本。1)抽取空腹肘正中靜脈血6mL，分裝2支清潔含抗凝劑的試管中，3000r·min-1離心20min，靜置60min，收集血清置于-30 ℃ 冰箱中保存體測(cè)。2)清宮術(shù)后，立即取蛻膜組織，無(wú)菌鹽水認(rèn)真漂洗至無(wú)血跡后置于-70 ℃ 冰箱中保存待檢。標(biāo)本收集時(shí)均取得患者的知情同意。

1.2.2檢測(cè)方法

采用雙抗體夾心ABC-ELISA法測(cè)定血清和蛻膜組織中MIF、VEGF含量，試劑盒購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司，測(cè)定過(guò)程嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行，盡量減少誤差。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2　結(jié)果

2.12組血清和蛻膜組織中MIF、VEGF水平比較

RSA組血清和蛻膜組織中MIF和VEGF水平均低于正常早孕組(均P<0.01)。見(jiàn)表1。

表1　MIF、VEGF在血清和蛻膜組織中的水平比較

P<0.01與正常早孕組比較。

2.2血清和蛻膜組織MIF水平與VEGF水平相關(guān)性的分析

簡(jiǎn)單直線相關(guān)分析結(jié)果示：血清和蛻膜組織中MIF水平與VEGF水平呈正相關(guān)(r=0.72、0.65，均P<0.01)

3　討論

3.1MIF在RSA患者血清和蛻膜組織中的變化及意義

妊娠被認(rèn)為是成功的同種異體移植，之所以母體與胎兒之間不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，與母胎界面存在的多種細(xì)胞因子發(fā)揮的免疫赦免機(jī)制密不可分。MIF是在研究遲發(fā)型超敏反應(yīng)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)的一個(gè)具有三維晶體結(jié)構(gòu)的獨(dú)特蛋白質(zhì)，含有115個(gè)氨基酸殘基，相對(duì)分子量為12 500[5]。最初發(fā)現(xiàn)MIF功能為抑制巨噬細(xì)胞在體外隨機(jī)遷移而被命名，廣泛表達(dá)于肺、胃腸道、泌尿生殖道等組織及器官的細(xì)胞中。MIF表達(dá)的增強(qiáng)與炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)、脂質(zhì)過(guò)氧化、胰島素抵抗及內(nèi)皮功能損傷等病理機(jī)制密切相關(guān)，因此是一種多效能細(xì)胞因子[6]。目前，有關(guān)MIF與冠心病、糖尿病、動(dòng)脈粥樣硬化等疾病關(guān)系的文獻(xiàn)較多，但針對(duì)MIF與RSA之間作用的報(bào)道較少。早期通過(guò)Northern印跡和RT-PCR方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，MIF在胚胎著床時(shí)子宮內(nèi)膜及妊娠前3個(gè)月胎盤絨毛及蛻膜組織中表達(dá)增高，并通過(guò)調(diào)控腫瘤壞死因子-α(tumornecrosisfactor-α，TNF-α)、白細(xì)胞介素-1(interleukin-1，IL-1)、白細(xì)胞介素-6(interleukin-6，IL-6)等細(xì)胞因子來(lái)維持胚胎植入和著床[7]。近期研究[8]也認(rèn)為，MIF可能直接參與調(diào)節(jié)胚胎著床的各個(gè)環(huán)節(jié)；妊娠早期及胎盤發(fā)育時(shí)也可產(chǎn)生包括MIF在內(nèi)的多種炎癥因子，而MIF可調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞對(duì)胎盤組織的浸潤(rùn)。

早期妊娠時(shí)，胚胎處于一個(gè)相對(duì)缺氧的環(huán)境中，而缺氧能增高M(jìn)IF的表達(dá)[9]，這些均表明在胚胎植入及發(fā)育時(shí)即妊娠早期，MIF扮演了重要角色。也有學(xué)者[10]發(fā)現(xiàn)，MIF雖在妊娠全程的絨毛膜外細(xì)胞滋養(yǎng)層及蛻膜組織滋養(yǎng)層細(xì)胞有表達(dá)，但表達(dá)水平變化不明顯。Ietta等[11]研究認(rèn)為，妊娠晚期羊水和胎膜中也有MIF的表達(dá)，且分娩期含量最高。提示在分娩期，MIF也同樣扮演了重要角色。Yamada等[12]同時(shí)還發(fā)現(xiàn)，同樣是有反復(fù)流產(chǎn)史的婦女，早孕時(shí)期一些胎兒染色體核型正常者M(jìn)IF水平比有活產(chǎn)史的婦女及正常妊娠婦女都明顯降低。

本研究結(jié)果顯示：和正常早孕組相比，RSA組患者血清和蛻膜組織中MIF水平顯著降低，提示MIF在胚胎植入和早期妊娠的維持中發(fā)揮了重要作用，當(dāng)早孕期間MIF表達(dá)降低時(shí)，就容易導(dǎo)致流產(chǎn)的發(fā)生，但具體機(jī)制不是很清楚。

3.2VEGF在RSA患者血清和蛻膜組織中的變化及意義

VEGF是目前發(fā)現(xiàn)的一種由血管內(nèi)皮細(xì)胞、滋養(yǎng)細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等分泌的，針對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞特異性最高、促血管生長(zhǎng)作用最強(qiáng)的細(xì)胞因子。胎盤是母胎對(duì)話的重要紐帶，胎盤絨毛的血管形成及血管網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建是胎盤發(fā)揮其重要功能的保證。胎盤血管網(wǎng)絡(luò)的形成過(guò)程實(shí)際上是血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)和發(fā)育的過(guò)程，其中VEGF在其中發(fā)揮著非常重要的作用[13]。在妊娠剛剛建立時(shí)，VEGF維持著蛻膜血管的正常增生和血液正常的通透性，而這2個(gè)條件是受精卵成功著床和胚胎的生長(zhǎng)發(fā)育必不可少的。在此之后的妊娠過(guò)程中，VEGF又促進(jìn)了胎盤部位的血管形成和分化。因此，VEGF功能受到抑制，將不可避免地發(fā)生流產(chǎn)[14-15]。影響VEGF的因素非常多，如缺血缺氧、激素變化、吸煙和高血糖等，其中組織內(nèi)氧濃度的變化對(duì)其影響較大，高濃度氧能抑制VEGF的表達(dá)。在正常妊娠時(shí)，孕早期胚胎發(fā)育處于一個(gè)相對(duì)缺氧環(huán)境中，在缺氧情況下，組織中的VEGF表達(dá)迅速上調(diào)，讓新血管迅速形成[1]。Muttukrishna等[16]研究發(fā)現(xiàn)，妊娠婦女血清VEGF水平隨妊娠進(jìn)展升高，在妊娠16周時(shí)達(dá)到高峰，這一時(shí)間正是胎盤正常形成發(fā)育的時(shí)間，但在出現(xiàn)先兆流產(chǎn)癥狀之后VEGF表達(dá)水平則迅速下降。Chai等[17]亦證實(shí)在自然流產(chǎn)時(shí)，患者絨毛組織中VEGF表達(dá)明顯下降。

本研究結(jié)果顯示：RSA患者血清和蛻膜組織中VEGF水平明顯低于正常早孕組(P<0.01)。Vuorela等[18]研究發(fā)現(xiàn)，自然流產(chǎn)婦女胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞VEGF的免疫活性比正常妊娠時(shí)明顯降低，說(shuō)明VEGF在胎盤絨毛血管網(wǎng)建立和胚胎血管形成中的作用是不容忽視的，當(dāng)VEGF功能障礙時(shí)，流產(chǎn)將不可避免的發(fā)生了。有學(xué)者[16,19]認(rèn)為，反復(fù)多次自然流產(chǎn)與VEGF的表達(dá)降低有關(guān)，可能原因：當(dāng)VEGF下降時(shí)，血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖能力下降，血管活性通透物質(zhì)表達(dá)下降，導(dǎo)致胎盤血管網(wǎng)絡(luò)生成障礙或功能不全(胎盤豐富的血液供應(yīng)是維持胎兒宮腔正常發(fā)育的重要保證)，最終因胎兒胎盤組織血供不足導(dǎo)致胚胎停止發(fā)育及流產(chǎn)發(fā)生。也有學(xué)者[20]報(bào)道，RSA發(fā)生增加與VEGF基因多態(tài)性突變有關(guān)。

3.3RSA患者血清和蛻膜組織中的MIF水平與VEGF水平的相關(guān)性

有研究[21-22]表明，作為一個(gè)前炎癥細(xì)胞因子，當(dāng)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等炎癥發(fā)生時(shí)，MIF能提高VEGF的水平，使VEGF分泌隨之增加，同樣具有促進(jìn)血管新生的作用。本研究結(jié)果表明，血清和蛻膜中MIF與VEGF呈正相關(guān)(r=0.72、0.65，P<0.01)，提示MIF和VEGF在RSA發(fā)病機(jī)制中的作用是協(xié)同的，但兩者之間的關(guān)系有待于進(jìn)一步研究。

綜上所述，在正常妊娠的發(fā)生和維持中MIF與VEGF均發(fā)揮了重要的作用，當(dāng)兩者水平均明顯下降時(shí)，影響胚胎著床和胎盤血管網(wǎng)絡(luò)的正常建立，可導(dǎo)致流產(chǎn)的發(fā)生；在患者夫婦雙方身體檢查指標(biāo)都正常時(shí)，RSA的發(fā)生與這2個(gè)細(xì)胞因子的降低關(guān)系密切。因此，在此研究的基礎(chǔ)上，筆者將進(jìn)一步探索MIF、VEGF細(xì)胞因子在RSA發(fā)病機(jī)制中的作用，使RSA能夠得到早期發(fā)現(xiàn)、早期治療。

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(責(zé)任編輯：周麗萍)

ExpressionandSignificanceofMIFandVEGFinSerumandDeciduaofWomenwithRecurrentSpontaneousAbortion

XIEXiao-fang

(Department of Clinical Medicine,Heze Medical College,Heze 274000,China)

ObjectiveToexploretheexpressionandsignificanceofmacrophagemigrationinhibitoryfactor(MIF)andvascularendothelialgrowthfactor(VEGF)inserumanddeciduaofwomenwithrecurrentspontaneousabortion(RSA).MethodsTheserumanddeciduaexpressionofMIFandVEGFwasmeasuredbyELISAin28RSAwomenand30normalearlypregnantwomen.TherelationshipbetweenMIFandVEGFwasanalyzedinbothgroups.ResultsComparedwithnormalearlypregnantwomen,theserumanddeciduaexpressionofMIFandVEGFsignificantlydecreasedinRSAwomen(P<0.01).SimplelinearregressionanalysisshowedthatMIFexpressionwaspositivelycorrelatedwithVEGFexpressioninbothserum(r=0.72,P<0.01)anddecidua(r=0.65,P<0.01).ConclusionThedecreasedexpressionofMIFandVEGFinserumanddeciduamayplayanimportantroleintheoccurrenceanddevelopmentofRSA.

macrophagemigrationinhibitionfactor;vascularendothelialgrowthfactor;

2015-10-18

謝曉芳(1977—)，女，碩士，講師，主要從事圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)的基礎(chǔ)與臨床研究。

R714.21

A

1009-8194(2016)06-0049-04

10.13764/j.cnki.lcsy.2016.06.019