邴欣，劉靜靜，高盧翔，張震，劉兆臣，賈敏，*（.山東省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗研究院，山東濟南500；.山東師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山東濟南5004）

基于光熱效應(yīng)的沙門氏菌試紙條檢測方法研究

邴欣1，劉靜靜2，高盧翔2，張震2，劉兆臣2，賈敏2，*
（1.山東省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗研究院，山東濟南250012；2.山東師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山東濟南250014）

建立一種基于氧化石墨烯-金復(fù)合物的光熱效應(yīng)沙門氏菌滲濾試紙條的檢測方法。制備了石墨烯-金納米復(fù)合物，并將其與抗體偶聯(lián)，在傳統(tǒng)滲濾試紙條方法的基礎(chǔ)上，優(yōu)化了滲濾試紙條的各項試驗條件以及激光照射時長。采用目測法及光熱效應(yīng)溫差法檢測沙門氏菌的最低檢測限分別為2.4×104CFU/mL及2.4×103CFU/mL。繪制了石墨烯-金納米復(fù)合物光熱效應(yīng)滲濾試紙條方法檢測沙門氏菌的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得到線性回歸方程：y=0.754x-2.09，R2=0.971。

試紙條；石墨烯納米復(fù)合物；光熱效應(yīng)；沙門氏菌

沙門氏菌是引起食物中毒的食源性致病菌之一，由沙門氏菌引起的食物中毒在各國的細(xì)菌性食物中毒中位居首位［1］，在我國細(xì)菌性食物中毒病例中，沙門氏菌引起的食物中毒病例約占40%［2］。沙門氏菌是我國眾多食品標(biāo)準(zhǔn)中的檢測項目，且要求不得檢出［3-5］。

傳統(tǒng)沙門氏菌檢測方法需經(jīng)增菌、分離培養(yǎng)、生化反應(yīng)和血清學(xué)鑒定等繁瑣檢驗程序，需4 d～7d才能得到明確診斷結(jié)果，耗時費力［6］。分子生物學(xué)檢測方法需要精密儀器及昂貴試劑，不適宜大范圍推廣使用［7］。沙門氏菌免疫學(xué)檢測方法有酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）、熒光免疫分析法（FIA）、免疫磁性分離法（IMS）等，但ELISA法檢測結(jié)果易出現(xiàn)假陽性，F(xiàn)IA法靈敏度低且成本較高，IMS法靈敏度低［8］。因此，價格低廉、操作簡單、檢測快速的沙門氏菌檢測方法的研究迫在眉睫。

近年來，免疫膠體金試紙條因其簡便、快速、靈敏度高等優(yōu)點得到廣泛的應(yīng)用，但此類檢測方法通常采用目測或者讀卡器區(qū)分顏色深淺來判斷檢測結(jié)果［9-11］，其靈敏度與其他分子檢測方法仍然偏低，且無法實現(xiàn)準(zhǔn)確的定量檢測。因此如何提高試紙條檢測方法的靈敏度，實現(xiàn)定量或半定量檢測已成為試紙條檢測方法的主要發(fā)展方向。近年來，研究者從諸多方面致力于提高試紙條檢測方法的靈敏度，例如將其與熒光技術(shù)［12-13］、電化學(xué)技術(shù)［14-15］相結(jié)合來實現(xiàn)精確的定量檢測。

Qin等［16］利用納米金（AuNPs）的光熱效應(yīng)顯著提高了層析式試紙條的檢測靈敏度，AuNPs與待測物偶聯(lián)后用激光照射，AuNPs可產(chǎn)生熱量并引起溫度變化，且AuNPs的溫度變化與待測物濃度成線性關(guān)系，待測物濃度可通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算得到。已有文獻(xiàn)報道通過AuNPs與氧化石墨烯（GO）的偶聯(lián)可增強光熱效應(yīng)的轉(zhuǎn)化［17］。本研究用氧化石墨烯-納米金復(fù)合物替代傳統(tǒng)免疫膠體金試紙條上的納米金，并利用氧化石墨烯-納米金復(fù)合物的光熱效應(yīng)來進(jìn)行沙門氏菌的檢測以提高靈敏度。

1　材料與方法

1.1材料與試劑

LB培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：北京奧博星生物技術(shù)有限公司；氯金酸：國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；碳酸鉀（K2CO3）、檸檬酸三鈉、甲醇、吐溫20：天津市華特化研科技有限公司；牛血清白蛋白（BSA）：Sigma，Roche738328；氧化石墨烯：南京先豐納米材料科技有限公司；PBS：賽默飛世爾生物化學(xué)制品（北京）有限公司；抗鼠傷寒沙門氏菌抗體：博奧森生物有限公司；鼠傷寒沙門氏菌（ATCC14028）：中國醫(yī)學(xué)菌種保藏中心。

1.2儀器與設(shè)備

MOV-112電熱鼓風(fēng)恒溫干燥箱：三洋電機國際貿(mào)易有限公司；HZQ-X100搖床培養(yǎng)箱：哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)有限公司；IRS紅外熱像儀：上海熱像機電科技股份有限公司；OX-R301-1近紅外燈：OXLASERS。

1.3方法

1.3.1石墨烯-金納米復(fù)合物的制備與電鏡表征

采用檸檬酸鈉還原法［18］制備膠體金：取1 mL 0.1%的氯金酸（HAuCl4）水溶液，用雙蒸水稀釋定容至100mL后轉(zhuǎn)移到250 mL圓底燒瓶中。將圓底燒瓶置于電熱套上加熱直至溶液沸騰。保持煮沸1 min后，劇烈攪拌下一次性迅速加入3.5 mL 1%的檸檬酸三鈉，持續(xù)攪拌，溶液由最初的淺黃色逐漸變?yōu)楹谏僮優(yōu)樗{(lán)色最后變?yōu)榧t色，待顏色保持不變后繼續(xù)煮沸并攪拌10min～15 min，關(guān)閉電熱套停止加熱，使溶液自然冷卻，所得溶液即為膠體金溶液，4℃冰箱儲存待用。

在制備膠體金溶液的基礎(chǔ)上，對比并結(jié)合多項研究［19-20］，最終采用如下方法合成石墨烯-金納米復(fù)合物：當(dāng)膠體金溶液在持續(xù)的攪拌下變?yōu)榧t褐色時，一次性迅速加入3.5 mL的氧化石墨烯溶液，繼續(xù)攪拌至溶液顏色保持不變后，繼續(xù)煮沸并攪拌10 min～15 min，停止加熱，使溶液自然冷卻。8 000 r/min離心10 min除去多余的石墨烯，沉淀物用雙蒸水復(fù)溶即得石墨烯-金納米復(fù)合物。

將制備好的石墨烯-金納米復(fù)合物進(jìn)行電鏡掃描，在電鏡下觀察膠體金顆粒的形態(tài)及其在石墨烯表面的分布情況，驗證復(fù)合物是否合成成功。

1.3.2石墨烯-金納米復(fù)合物標(biāo)記抗沙門氏菌抗體的制備

0.1 mol/L K2CO3調(diào)節(jié)石墨烯-金納米復(fù)合物pH至9.0，取1 mL石墨烯-金納米復(fù)合物置于2 mL的EP管中，加入1 mL 0.6 μg/mL的沙門氏菌抗體，室溫振搖反應(yīng)4 h～8 h，4℃過夜保存。將上述石墨烯-金-抗沙門氏菌抗體復(fù)合物分裝到EP管中，4℃10 000 r/min離心30 min，棄上清，二次水復(fù)溶沉淀，即得石墨烯-金-抗沙門氏菌抗體復(fù)合物。

1.3.3沙門氏菌的培養(yǎng)及樣品前處理

1.3.3.1沙門氏菌的培養(yǎng)

鼠傷寒沙門氏菌ATCC 14028置于LB液體培養(yǎng)基中，37℃搖床培養(yǎng)，待細(xì)菌生長至對數(shù)生長期（OD600=0.3）時收集待用。

1.3.3.2沙門氏菌的前處理

沙門氏菌ATCC 14028在使用之前需要處理，以去除多余的培養(yǎng)基及細(xì)菌代謝物對試驗結(jié)果的干擾。待細(xì)菌生長至對數(shù)生長期時，收集一定量的菌液，4℃，3 000 r/min離心5 min，棄上清，二次水復(fù)溶后再離心。重復(fù)上述離心操作，棄上清，0.01 mol/L PBS緩沖液將離心沉淀溶解后待用。

1.3.4包被液的優(yōu)化

將1 μg抗鼠傷寒沙門氏菌的抗體分別溶于含有0%、2%、4%、6%、8%、10%甲醇的0.01 mol/LPBS溶液，滴加到Whatman AE 99硝酸纖維素膜上的加樣區(qū)內(nèi)，37℃干燥箱中包被1 h。滴加10 μL 3%的BSA封閉液于37℃干燥箱中封閉30 min。然后用0.4%PBST沖洗液沖洗1 min，晾干后滴加10 μL石墨烯-膠體金-抗體復(fù)合物，滲入后于0.4%PBST溶液中沖洗1 min，晾干后觀察背景顏色較低的為最佳包被液。

1.3.5封閉液的優(yōu)化

1.3.5.1封閉液中BSA濃度的優(yōu)化

將1 μg抗鼠傷寒沙門氏菌抗體用甲醇含量為6%的包被液包被，滴加到Whatman AE 99硝酸纖維素膜上的加樣區(qū)內(nèi)，于37℃干燥箱中包被1 h。然后分別滴加10 μL 0%、1%、2%、3%、4%、5%封閉液于37℃干燥箱中封閉30 min，于0.4%PBST沖洗液中沖洗1 min。晾干后滴加10 μL石墨烯-膠體金-抗體復(fù)合物，滲入后于0.4%PBST沖洗液中沖洗1 min，晾干后觀察背景較低的為封閉液中最佳BSA濃度。

通過設(shè)置微課程上傳至教學(xué)平臺，教師課上可將重點微課程加入教學(xué)中，學(xué)生課下根據(jù)自身情況反復(fù)觀看微課，便于課前預(yù)習(xí)、課后復(fù)習(xí)[2][3]。

1.3.5.2封閉液中Tween-20的優(yōu)化

將1 μg抗鼠傷寒沙門氏菌的抗體用甲醇含量為6%的包被液包被，滴加到Whatman AE 99硝酸纖維素膜上的加樣區(qū)內(nèi)，37℃干燥箱中包被1 h。滴加10 μL含有0%、0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%Tween-20的封閉液于37℃干燥箱中封閉30 min，于0.4%PBST沖洗液中沖洗1 min。晾干后滴加10 μL石墨烯-膠體金-抗體復(fù)合物，滲入后于0.4%PBST沖洗液中沖洗1 min，晾干后觀察背景較低的為封閉液中最佳Tween-20的量。

1.3.6沖洗液優(yōu)化

將1 μg抗鼠傷寒沙門氏菌抗體用甲醇含量為6%的包被液包被，包被結(jié)束后滴加10 μL 4%BSA+0.6% Tween-20的封閉液于37℃干燥箱中封閉30 min，于0.4%PBST沖洗液中沖洗1 min。晾干后滴加10 μL石墨烯-膠體金-抗體復(fù)合物，滲入后，分別用含有0%、0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%Tween-20的沖洗液沖洗1 min，晾干后觀察背景較低的為最佳沖洗液。

1.3.7照射時長的優(yōu)化

制作完成石墨烯-膠體金-抗體復(fù)合物試紙條后，用甲醇含量為6%的包被液將1 μg抗鼠傷寒沙門氏菌的抗體包被到Whatman AE 99硝酸纖維素膜上的加樣區(qū)內(nèi)，37℃包被1 h，滴加10 μL 4%BSA+0.6% Tween-20的封閉液于37℃干燥箱內(nèi)封閉30 min，于最佳沖洗液中沖洗1 min，晾干后分別滴加10 μL石墨烯-膠體金-抗體復(fù)合物與相同數(shù)量的鼠傷寒沙門氏菌沉淀的混合物，滲入后，于0.4%Tween-20沖液洗中沖洗1 min，晾干后，808 nm紅外光照射加樣區(qū)1 min，熱像儀測量并記錄加樣區(qū)不同時間點（0、10、20、30、40、50、60 s）的溫度并計算溫差，觀察溫差情況選擇最佳的照射時長。

1.3.8石墨烯-膠體金復(fù)合物光熱效應(yīng)滲濾試紙條的靈敏度測試

用甲醇含量為6%的包被液將1 μg抗鼠傷寒沙門氏菌的抗體滴加到Whatman AE 99硝酸纖維素膜上的加樣區(qū)內(nèi)，37℃包被1 h，滴加10 μL 4%BSA+0.6% Tween-20的封閉液于37℃干燥箱內(nèi)封閉30 min，于0.4%Tween-20沖液洗中沖洗1 min，晾干后，分別加入10 μL石墨烯-膠體金-抗體復(fù)合物與不同細(xì)菌數(shù)鼠傷寒沙門氏菌沉淀的混合物，滲入后，于0.4%Tween-20沖洗液中沖洗1 min，晾干后，808 nm紅外光照射加樣區(qū)最優(yōu)時長，熱像儀測量并記錄加樣區(qū)的溫度并計算溫差。多次試驗確定最低檢測限，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2　結(jié)果與分析

2.1石墨烯—金納米復(fù)合物的制備與電鏡表征石墨烯—金納米復(fù)合物的電鏡表征見圖1。

圖1　石墨烯-金納米復(fù)合物透射電鏡圖片F(xiàn)ig.1　The TEM image of GO-Au nanocomposite

綜合試驗條件、制備的難易程度及所需時間、制備的復(fù)合物的穩(wěn)定性等多方面因素，本試驗將目前多種石墨烯-金納米復(fù)合物制備法的優(yōu)點進(jìn)行融合，得到了如下所述的制備方法。首先利用檸檬酸三鈉還原法制備膠體金，在此基礎(chǔ)上加入氧化石墨烯溶液并通過加熱進(jìn)行原位還原。該方法用時短，制備的石墨烯-金納米復(fù)合物穩(wěn)定性高。利用透射電鏡（TEM）對制備的石墨烯-金納米復(fù)合物進(jìn)行表征，電鏡結(jié)果顯示，本研究所制備的復(fù)合物，金顆粒呈現(xiàn)球形，平均粒徑約20 nm且大小均一，較好地結(jié)合在石墨烯片層上，證明本試驗所用方法可應(yīng)用于合成石墨烯-金納米復(fù)合物。

2.2最佳包被液的選擇

包被液通過靜電力可以將抗體牢固的包被到Whatman AE 99硝酸纖維素膜上，本試驗探究了0.01 mol/L的PBS緩沖液中不同甲醇含量對抗體固定的影響，結(jié)果見圖2。如圖2所示，結(jié)果表明：甲醇含量為6%時背景明顯比不加甲醇及其它濃度甲醇的背景顏色淺。由于背景顏色深淺直接影響試紙條的升溫情況，因此選擇甲醇含量為6%的PBS緩沖液。

圖2　不同包被液對滲濾試紙條方法的影響Fig.2　Dot immune-graphene-gold filtration assay with different coating buffers

2.3最佳封閉液的選擇

2.3.1封閉液中BSA濃度的選擇

封閉液可以占據(jù)Whatman AE 99硝酸纖維素膜上的非特異性位點，降低非特異性結(jié)合，增強信噪比，常見的封閉液主要有BSA和脫脂牛奶兩種，脫脂牛奶相對BSA成分復(fù)雜，因此本試驗選擇BSA作為封閉液，結(jié)果見圖3。如圖3所示，BSA含量為4%時背景明顯較其它BSA含量的背景顏色淺，因此本試驗選擇BSA含量為4%的封閉液。

圖3 封閉液中不同BSA含量對滲濾試紙條方法的影響Fig.5　Dot immune-graphene-gold filtration assay with different concentration BSA blocking buffers

2.3.2封閉液中Tween-20的選擇

Tween-20有復(fù)性抗原的作用，可提高特異性的識別能力，因此本試驗優(yōu)化了封閉液中Tween-20的量，結(jié)果見圖4。如圖4所示，結(jié)果表明：Tween-20含量為0.6%時背景較低。因為背景顏色深淺直接影響試紙條的升溫情況，因此本試驗選擇添加0.6%Tween-20的封閉液。

圖4　添加不同Tween-20的封閉液對滲濾試紙條方法的影響Fig.4　Dot immune-graphene-gold filtration assay with different concentration Tween-20 blocking buffers

2.4最佳沖洗液的選擇

過量的封閉液除結(jié)合非特異性位點外還有可能結(jié)合特異性位點，過量的待檢測鼠傷寒沙門氏菌及未結(jié)合的石墨烯-膠體金-抗體復(fù)合物也會對滲濾試紙條的靈敏度產(chǎn)生影響，Tween-20為表面活性劑，可以減少背景和非特異性條帶，故優(yōu)化沖洗液中Tween-20的量。本試驗用0.01 mol/L PBS添加Tween-20作為沖洗液結(jié)果見圖5。如圖5所示，結(jié)果表明：Tween-20含量為0.4%時背景較低，因此選用0.01 mol/L PBS+ 0.4%Tween-20作為沖洗液。

圖5　不同沖洗液對滲濾試紙條方法的影響Fig.7　Dot immune-graphene-gold filtration assay with different washing buffers

2.5最佳照射時長的選擇

石墨烯-膠體金復(fù)合物在808 nm紅外光照射下產(chǎn)熱產(chǎn)生溫差，適宜的照射時長可以節(jié)約試驗時間同時提高測試穩(wěn)定性。試驗結(jié)果如圖6所示。結(jié)果表明：隨著照射時間的增加，溫差不斷增加，但10 s之后增加趨勢不明顯，為節(jié)約試驗時間并減小試驗誤差，本試驗選擇20 s為最佳照射時間。

圖6　照射時長的優(yōu)化Fig.6　Optimization of the irradiation time

2.6石墨烯-膠體金復(fù)合物光熱效應(yīng)滲濾試紙條靈敏度測試

光熱效應(yīng)滲濾試紙條方法在傳統(tǒng)滲濾試紙條方法定性檢測的基礎(chǔ)上根據(jù)石墨烯-膠體金的良好熱效應(yīng)建立，通過808 nm紅外光照射加樣區(qū)得出溫差定量測定鼠傷寒沙門氏菌。激光照射前對照組的溫度為T01，808 nm激光照射20 s后熱像儀測得的溫度為T02，滴加沙門氏菌的試驗組激光照射前的溫度為T1，808 nm激光照射20 s后熱像儀測得的溫度為T2，溫差ΔT=T2-T1-（T02-T01）。

以鼠傷寒沙門氏菌的個數(shù)（CFU/mL）為橫坐標(biāo)，溫差（ΔT）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出鼠傷寒沙門氏菌的個數(shù)與溫差的線性關(guān)系。結(jié)果如圖7所示。結(jié)果表明：隨著鼠傷寒沙門氏菌的個數(shù)的增加，溫差不斷增加。該試驗所得標(biāo)準(zhǔn)曲線線性公式為：y=0.754x-2.09，R2=0.971，說明鼠傷寒沙門氏菌的個數(shù)與溫差呈良好的線性相關(guān)。當(dāng)信噪比=3∶1時，鼠傷寒沙門氏菌的個數(shù)為2 400 CFU/mL，鼠傷寒沙門氏菌的最低檢測限為2 400 CFU/mL。

圖7　沙門氏菌數(shù)目與溫差的線性標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.7　The linear relation of the number of Salmonella and ΔT

3　結(jié)論

本研究利用檸檬酸三鈉還原制備膠體金，在此基礎(chǔ)上加入氧化石墨烯溶液，通過加熱法進(jìn)行原位還原，確定了石墨烯-金納米復(fù)合物的制備方法與條件。利用該方法制備的石墨烯-金納米復(fù)合物對抗沙門氏菌抗體進(jìn)行標(biāo)記，制備了石墨烯-金-抗沙門氏菌抗體復(fù)合物。采用雙抗夾心法，建立了檢測沙門氏菌的基于石墨烯-金納米復(fù)合物光熱效應(yīng)的滲濾試紙條方法。該滲濾試紙條方法采用目測法檢測沙門氏菌時，在沙門氏菌數(shù)目為2.4×104CFU/mL時出現(xiàn)可與空白區(qū)分開的紅斑，而采用溫差法檢測時，可以將檢測限降低到2.4×103CFU/mL。相比基于膠體金光熱效應(yīng)的滲濾試紙條方法，該方法對沙門氏菌檢測的靈敏度提高了10倍。本研究通過大量試驗數(shù)據(jù)計算繪制出沙門氏菌數(shù)目與溫度差的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程：y=0.754x-2.09，R2=0.971。試驗結(jié)果證明，基于光熱效應(yīng)的滲濾試紙條方法較傳統(tǒng)滲濾試紙條方法靈敏度更高，該方法可應(yīng)用于鼠傷寒沙門氏菌的檢測。

［1］王毳，閆磊，曾慶祝.沙門氏菌的檢測技術(shù)與方法［J］.現(xiàn)代食品科技，2007，23（5）：82-85

［2］ Yang B，Qu D，Zhang X，et al.Prevalence and characterization of Salmonella serovars in retail meats of marketplace in Shaanxi，China ［J］.International journal of food microbiology，2010，141（1）：63-72

［3］中華人民共和國衛(wèi)生部，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.GB 2726—2005熟肉制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2005

［4］中華人民共和國衛(wèi)生部，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.GB 7099—2003糕點、面包衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2003

［5］中華人民共和國衛(wèi)生部，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.GB 9678.1—2003糖果衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2003

［6］孫園園，趙鵬，劉駿，等.沙門氏菌檢測方法研究進(jìn)展［J］.中國畜牧獸醫(yī)，2011，38（1）：218-221

［7］李小玲，劉斌，但現(xiàn)龍，等.沙門氏菌內(nèi)標(biāo)PCR快速檢測試劑盒的研制與應(yīng)用［J］.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，44（16）：3395-3402

［8］劉喆，張書蕭，王少輝，等.沙門氏菌的檢測技術(shù)進(jìn)展［J］.中國動物傳染病學(xué)報，2012，20（2）：81-86

［9］Liu C，Jia Q，Yang C，et al.Lateral flow immunochromatographic assay for sensitive pesticide detection by using Fe3O4nanoparticle aggregates as color reagents［J］.Anal Chem，2011，83（17）：6778-6784

［10］Kim Y A，Lee E H，Kim K O，et al.Competitive immunochromatographic assay for the detection of the organophosphorus pesticide chlorpyrifos［J］.Anal chimacta，2011，693（1）：106-113

［11］Zhou Y，Pan F G，Li Y S，et al.Colloidal gold probe-based immunochromatographic assay for the rapid detection of brevetoxins in fishery product samples［J］.BiosensBioelectron，2009，24（8）：2744-2747

［12］Xu W，Chen X，Huang X，et al.Ru（phen）3 2+doped silica nanoparticle based immunochromatographic strip for rapid quantitative detection of β-agonist residues in swine urine［J］.Talanta，2013，114：160-166

［13］Li Z，Wang Y，Wang J，et al.Rapid and sensitive detection of protein biomarker using a portable fluorescence biosensor based on quantum dots and a lateral flow test strip［J］.Anal Chem，2010，82（16）：7008-7014

［14］Wang L，Lu D，Wang J，et al.A novel immunochromatographic electrochemical biosensor for highly sensitive and selective detection of trichloropyridinol，a biomarker of exposure to chlorpyrifos［J］. BiosensBioelectron，2011，26（6）：2835-2840

［15］Nian H，Wang J，Wu H，et al.Electrochemical immunoassay of cotinine in serum based on nanoparticle probe and immunochromatographic strip［J］.Anal ChimActa，2012，713：50-55

［16］Qin Z，Chan W C W，Boulware D R，et al.Significantly improved analytical sensitivity of lateral flow immunoassays by using thermal contrast［J］.AngewChemInt Ed，2012，124（18）：4434-4437

［17］Zedan A F，Moussa S，Terner J，et al.Ultrasmall gold nanoparticles anchored to graphene and enhanced photothermal effects by laser irradiation of gold nanostructures in graphene oxide solutions［J］.ACS nano，2012，7（1）：627-636

［18］Frens G.Controlled nucleation for the regulation of the particle size in monodisperse gold suspensions［J］.Nature，1972（241）：20-22

［19］馮曉苗，閆真真.石墨烯-金納米復(fù)合材料：水熱合成及在生物傳感器中的應(yīng)用［J］.無機化學(xué)學(xué)報，2013，29（5）：1051-1056

［20］Hu J，Li F，Wang K，et al.One-step synthesis of graphene-AuNPs by HMTA and the electrocatalytical application for O2and H2O2［J］.Talanta，2012，93：345-349

A Paper-based Detection Method of Salmonella Using the Photo-thermal Effect

BING Xin1，LIU Jing-jing2，GAO Lu-xiang2，ZHANG Zhen2，LIU Zhao-chen2，JIA Min2，*
（1.Shandong Product Quality Inspection Research Institute，Jinan 250012，Shandong，China；2.College of Life Science，Shandong Normal University，Jinan 250014，Shandong，China）

A novel paper-based dot immune-graphene-gold filtration assay for the detection of Salmonella was developed based on the photothermal effect of graphene oxide（GO）-Au nanocomposite.First of all，the GO-Au nanocomposite and anti-Salmonella antibody modified GO-Au nanocomposite were synthesized.Based on the traditional strip test method，experimental conditions such as the buffer solutions and the irradiation time were optimized.The limit of naked eye detection was as low as 2.4×104CFU/mL and could be increased to 2.4×103CFU/mL by the use of temperature contrast.The standard curve of dot immune-graphene-gold filtration assay for detecting Salmonella was established，and the linear regression equation：y=0.754x-2.09，R2=0.971.

strip；graphene nanocomposites；photo-thermal effect；Salmonella

2016-05-06

國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局科技計劃項目（2014QK122）作者簡介：邴欣（1977—），男（漢），高級工程師，博士，研究方向：產(chǎn)品質(zhì)量安全。