李新 劉海濤 陶凌

基礎(chǔ)研究

β1-整合素促進 Akt/GSK-3β/β-catenin 信號活化并抑制阿霉素誘導的大鼠心肌細胞損傷

李新 劉海濤 陶凌

目的 研究β1-整合素過表達對阿霉素誘導的大鼠心肌細胞損傷的作用。方法 分離新生SD大鼠心肌細胞，隨機分為對照組、空載體組、過表達組、阿霉素組、空載體+阿霉素組、過表達+阿霉素組和LY294002預處理組。利用四唑鹽比色法（MTT）檢測細胞存活，檢測心肌細胞乳酸脫氫酶（LDH）釋放率、丙二醛（MDA）含量、谷胱甘肽過氧化物酶（GPx）活性、超氧化物歧化酶（SOD）活性，利用實時定量PCR和Western blot檢測細胞中β1-整合素以及Akt磷酸化、GSK-3β、β-catenin、Bcl2、Bax的表達，同時利用流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡。結(jié)果 空載體組和過表達組轉(zhuǎn)染效率為（68.8±9.5）%和（71.2±8.9）%。與對照組比較，阿霉素組細胞存活率顯著降低（P＜0.05），而過表達+阿霉素則提高細胞存活率（P＜0.05）。相比于對照組，阿霉素處理促進LDH釋放和MDA形成（P＜0.05），降低GPx和SOD活性（P＜0.05），過表達+阿霉素則可以逆轉(zhuǎn)阿霉素作用。阿霉素抑制心肌細胞Akt磷酸化和β-catenin核轉(zhuǎn)移，β1-整合素過表達則促進Akt磷酸化和β-catenin核轉(zhuǎn)移。阿霉素處理促進細胞凋亡并下調(diào)Bcl2表達、上調(diào)Bax表達，β1-整合素過表達抑制細胞凋亡并上調(diào)Bcl2表達、下調(diào)Bax表達。抑制Akt磷酸化顯著阻礙β1-整合素的作用。結(jié)論 過表達β1-整合素可拮抗阿霉素誘導的細胞毒性，這可能與Akt/GSK-3β/β-catenin信號活化相關(guān)。

β1-整合素；阿霉素；心肌細胞；Akt磷酸化；β-catenin

阿霉素是一種抗癌藥物，常用于治療實體瘤和血液惡性疾病[1]。盡管阿霉素在抗腫瘤方面應(yīng)用廣泛，然而由于其能夠引發(fā)心肌病變和心力衰竭，從而限制了阿霉素在臨床上的應(yīng)用[2]。阿霉素誘發(fā)心臟毒性的機制復雜，涉及到多種信號通路異常[3]。如何保護化療患者免于阿霉素引起心肌功能的損傷已成為當前研究的熱點。整合素是由α和β兩種Ⅰ型跨膜亞基構(gòu)成的異二聚體糖蛋白[4]。整合素是重要的信號分子，介導多種信號的跨膜轉(zhuǎn)導，參與細胞的增殖、存活和分化等調(diào)控過程[5]。β1-整合素是整合素家族中表達廣泛的成員，其功能缺失可導致明顯的心臟纖維化和心臟功能異常[6]。本研究通過在心肌細胞中過表達β1-整合素，旨在探索β1-整合素是否能夠拮抗阿霉素誘導的心肌細胞毒性，從而可能為預防藥物心臟毒性提供措施。

1 材料與方法

1.1 材料 新生SD大鼠由第四軍醫(yī)大學實驗動物中心提供［SCXK（軍）2015-007］；阿霉素購自大連美侖生物技術(shù)公司；乳酸脫氫酶（LDH）試劑盒、丙二醛（MDA）試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶（GPx）試劑盒、超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒購自南京建成生物；一抗β1-整合素抗體、磷酸化Akt抗體、GSK-3β 抗體、β-catenin抗體、Bcl2抗體、Bax抗體、β-actin抗體、Lamin B1抗體購自美國Santa Cruz Biotech公司；辣根過氧化物酶酶標二抗購自美國Abcam公司；Annexin V-FITC細胞凋亡檢測試劑盒購自江蘇南通碧云天生物；總RNA提取試劑盒、PrimeScriptTMRT Master Mix反轉(zhuǎn)錄試劑盒、SYBRRGreen I qPCR試劑盒購自大連寶生物；EpiQuik Nuclear Extraction Kit試劑盒購自美國Epigentek公司。

1.2 方法

1.2.1 細胞分離和培養(yǎng) 將6只出生3 d內(nèi)的SD大鼠用戊巴比妥鈉深麻后處死，分離心臟，剪取心室，用0.25%的胰蛋白酶消化分離心肌細胞。將消化后的細胞懸浮于含20%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中，貼壁培養(yǎng)去除成纖維細胞。分離培養(yǎng)24 h后，細胞計數(shù)，按1×106/孔接種于24孔細胞培養(yǎng)板，用含15%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。每隔2 d換液一次，取第4天細胞用作后續(xù)實驗。

1.2.2 細胞分組處理 將大鼠心肌細胞隨機分為7組：對照組、空載體組、過表達組、阿霉素組、空載體+阿霉素組、過表達+阿霉素組和LY29004預處理組?？蛰d體組和過表達組細胞分別利用腺病毒空載體和β1-整合素重組腺病毒轉(zhuǎn)染；阿霉素組細胞利用0.5 μmol/L阿霉素處理24 h；空載體+阿霉素組和過表達+阿霉素組細胞分別轉(zhuǎn)染腺病毒空載體和β1-整合素重組腺病毒24 h后添加0.5 μmol/L阿霉素處理24 h；LY29004預處理組細胞轉(zhuǎn)染β1-整合素重組腺病毒24 h后，先用10 μl 10 mM的LY29004預處理2 h，而后添加阿霉素處理24 h；對照組用等體積的PBS處理相同時長。

1.2.3 重組腺病毒載體構(gòu)建和體外轉(zhuǎn)染 擴增目的基因β1-整合素，將產(chǎn)物利用內(nèi)切酶BamHⅠ和SalⅠ雙酶切，插入到腺病毒質(zhì)粒載體pDC315的多克隆位點區(qū)，構(gòu)建 pDC315-β1-integrin。利用Lipofectamine 2000 轉(zhuǎn)染試劑，將 pDC315-β1-integrin與腺病毒包裝質(zhì)粒pBHGloxdelE13cre共轉(zhuǎn)染HEK293細胞。48 h后擴增，反復凍融收集重組腺病毒Adβ1-integrin，測序擴增產(chǎn)物鑒定重組腺病毒。將心肌細胞按1×106/孔接種于六孔板，按感染復數(shù)（multiplicity of infection，MOI）=150進行轉(zhuǎn)染。24 h后換液，熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效率，并利用qRT-PCR和Western blot進行檢測。

1.2.4 四唑鹽比色法檢測心肌細胞存活 將細胞按1×105個/孔接種于96孔培養(yǎng)板，加入15%FBS的H-DMEM培養(yǎng)液進行培養(yǎng)。培養(yǎng)24 h后進行MTT實驗檢測。按實驗分組情況，每孔加入20 μl MTT（5 mg/ml）后培養(yǎng) 4 h。去掉上清，每孔 150 μl加入二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO），混勻后用酶標儀于490 nm波長下測定吸收值。

1.2.5 檢測心肌細胞損傷指標（LDH、MDA、GPx、SOD含量） 將對照組、空載體組、過表達組、阿霉素組、空載體+阿霉素組、過表達+阿霉素組細胞收集至1.5 ml離心管中，分別利用乳酸脫氫酶（LDH）試劑盒、丙二醛（MDA）試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶（GPx）試劑盒、超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒測定細胞上清液中LDH、MDA、GPx、SOD酶的含量。

1.2.6 分離心肌細胞細胞核和細胞質(zhì)蛋白 收集各組心肌細胞，利用EpiQuik Nuclear Extraction Kit試劑盒按說明書提取細胞核蛋白和細胞質(zhì)蛋白。

1.2.7 流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡 細胞收集至1.5 ml離心管中，細胞計數(shù)后調(diào)整細胞密度為1×106/L，制成單細胞懸液，加入100 μl結(jié)合緩沖液與 FITCAnnexin V（20 μg/ml）10 μl，室溫避光放置 30 min，再加入 PI（50 μg/ml）5 μl，室內(nèi)避光反應(yīng) 5 min，隨后添加 400 μl結(jié)合緩沖液，上流式細胞儀檢測。

1.2.8 實時定量PCR（qRT-PCR）分析 提取心肌細胞總RNA，并利用PrimeScriptTMRT Master Mix反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA第一鏈。以cDNA第一鏈為模板擴增目的基因。所用引物：β1-整合素上游引物 5′-GACGAAAGTGCTCTAACA-3′，下游引物5′-CTGAAGGACCACCTCTAC-3′；β-actin 上游引物 5′-GAGGGAAATCGTGCGTGAC-3′，下游引物5′-GGAAGGAAGGCTGGAAGAG-3′。擴增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后染色、拍照。采用ABI 7500型實時熒光定量PCR儀和SYBRRGreen I qPCR試劑盒測定目的基因表達。目的基因和β-actin基因的拷貝數(shù)分別根據(jù)產(chǎn)生的Ct值從各自的標準曲線獲得，取3次重復的平均值，用目的基因的拷貝數(shù)除以β-actin的拷貝數(shù)作為靶基因的相對表達量。

1.2.9 Western blot分析 收集心肌細胞，RIPA裂解緩沖液裂解細胞，提取心肌細胞總蛋白。在常溫下用12%的SDS——聚丙烯酰胺凝膠恒壓電泳分離蛋白，半干法將分離后的蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，用含5%脫脂奶粉的TBST室溫下水平搖床慢搖封閉1 h。封閉結(jié)束后，用抗β1-整合素抗體（1∶500）、抗磷酸化Akt（p-Akt）抗體（1∶600）、抗βcatenin 抗體（1∶600）、抗 GSK-3β 抗體（1∶600）、抗Bcl2抗體（1∶600）、抗 Bax抗體（1:600）在 4 ℃環(huán)境中孵育過夜。一抗孵育結(jié)束，漂洗，隨后用辣根過氧化物酶標記的二抗（1∶10000）室溫下孵育1 h。利用ECL顯色試劑盒顯色，暗室環(huán)境負片成像，以βactin（細胞質(zhì)）、Lamin B1（細胞核）為內(nèi)參進行定量分析。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 13.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。本研究所有數(shù)據(jù)均采用±s表示，三組或三組以上間均值比較采用單因素方差分析，并采用LSD法進行兩兩比較。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 重組腺病毒載體轉(zhuǎn)染促進心肌細胞中β1-整合素的表達 與對照組比較，空載體組（150 MOI）和過表達組（150 MOI）心肌細胞在轉(zhuǎn)染48 h后，熒光鏡下可觀察到明顯熒光，轉(zhuǎn)染率為（68.8±9.5）%和（71.2±8.9）%（圖 1）。同時，與對照組和空載體組比較，過表達組細胞中β1-整合素mRNA和蛋白的相對表達量顯著增高，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見圖 2～4。

2.2 β1-整合素過表達提高阿霉素處理的心肌細胞存活率 與對照組比較，空載體組和過表達組心肌細胞存活率未見統(tǒng)計學差異（P＞0.05），而阿霉素處理顯著降低心肌細胞的體外存活率（P＜0.05）。相比于阿霉素組，過表達+阿霉素組心肌細胞存活率顯著提高（P＜0.05）?？蛰d體+阿霉素組與阿霉素組間細胞存活無明顯差異（P＞0.05）。見圖5。

2.3 β1-整合素過表達抑制阿霉素誘導的心肌細胞損傷 與對照組相比，空載體組和過表達組心肌細胞LDH釋放率、MDA含量、GPx活性、SOD活性變化不明顯，未見統(tǒng)計學差異（P＞0.05）；阿霉素組LDH釋放率和MDA含量顯著增加（P＜0.05），而GPx活性和SOD活性顯著降低（P＜0.05）。與阿霉素組比較，過表達+阿霉素組細胞LDH含量和MDA含量明顯降低（P＜0.05），GPx活性和SOD活性增高（P＜0.05）?？蛰d體+阿霉素組細胞LDH釋放量、MDA含量、GPx活性、SOD活性與阿霉素組細胞相比無明顯變化（P＞0.05）。見表1。

表1 各組心肌細胞上清LDH含量、MDA含量、GPx 和 SOD 活性比較（±s）

表1 各組心肌細胞上清LDH含量、MDA含量、GPx 和 SOD 活性比較（±s）

注：與對照組比較，aP＜0.05；與阿霉素組比較，bP＜0.05

?

2.4 β1-整合素促進心肌細胞 Akt/GSK-3β/βcatenin信號活化 與對照組和空載體組比較，過表達組細胞Akt磷酸化水平（p-Akt）和細胞核βcatenin表達水平顯著提高（P＜0.05），而 GSK-3β 和細胞質(zhì)β-catenin表達水平則明顯降低（P＜0.05）；與對照組比較，阿霉素處理后的心肌細胞中，Akt磷酸化水平和細胞核β-catenin表達水平降低（P＜0.05），GSK-3β和細胞質(zhì)β-catenin表達水平則明顯升高（P＜0.05）。與阿霉素組相比，過表達+阿霉素組細胞p-Akt和細胞核β-catenin表達明顯上調(diào)，GSK-3β和細胞質(zhì) β-catenin表達下調(diào)（P＜0.05）。這些蛋白在空載體+阿霉素組細胞中的表達水平與阿霉素組無顯著差異（P＞0.05）。見圖6、7。

2.5 抑制Akt磷酸化促進心肌細胞細胞凋亡 與對照組比較，空載體組和過表達組心肌細胞細胞凋亡比例無顯著差別（P＞0.05）；與對照組比較，阿霉素組心肌細胞細胞凋亡比例顯著增高（P＜0.05）。與阿霉素組及空載體+阿霉素組比較，過表達+阿霉素組細胞凋亡比例明顯降低（P＜0.05）。然而與過表達+阿霉素組比較，LY294002預處理組細胞凋亡比例顯著升高（P＜0.05）。見表 2。

表2 各組心肌細胞細胞凋亡比例（±s）

表2 各組心肌細胞細胞凋亡比例（±s）

注：與對照組比較，aP＜0.05；與阿霉素組比較，bP＜0.05；與過表達+阿霉素組比較，cP＜0.05

?

2.6 抑制Akt磷酸化抑制Bcl2蛋白表達而促進Bax蛋白表達 與對照組比較，空載體組和過表達組心肌細胞中Bcl2蛋白和Bax蛋白表達量無明顯變化（P＞0.05）；相比于對照組，阿霉素組細胞中Bcl2蛋白表達下降，Bax蛋白表達上升，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。與阿霉素組和空載體+阿霉素組相比，過表達+阿霉素組細胞Bcl2蛋白表達上升，Bax蛋白表達降低（P＜0.05）。與過表達+阿霉素組比較，LY294002預處理組細胞中Bcl2蛋白表達下降而Bax蛋白表達升高（P＜0.05）。見圖8、9。

3 討論

阿霉素導致的嚴重副作用極大地限制了它在臨床上的使用[7]。國內(nèi)外有多個研究嘗試利用中藥來減緩阿霉素對動物模型的心臟毒性，然而效果還有待臨床驗證[8-10]。本研究嘗試利用轉(zhuǎn)染重組腺病毒載體的方法，于體外培養(yǎng)的心肌細胞中過表達β1-整合素，觀察β1-整合素過表達對阿霉素環(huán)境下心肌細胞的影響。阿霉素處理后，心肌細胞存活率顯著降低，而過表達β1-整合素則可以提高心肌細胞在阿霉素環(huán)境中的存活，說明β1-整合素可能參與拮抗阿霉素誘導的細胞毒性。隨后，本研究檢測了心肌細胞中LDH釋放、MDA含量、GPx活性、SOD活性四項細胞損傷指標，同樣證明了β1-整合素在抵抗阿霉素細胞毒性中的作用。因此，本研究接下來探索β1-整合素拮抗阿霉素細胞毒性的作用機制。

Akt蛋白是細胞內(nèi)重要的信號蛋白分子，它的活化可促進多種細胞的體外存活[11,12]。Yoshida等[13]報道了Akt蛋白的磷酸化介導了CCN1誘導的心肌細胞抗凋亡作用，能夠促進心肌細胞在缺血后的存活。本研究因此驗證β1-整合素過表達是否可以通過活化Akt蛋白起保護作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，β1-整合素顯著提高心肌細胞Akt磷酸化水平并拮抗阿霉素下調(diào)Akt磷酸化蛋白的作用。Wu等[14]發(fā)現(xiàn)，Akt磷酸化可以促進GSK-3β/β-catenin信號活化和β-catenin蛋白核轉(zhuǎn)移，從而發(fā)揮對心肌細胞的保護作用。在本研究中，β1-整合素過表達可以下調(diào)GSK-3β和細胞質(zhì)β-catenin，促進β-catenin向細胞核轉(zhuǎn)移。然而，阿霉素處理則誘導相反的作用。這些結(jié)果揭示，β1-整合素有可能通過活化Akt/GSK-3β/β-catenin信號來拮抗阿霉素誘導的細胞毒性。在正常環(huán)境中，β1-整合素也具有促進Akt磷酸化、β-catenin核轉(zhuǎn)移的作用，但是對細胞存活卻無顯著影響，可能原因是在正常環(huán)境中限制心肌細胞存活的因素并不是Akt磷酸化水平的改變[15]。本研究隨后探索了β1-整合素對心肌細胞細胞凋亡的影響。在正常環(huán)境下，β1-整合素過表達對心肌細胞細胞凋亡無明顯作用。在阿霉素作用下，心肌細胞細胞凋亡率顯著增加，而促進β1-整合素的表達可顯著降低阿霉素導致的細胞凋亡。然而，當利用LY294002預處理心肌細胞后，β1-整合素拮抗細胞凋亡的作用被顯著抑制，由此可推測Akt活性在β1-整合素誘導的拮抗效應(yīng)中起著關(guān)鍵作用。本研究也分析了心肌細胞中抗凋亡蛋白Bcl2和促凋亡蛋白Bax的表達，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，阿霉素可下調(diào)Bcl2的表達而上調(diào)Bax的表達，β1-整合素過表達則拮抗阿霉素的作用，上調(diào)Bcl2表達而下調(diào)Bax的表達。

綜合上述本研究發(fā)現(xiàn)，過表達β1-整合素可改善阿霉素導致的心肌細胞損傷，這種作用可能與細胞中Akt/GSK-3β/β-catenin信號活化相關(guān)。因此，本研究結(jié)果可對探索保護化療患者免于阿霉素藥物導致的心肌細胞損傷的途徑提供可行性選擇。

圖1 心肌細胞重組腺病毒轉(zhuǎn)染

圖2 qRT-PCR檢測各組心肌細胞中β1-整合素mRNA的表達

圖3 Western blot檢測各組心肌細胞中β1-整合素蛋白表達

圖4 各組心肌細胞中β1-整合素蛋白表達相對定量

圖5 四唑鹽比色法檢測各組心肌細胞存活

圖6 Western blot檢測各組心肌細胞p-Akt、GSK-3β、β-catenin蛋白表達

圖7 各組心肌細胞p-Akt、GSK-3β、β-catenin表達相對定量

圖8 Western blot檢測各組心肌細胞Bcl2和Bax蛋白的表達

圖9 各組心肌細胞Bcl2和Bax蛋白表達相對定量

［1］Smith LA，Cornelius VR，Plummer CJ，et al.Cardiotoxicity of anthracycline agents for the treatment of cancer:systematic review and meta-analysis of randomised controlled trials.BMC Cancer，2010，10：337.

［2］Ezquer F，Gutierrez J，Ezquer M，et al.Mesenchymal stem cell therapy for doxorubicin cardiomyopathy：hopes and fears.Stem Cell Res Ther，2015，6：116.

［3］Arafa MH，Mohammad NS，Atteia HH，et al.Protective effect of resveratrolagainstdoxorubicin-induced cardiactoxicity and fibrosis in male experimental rats.J Physiol Biochem，2014，70：701-711.

［4］Shen B，Delaney MK，Du X.Inside-out，outside-in，and inside-outside-in：G protein signaling in integrin-mediated cell adhesion，spreading，and retraction.CurrOpin CellBiol，2012，24：600-606.

［5］KennyFN，ConnellyJT.Integrin-mediated adhesion and mechano-sensing in cutaneous wound healing.Cell Tissue Res，2015，360：571-582.

［6］Shai SY，Harpf AE，Babbitt CJ，et al.Cardiac myocyte-specific excision of the beta1 integrin gene results in myocardial fibrosis and cardiac failure.Circ Res，2002，90：458-464.

［7］張懿瑋，李元建.阿霉素誘導心肌細胞死亡機制.國際病理科學與臨床雜志，2011，31：129-134.

［8］何玲，孫桂波，孫瀟，等.木犀草苷對阿霉素誘導乳鼠心肌細胞損傷的保護作用.中國藥理學通報，2012，28：1229-1234.

［9］曲震理.丹參酮ⅡA對阿霉素所致體外心肌細胞氧化損傷的保護作用.現(xiàn)代預防醫(yī)學，2013，40：2520-2523.

［10］Kwatra M，Kumar V，Jangra A，et al.Ameliorative effect of naringin against doxorubicin-induced acute cardiac toxicity in rats.Pharm Biol，2016，54：637-647.

［11］Gallardo Bolanos JM，Balao Da Silva CM，Martin Munoz P，et al.Phosphorylated AKT preserves stallion sperm viability and motility by inhibiting caspases 3 and 7.Reproduction，2014，148：221-235.

［12］葉強，陳良海，劉應(yīng)才，等.辛伐他汀通過Akt/GSK3β通路抑制心肌梗死后心肌細胞凋亡.中國藥理學通報，2011，27：1656-1660.

［13］Yoshida Y，Togi K，Matsumae H，et al.CCN1 protects cardiac myocytes from oxidative stress via beta1 integrin-Akt pathway.Biochem Biophys Res Commun，2007，355：611-618.

［14］Wu QL，Shen T，Shao LL，et al.Ischemic postconditioning mediates cardioprotection via PI3K/GSK-3beta/beta-catenin signaling pathway in ischemic rat myocardium.Shock，2012，38：165-169.

［15］Marunouchi T，Tanonaka K.Cell Death in the Cardiac Myocyte.Biol Pharm Bull，2015，38：1094-1097.

全球健康促進大會首次在中國舉行

第九屆全球健康促進大會于2016年11月21～24日在中國上海舉行。全球健康促進大會是健康促進領(lǐng)域最高級別的會議。本屆大會由國家衛(wèi)生計生委和世界衛(wèi)生組織共同主辦，上海市人民政府承辦。來自世界衛(wèi)生組織各成員國負責健康促進工作的代表，聯(lián)合國有關(guān)機構(gòu)負責人，部分國家衛(wèi)生和相關(guān)部門部長、健康城市市長，國際健康促進和可持續(xù)發(fā)展等領(lǐng)域?qū)＜覍W者將參會這一盛會。大會的主題為“可持續(xù)發(fā)展中的健康促進”。大會會期3天半，與會代表圍繞“健康城市”“跨部門行動”“社會動員”“健康素養(yǎng)”等主題進行研討，旨在運用健康促進的理論與實踐實現(xiàn)聯(lián)合國2030可持續(xù)發(fā)展目標，為健康促進在21世紀的發(fā)展注入新的活力。本屆大會發(fā)表了《上海宣言》，指導下一階段全球健康促進工作，推動健康促進的理論和實踐，提升健康在聯(lián)合國2030可持續(xù)發(fā)展目標中的地位和作用。會議期間舉辦了“健康城市市長論壇”，呼吁市長在建設(shè)健康城市、實現(xiàn)可持續(xù)發(fā)展目標中發(fā)揮關(guān)鍵作用。

今年是“十三五”規(guī)劃開局之年，也是推進“健康中國”建設(shè)的起航之年，又恰逢首屆全球健康促進大會召開30周年。在這樣一個關(guān)鍵時刻，由中國舉辦第九屆全球健康促進大會，既是開啟全球健康促進新征程、全面實施聯(lián)合國2030年可持續(xù)發(fā)展目標的重要起點，也是我們向世界展示中國成就、分享中國經(jīng)驗，加快推進健康中國建設(shè)的重要契機。大會第三天是“中國國家日”，通過論壇、展覽展示、現(xiàn)場考察形式向全世界展示了中國衛(wèi)生與健康事業(yè)發(fā)展成就。

β1-integrin promotes Akt/GSK-3β/β-catenin signaling activation and diminishes cardiac myocytes injury induced by doxorubicin

LI Xin＊，LIU Hai-tao，TAO Ling.＊Department of Cardiovascular Medicine，Xijing Hospital，the Fourth Military Medical University，Xi′an 710032，China

TAO Ling，E-mail：shidasda@163.com

Objective To explore the effect of β1-integrin overexpression on cardiac myocytes injury induced by doxorubicin.Methods Cardiac myocytes were prepared from newborn SD rats and randomly allocated into control，blank，overexpression，doxorubicin treatment，blank+doxorubicin treatment，overexpression+doxorubicin treatment，and LY294002 pretreatment group.Cell survival was determined by MTT assay.LDH release，MDA content，GPx activity，and SOD activity were measured using commercial available kits.qRT-PCR and Western blot were used to analyze the expression of β1-integrin，phosphorylated Akt，GSK-3β，β -catenin，Bcl2，and Bax.Apoptosis of cardiac myocytes was evaluated by flow cytometry.Results Transfection efficacy were（68.8±9.5）%and （71.2±8.9）%for blank group and overexpression group，respectively.Compared with the control，cell survival was markedly decreased in doxorubicin treatment group（P＜0.05），while β1-integrin overexpression enhanced cell survival（P＜0.05）.Furthermore，doxorubicin promoted LDH release and MDA production as well as reduced GPx and SOD activity（P＜0.05），while β1-integrin overexpression reversed the effects of doxorubicin treatment（P＜0.05）.Doxorubicin restrained Akt phosphorylation and nuclear translocation of β-catenin in cardiac myocytes，while β1-integrin overexpression enhanced Akt phosphorylation and nuclear translocation of β-catenin.Doxorubicin prompted apoptosis，downregulated Bcl2 expression，and upregulated Bax expression，which were suppressed by β1-integrin overexpression.However，blockade of Akt phosphorylation impeded the ef－fect of β1-integrin overexpression.Conclusion β1-integrin overexpression could counteract cytotoxicity induced by doxorubicin，which might be attributed to activation of Akt/GSK-3β/β-catenin signaling.

β1-integrin；Doxorubicin；Cardiac myocytes；Phosphorylated Akt；β-catenin

710032 陜西省西安市，第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院心血管內(nèi)科（李新、劉海濤、陶凌）；銅川市人民醫(yī)院超聲科（李新）

陶凌，E-mail：shidasda@163.com

10.3969/j.issn.1672－5301.2016.12.026

Q95-33；R542.2

A

1672-5301（2016）12-1148-05

2016-04-28）