鄧冬梅，王遠(yuǎn)杰，馮俊程，劉友迎（遂寧市中心醫(yī)院，四川629000）

低離子強(qiáng)度鹽溶液在微柱凝集法交叉配血實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用及影響

鄧冬梅，王遠(yuǎn)杰，馮俊程，劉友迎（遂寧市中心醫(yī)院，四川629000）

目的探討低離子強(qiáng)度鹽溶液微柱凝集法交叉配血實(shí)驗(yàn)的應(yīng)用及影響因素。方法利用生理鹽水、低離子溶液分別對(duì)2 189例受血者和2 189例供血者進(jìn)行凝集配血試驗(yàn)。用低離子強(qiáng)度鹽溶液配制紅細(xì)胞進(jìn)行交叉配血陽(yáng)性54例（2.5%），陰性2 135例（97.5%）；用生理鹽水陽(yáng)性32例（1.1%），陰性2 167例（98.9%），對(duì)每組結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。結(jié)果2種介質(zhì)在紅細(xì)胞懸液交叉配血的結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論低離子強(qiáng)度鹽溶液用于微柱凝集法交叉配血實(shí)驗(yàn)的敏感性增高，特異性增強(qiáng)，結(jié)果穩(wěn)定，適于臨床輸血前交叉配血實(shí)驗(yàn)的血清學(xué)檢測(cè)。

離子；溶液；凝集反應(yīng)；血型鑒定和交叉配血；血型抗原/免疫學(xué)

血清學(xué)交叉配血是輸血治療前重要的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目，以保證臨床用血的安全性和有效性。微柱凝集試驗(yàn)技術(shù)是一種免疫學(xué)檢測(cè)新方法。近年來(lái)，微柱凝集技術(shù)在國(guó)外已普遍使用，國(guó)內(nèi)部分地區(qū)也逐漸開(kāi)始應(yīng)用。由于交叉配血試驗(yàn)大多手工操作，影響因素較多。在日常工作中，紅細(xì)胞懸液是用生理鹽水還是低離子強(qiáng)度鹽溶液配制似乎并未引起足夠重視，其對(duì)微柱凝集法試驗(yàn)結(jié)果的影響，未太多報(bào)道。作者收集2 189例患者和供血者的血液標(biāo)本通過(guò)低離子強(qiáng)度鹽溶液和生理鹽水配制紅細(xì)胞懸液進(jìn)行微柱凝集法交叉配血，探討2種方法微柱凝集法交叉配血的影響。

1　資料與方法

1.1資料

1.1.1檢測(cè)對(duì)象選取2014年6月至2014年12月本院住院與門診申請(qǐng)輸血和手術(shù)備血患者（2 189例）。受血者血樣是輸血前3 d內(nèi)。

1.1.2檢測(cè)試劑微柱凝集卡（IgG、C3d檢測(cè)卡，血型鑒定卡）為美國(guó)強(qiáng)生公司產(chǎn)品；低離子強(qiáng)度鹽溶液為江陰力博醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品；生理鹽水為科倫藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品。

1.1.3主要儀器血型工作站為美國(guó)強(qiáng)生公司產(chǎn)品。

1.2方法取患者與供血者紅細(xì)胞，分別用低離子強(qiáng)度鹽溶液與生理鹽水配成3%～5%的紅細(xì)胞懸液。主側(cè)管加受血者的血清40 μL和供血者3%～5%的紅細(xì)胞懸液40 μL。次側(cè)管中加供血者的血清40 μL和受血者3%～5%的紅細(xì)胞懸液40 μL置37℃孵育10 min，用專用離心機(jī)離心5 min，觀察結(jié)果。EDTA-K2抗凝血2.0～3.0mL，3 000 r/min離心5 min，分離血漿。取供血者（2 189例）紅細(xì)胞成分血袋辮子制作血樣，用干凈竹簽去除血凝塊，3 000 r/min離心5 min，分離血漿。分別記錄2種方法的交叉配血結(jié)果。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料以率或百分比表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)　果

2.1兩種介質(zhì)紅細(xì)胞懸液交叉配血結(jié)果陽(yáng)性率比較2 189份標(biāo)本用低離子強(qiáng)度鹽溶液配制紅細(xì)胞懸液，微柱凝集法交叉配血，檢測(cè)出現(xiàn)54例陽(yáng)性反應(yīng)，生理鹽水配制紅細(xì)胞檢測(cè)出現(xiàn)32例陽(yáng)性反應(yīng)，2種介質(zhì)紅細(xì)胞懸液交叉配血結(jié)果統(tǒng)陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

2.2兩種介質(zhì)紅細(xì)胞懸液交叉配血反應(yīng)強(qiáng)度比較在微柱凝膠卡的反應(yīng)凝集強(qiáng)度用生理鹽水配制紅細(xì)胞懸液和低離子強(qiáng)度鹽溶液配制的紅細(xì)胞懸液相比敏感性明顯較低，尤其在（+++）～（++++）的凝集反應(yīng)強(qiáng)度下，低離子強(qiáng)度鹽溶液法占74%，同比鹽水法25%檢測(cè)敏感性升高49%，提高了反應(yīng)強(qiáng)度，增加了檢測(cè)的準(zhǔn)確性。2種介質(zhì)紅細(xì)胞懸液交叉配血反應(yīng)強(qiáng)度比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表1　兩種介質(zhì)紅細(xì)胞懸液交叉配血結(jié)果比較（n）

表2　兩種介質(zhì)紅細(xì)胞懸液交叉配血反應(yīng)強(qiáng)度比較［n（%）］

3　討　論

低離子強(qiáng)度鹽溶液主要是由葡萄糖，氯化鈉，抗凝劑，抗菌藥物及防腐劑等組成。由于低離子強(qiáng)度鹽溶液有降低介子的離子強(qiáng)度，減少紅細(xì)胞周圍的電子云，提供試驗(yàn)所需最佳反應(yīng)的離子強(qiáng)度，增加抗原抗體之間的引力，使抗原抗體反應(yīng)加強(qiáng)，更加容易出現(xiàn)凝集。陽(yáng)性率增加1.4%，提高了檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。兩種實(shí)驗(yàn)結(jié)果都是次側(cè)配血不和居多，其中低離子強(qiáng)度鹽溶液檢測(cè)法51例，生理鹽水檢測(cè)法30例。原因是患者紅細(xì)胞被自身抗體致敏，直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性［1］，是次側(cè)不和的主要原因［2］。主要見(jiàn)于自身免疫性溶血性貧血、淋巴細(xì)胞性白血病、多發(fā)性骨髓瘤（MM）、骨髓異常增生綜合征（MDS）、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿（PNH）患者。主側(cè)陽(yáng)性不合者為血型不規(guī)則抗體［3］引起的凝集。

檢測(cè)結(jié)果顯示，配制紅細(xì)胞懸液時(shí)用低離子強(qiáng)度鹽溶液作介質(zhì)，其敏感性明顯高于用生理鹽水作介質(zhì)。我們認(rèn)為低離子強(qiáng)度鹽溶液用于微柱凝集交叉配血有很多優(yōu)點(diǎn)：（1）低離子強(qiáng)度溶液配制紅細(xì)胞懸液，可增強(qiáng)抗原抗體的結(jié)合，縮短孵育時(shí)間，提高輸血相關(guān)實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)效率［4］。（2）提高不規(guī)則抗體檢出率，尤其是弱抗體或低濃度抗體的檢出率，提升患者輸血安全性；（3）提高微柱凝集法加叉配血實(shí)驗(yàn)［5］敏感性，且結(jié)果穩(wěn)定；（4）在嬰兒的ABO血型鑒定［6］，新生兒溶血?。?］，ABO反定檢測(cè)［8］等方面應(yīng)用也有較好效果。但某些少見(jiàn)的抗體如抗-k（k1）并非適合在低離子強(qiáng)度溶液反應(yīng)體系下測(cè)定，這或許是因?yàn)镵ell系統(tǒng)的抗體與某些自身免疫性溶血性貧血（AIHA）有關(guān)，而微柱凝集實(shí)驗(yàn)技術(shù)不適合于直接抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性的紅細(xì)胞樣本［9］。值得注意的是，低離子強(qiáng)度鹽溶液并不適合使用于作紅細(xì)胞儲(chǔ)存溶液，紅細(xì)胞在低離子強(qiáng)度鹽溶液儲(chǔ)存超過(guò)12 h后，會(huì)耗損部分抗原。低離子強(qiáng)度溶液也并不適用于配制的ABO反定型紅細(xì)胞［10］，也會(huì)耗損部分抗原。在配制紅細(xì)胞懸液時(shí)尚需注意低離子強(qiáng)度鹽溶液和血液的體積及比例，以便獲得最佳離子強(qiáng)度，改變體積和比例可能會(huì)影響間接抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)的敏感性和（或）特異性。適當(dāng)?shù)姆椒ū４娴碗x子強(qiáng)度鹽溶液，也是確保交叉配血試驗(yàn)結(jié)果可靠的重要手段［11］。

總之，在實(shí)際在臨床的輸血過(guò)程中，影響因素很多且無(wú)法避免。首先應(yīng)嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)步驟和結(jié)果判定說(shuō)明的步驟和方法進(jìn)行，以確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。同時(shí)應(yīng)運(yùn)用為微柱凝集法，凝聚胺法和生理鹽水法多種方法聯(lián)合配血，有助于最大限度減少輸血反應(yīng)的發(fā)生，保證臨床輸血安全。

［1］鄧安彥，周守容，吳眷磊，等.低離子強(qiáng)度溶液在抗人球蛋白試驗(yàn)中的應(yīng)用［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2013，23（10）：3203-3205.

［2］王謙，趙明旭.微柱凝膠試驗(yàn)交叉配血不合原因分析及處理［J］.山東醫(yī)藥，2007，46（36）：69-70.

［3］葉長(zhǎng)欽，張宏，陳楚填，等.不規(guī)則抗體篩查及鑒定在臨床的應(yīng)用［J］.中外醫(yī)療，2013，32（5）：17-18.

［4］周守容，鄧安彥，吳春磊，等.低離子強(qiáng)度溶液在輸血相關(guān)檢驗(yàn)中的應(yīng)用研究［J］.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，34（22）：3063-3064.

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［9］胡麗華.臨床輸血檢驗(yàn)［M］.2版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：41.

［10］萬(wàn)芳，黎卓華.3種常用溶液配制ABO反定型紅細(xì)胞的探討［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2011，8（20）：2472-2474.

［11］周鵬，朱倩雯.低離子溶液不同保存方法在微柱凝膠配血試驗(yàn)的影響［J］.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2014，35（7）：912-914.

10.3969/j.issn.1009-5519.2016.03.039

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（2015-09-10）