于　波（齊魯醫(yī)院桓臺分院/桓臺縣人民醫(yī)院腫瘤科，山東淄博256400）

VEGF、EGFR在非小細胞肺癌中的表達及其對GP方案化療療效影響

于波
（齊魯醫(yī)院桓臺分院/桓臺縣人民醫(yī)院腫瘤科，山東淄博256400）

目的觀察吉西他濱、順鉑聯(lián)用（GP方案）在血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、表皮生長因子受體（EGFR）表達不同的非小細胞肺癌（NSCLC）患者中療效差異，為臨床上晚期肺癌的化療藥物篩選及預后判斷提供依據(jù)。方法選取該院2010年4月至2014年4月收治74例NSCLC患者接受GP方案［吉西他濱（1 000 mg/m2）、順鉑（75 mg/m2）］治療，21 d為1個周期，每2周期評價療效。免疫組織化學檢測NSCLC患者腫瘤組織中VEGF、EGFR的表達。結(jié)果GP方案化療對NSCLC患者總體有效率為32.4%（24/74）。VEGF陰性與陽性患者化療有效率比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；EGFR陽性患者化療有效率（18.0%）顯著低于EGFR陰性患者（62.5%），差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。logistic回歸顯示，EGFR是化療療效顯著的影響因素（OR=0.249，P＜0.01）。結(jié)論EGFR的表達情況對NSCLC患者GP方案化療療效有一定的預測價值。

血管內(nèi)皮生長因子類；受體，表皮生長因子；癌，非小細胞肺；抗腫瘤聯(lián)合化療方案；免疫組織化學

肺癌是最常見的惡性腫瘤，其中，非小細胞肺癌（NSCLC）占肺癌的75%～80%。大多數(shù)肺癌患者確診時已處于中晚期階段，全身化療是主要治療方法。以吉西他濱（gemcitabine）等為代表的第三代化療藥物聯(lián)合鉑類藥物化療方案（GP方案）已成為晚期NSCLC標準一線治療方法。GP方案在晚期NSCLC患者中的運用使其1年生存率達35%，2年生存率也接近15%～20%。但仍有較高比例的患者對GP方案敏感性低，這提示該方案僅適用于一部分NSCLC患者，分期臨床治療應遵循“循證醫(yī)學”原則，即根據(jù)患者的個體差異選擇用藥。相應腫瘤標志物的檢測對臨床醫(yī)生進行肺癌個體化防治具有重要的參考價值。

肺癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預后與其血管生成有著密切的關(guān)系。血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）是誘導血管生成的關(guān)鍵因子，其可改變內(nèi)皮細胞基因的活化形成，誘導內(nèi)皮細胞產(chǎn)生蛋白水解酶、間質(zhì)膠原酶和組織因子，從而誘導血管的形成［1］。

表皮生長因子受體（EGFR）是一種具有酪氨酸蛋白激酶活性的細胞表面受體，是原癌基因C-erbB-1的表達產(chǎn)物，具有酪氨酸激酶活性，當與其配體表皮生長因子（EGF）、轉(zhuǎn)化生長因子-α（TGF-α）結(jié)合，通過激活酪氨酸蛋白激酶途徑，促進細胞生長，DNA合成，以及癌基因表達。EGFR的過度表達與腫瘤發(fā)生、發(fā)展及預后關(guān)系密切［2］。

為了解VEGF、EGFR在NSCLC患者中的表達情況及其對GP化療方案敏感性的影響，本研究采用免疫組織化學（免疫組化）法檢測了VEGF、EGFR在NSCLC組織中的表達，探討其在NSCLC中的作用及與預后的關(guān)系。

1　資料與方法

1.1一般資料選擇該院2010年4月至2014年4月收治的晚期NSCLC患者74例，均為初治患者，經(jīng)纖維支氣管鏡活檢、肺部腫物穿刺活檢、頸部淋巴結(jié)切除活檢或其他轉(zhuǎn)移部位穿刺/切除活檢，有明確病理診斷，X射線、CT等檢查可測量轉(zhuǎn)移灶。所有患者均為不能接受手術(shù)的Ⅲb期或Ⅳ期病理。74例患者中男44例，女30例；年齡35～76歲，中位年齡56歲；肺鱗癌38例，肺腺癌36例。以上患者均無化療禁忌指征。所有患者Karnofsky評分大于60分，血常規(guī)，肝、腎功能，心電圖正常。

1.2方法

1.2.1治療方法所有NSCLC患者均為初治患者，未接受過腫瘤相關(guān)治療。患者經(jīng)病理學明確診斷后采用吉西他濱加順鉑化療：吉西他濱1 000 mg/m2，加入100mL 0.9%氯化鈉溶液靜脈滴注30 min，第1、8天應用；順鉑75 mg/m2，加入0.9%氯化鈉溶液500 mL中避光靜脈滴注，總劑量分3 d應用。同時每天給予2 000 mL補液以水化減少腎臟毒性，并應用格拉司瓊、甲氧氯普胺（胃復安）預防嘔吐。化療期間常規(guī)復查血常規(guī)，心電圖，肝、腎功能，出現(xiàn)異常給予相應處理?；煼桨笧椋?周重復1次，每2個周期后全面復查評價療效，治療2～4個周期。

1.2.2療效判定標準化療中每2周期進行胸部CT、腦MRI、同位素骨掃描、腹部超聲等檢查，對可測量病灶進行記錄，考評療效并記錄每周期的毒性反應。參照實體瘤RECIST療效評定標準進行評估，分為完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、穩(wěn)定（SD）、進展（PD）。有效率（RR）=（CR例數(shù)+PR例數(shù)）/總例數(shù)×100%；疾病控制率（DCR）=（CR例數(shù)+PR例數(shù)+SD例數(shù)）/總例數(shù)×100%；表達一致率=（同時陽性例數(shù)+同時陰性例數(shù)）/總例數(shù)× 100%。在患者接受治療后同時進行正規(guī)隨訪。

1.2.3VEGF及EGFR免疫組化測定鼠抗人VEGF單克隆抗體（MAB3045）購自美國R&D公司，鼠抗人EGFR單克隆抗體（ab30）購自美國Abcam公司。免疫組化采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)法（SP法）。結(jié)果由病理科醫(yī)生在未知患者臨床資料的情況下，觀察每張切片。VEGF結(jié)果以細胞質(zhì)或細胞膜染色呈棕黃色者為陽性，將VEGF表達分為（-）～（+++）共4級。EGFR免疫組化染色陽性結(jié)果分為4個等級：（-）為無顯色；（+）為小于15%癌細胞陽性；（++）為15%～50%癌細胞陽性；（+++）為大于50%癌細胞陽性。實驗中分別設(shè)陰性和陽性對照。

1.3統(tǒng)計學處理應用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析。率的比較應用四格表χ2檢驗。應用logistic回歸分析患者生存相關(guān)因素，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)　果

2.1肺鱗狀細胞癌組與肺腺癌組臨床療效比較所選74例NSCLC患者均完成2個以上周期化療，鱗狀細胞癌組38例患者RR為34.2%，腺癌組36例患者RR為30.6%，總體有效率為32.4%。鱗狀細胞癌組、腺癌組DCR分別為76.3%和77.8%，總體疾病控制率為77.0%。鱗狀細胞癌組和腺癌組對GP方案化療RR比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表1。

表1　肺鱗狀細胞癌組與肺腺癌組臨床療效比較［n（%）］

2.2VEGF、EGFR在肺鱗狀細胞癌和肺腺癌中的表達

細胞染色陽性信號呈棕黃或棕褐色，VEGF及EGFR定位于癌細胞膜或細胞質(zhì)，細胞核無著色。在38例鱗狀細胞癌標本中，20例VEGF表達陽性（52.6%），31例EGFR表達陽性（81.6%）；36例腺癌標本中，11例VEGF表達陽性（30.6%），19例EGFR表達陽性（52.8%）。鱗狀細胞癌組VEGF、EGFR表達陽性率均顯著高于腺癌組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2　VEGF、EGFR在肺鱗狀細胞癌和肺腺癌中的表達（n）

2.3VEGF、EGFR表達與GP方案化療療效關(guān)系的單因素分析43例VEGF陰性患者中，14例對GP方案化療有效（32.6%），31例VEGF陽性患者中，化療有效者10例（32.3%），VEGF陽性患者化療RR與陰性者比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。EGFR陰性表達患者24例，化療有效者15例，RR為62.5%；陽性表達者50例，有效者9例，RR為18.0%，EGFR陰性患者GP方案化療RR顯著高于EGFR陽性患者，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

2.4NSCLC中VEGF、EGFR表達的相關(guān)性NSCLC組織中VEGF、EGFR表達同時陽性者為20例，同時陰性者為13例，表達一致率為44.6%，見表3。

表3　NSCLC中VEGF、EGFR表達的相關(guān)性（n）

2.5VEGF、EGFR對GP方案化療療效預測價值分析將VEGF、EGFR 2種因素作為自變量，化療療效作為應變量，量化后進行l(wèi)ogistic回歸分析，見表4。結(jié)果顯示，VEGF對GP方案化療療效無顯著影響，而EGFR可顯著影響化療結(jié)果（OR=0.249，P＜0.01）。見表5。

表4　logistic回歸個因素量化表

表5　logistic回歸分析結(jié)果

3　討　論

肺癌是全世界最常見的惡性腫瘤，其中NSCLC占肺癌總數(shù)的75%～80%，由于發(fā)現(xiàn)時多數(shù)病例屬于晚期，故全身化療為主的綜合治療占有重要地位。吉西他濱是細胞周期特異性抗代謝類藥物，主要作用于DNA合成期的腫瘤細胞。目前，以順鉑或卡鉑為基礎(chǔ)聯(lián)用吉西他濱的二聯(lián)用藥已成為治療晚期NSCLC的標準一線方案。有研究報道，GP方案化療可使NSCLC的RR達到22%～25%，DCR達30%～45%，中位生存期7～9個月［3］。但仍有大部分患者對GP方案表現(xiàn)出耐藥性。目前NSCLC患者中EGFR基因突變的NSCLC應用分子靶向藥物也是常用的治療方案，但由于該類藥物價格較高，基層醫(yī)院很難廣泛應用，故尋找預測患者對GP方案療效敏感性指標對制訂個體化治療、判斷預后有積極意義。

VEGF是一個相對分子質(zhì)量為46×103的高度糖基化的堿性蛋白，由2個相對分子質(zhì)量各為23×103的不同亞基以二硫鍵連接所組成的二聚體。在肺癌發(fā)生、發(fā)展中起重要作用：可直接刺激肺血管內(nèi)皮細胞分化增殖和遷移，加快基底膜降解，提高血管通透性，為腫瘤基質(zhì)和毛細血管網(wǎng)形成提供基礎(chǔ)；促進內(nèi)皮細胞表達，誘導血管形成。近年來抑制VEGF，減少血管生成，切斷腫瘤血供已成為治療肺癌的研究熱點。本研究結(jié)果顯示，VEGF表達陽性率在肺鱗狀細胞癌組顯著高于肺腺癌組，但該差異并不能影響NSCLC患者對GP化療方案的敏感性。故VEGF并不能作為NSCLC患者對GP方案化療敏感性預測指標。

EGFR屬于Ⅰ型生長因子受體家族，具有受體酪氨酸激酶活性?？赏ㄟ^降低黏附分子E-cadherin的表達，增加基質(zhì)膜降解酶分泌，導致腫瘤細胞侵襲能力的增加。有研究表明，EGFR基因突變的患者對吉非替尼治療更敏感；另一些學者則從EGFR與化療療效關(guān)系方面進行研究以尋求治療策略上的有效性［4-5］。已有研究證實，在食管癌和卵巢癌中，EGFR過度表達的患者化療緩解率顯著降低［6-7］。目前，鮮見EGFR對NSCLC患者化療療效影響的報道。作者發(fā)現(xiàn)，在應用GP方案化療時，EGFR陽性的NSCLC患者RR顯著低于EGFR陰性患者。logistic回歸分析提示，EGFR可作為預測化療敏感性及預后的一種指標，為臨床治療方案提供參考。

本研究運用免疫組化法對74例NSCLC患者組織中VEGF、EGFR的表達進行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，NSCLC組織中VEGF與EGFR表達一致率為44.6%，這提示EGFR表達升高者，肺癌組織存在更強的誘導血管生成能力，但尚需進一步研究以證實二者發(fā)生關(guān)系的具體機制。

化療方案的選擇對包括NSCLC在內(nèi)的多種腫瘤的治愈率、生存率存在巨大影響。部分患者對某些化療方案不敏感，而化療結(jié)束后發(fā)現(xiàn)無效時已為時已晚。在化療前評估患者對化療的敏感性，有助于篩選出部分對化療敏感的患者進行針對性治療，對化療敏感性差的患者可采取其他對策，避免不必要的化療不良反應和延誤治療。本研究提示，EGFR可作為判斷NSCLC患者對GP方案化療敏感性和預后的一項指標，故EFGR檢測對臨床醫(yī)生進行肺癌個體化治療有一定的參考價值。

［1］李曉明.血管內(nèi)皮細胞生長因子及其受體與腫瘤血管形成［J］.國外醫(yī)學：腫瘤學分冊，1997，24（1）：11-13.

［2］Takahashi Y，Mai M.Antibody against vascular endothelial growth factor （VEGF）inhibits angiogenic switch and liver metastasis in orthotopic xenograft model with site-dependent expression of VEGF［J］.J Exp Clin Cancer Res，2005，24（2）：237-243.

［3］陳玲，趙新漢，李旭，等.晚期非小細胞肺癌不同治療方案療效的比較［J］.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學，2007，15（1）：38-40.

［4］Bell DW，Lynch TJ，Haserlat SM，et al.Epidermal growth factor receptor mutations and gene amplification in non-small-cell lung cancer：molecular analysis of the IDEAL/INTACT gefitinib trials［J］.J Clin Oncol，2005，23 （31）：8081-8092.

［5］Shih JY，Gow CH，Yu CJ，et al.Epidermal growth factor receptor mutations in needle biopsy/aspiration samples predict response to gefitinibtherapy and survival of patients with advanced nonsmall cell lung cance［J］.Int J Cancer，2006，118（4）：963-969.

［6］Fischer-Colbrie J，Witt A，Heinzl H，et al.EGFR and steroid receptors in ovarian carcinoma：comparison with prognostic parameters and outcome of patients［J］.Anticancer Res，1997，17（1B）：613-619.

［7］Hickey K，Grehan D，Reid IM，et al.Expression of epidermal growth factor receptorandproliferatingcellnuclearantigenpredictsresponseofesophageal squamous cell carcinoma to chemoradiotherapy［J］.Cancer，1994，74（6）：1693-1698.

10.3969/j.issn.1009-5519.2016.05.035

B

1009-5519（2016）05-0734-03

（2015-08-24

2015-12-01）