李　飛　李德新　周廣朋

(四川省人民醫(yī)院城東病區(qū) 肝膽胰外科，成都610101)

?

miR-634在肝癌中的表達(dá)及對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響

李飛李德新周廣朋①

(四川省人民醫(yī)院城東病區(qū) 肝膽胰外科，成都610101)

①四川省人民醫(yī)院城東病區(qū)內(nèi)分泌科，成都610101。

目的：檢測(cè)microRNA-634(miR-634)在肝癌中的表達(dá)水平及其對(duì)肝癌細(xì)胞常見(jiàn)生物學(xué)行為的調(diào)控作用。方法：采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)法檢測(cè)肝癌細(xì)胞系(HepG2、SMMC7721、Bel7402、Bel7404、SNU739)、69例肝癌組織及匹配癌旁組織中miR-634的相對(duì)定量，分析miR-634表達(dá)與肝癌患者性別、年齡、腫瘤直徑、分化程度、Child-Pugh分級(jí)、BCLC分期、門靜脈癌栓及肝外轉(zhuǎn)移的關(guān)系，同時(shí)構(gòu)建miR-634的真核表達(dá)載體并轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞系，采用活細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒CCK-8、流式細(xì)胞儀Annexin V/PI雙染法和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染miR-634對(duì)細(xì)胞增殖、凋亡和侵襲能力的影響。結(jié)果：與正常人肝細(xì)胞系L-02相比，肝癌細(xì)胞的miR-634水平均降低(P<0.05)，表達(dá)量依次為HepG2>SNU739>Bel7402>Bel7404>SMMC7721；69例肝癌組織的miR-634水平為(0.253±0.019)，低于匹配癌旁組織(P<0.05)，且與腫瘤直徑、分化程度、BCLC分期、門靜脈癌栓及肝外轉(zhuǎn)移均有關(guān)(P<0.05)。過(guò)表達(dá)組轉(zhuǎn)染24～96 h后的miR-634水平持續(xù)升高，與對(duì)照組和空轉(zhuǎn)染組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與對(duì)照組和空轉(zhuǎn)染組相比，轉(zhuǎn)染組的增殖抑制率、凋亡率均升高，但穿膜細(xì)胞數(shù)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：miR-634在肝癌組織和細(xì)胞中均為低表達(dá)，且與臨床病理參數(shù)有關(guān)，上調(diào)其水平可抑制肝癌細(xì)胞增殖及侵襲并誘導(dǎo)凋亡，對(duì)于肝癌防治有重要借鑒價(jià)值。

肝癌；miR-634；增殖；侵襲；凋亡

肝癌是一種常見(jiàn)的惡性腫瘤，發(fā)病率高且進(jìn)展迅速，大多患者確診時(shí)已屬晚期，復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移是肝癌治療失敗的主要原因[1,2]。盡管癌癥的主要危險(xiǎn)因素已闡明，但惡性腫瘤的發(fā)生機(jī)制目前仍不明確。微核糖核酸(miRNA)是一類進(jìn)化上高度保守的內(nèi)源性RNA，可通過(guò)抑制或降解靶基因mRNA，從而達(dá)到抑制靶基因的作用，近年來(lái)發(fā)現(xiàn)miRNA對(duì)于癌癥的發(fā)生發(fā)展意義重大[2-5]。目前已證實(shí)miR-634為新發(fā)現(xiàn)的腫瘤抑制因子，在誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡中發(fā)揮重要作用[6,7]，此外，miR-634具有化療增敏效果[8]。以上結(jié)果提示miR-634可作為惡性腫瘤防治的新靶點(diǎn)，但目前在肝癌中的功能尚不清楚。本研究擬在肝癌組織和細(xì)胞中觀察miR-634的表達(dá)并探討其與肝癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系，同時(shí)在肝癌細(xì)胞中進(jìn)一步驗(yàn)證其功能，探討miR-634在肝癌防治中的價(jià)值。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1細(xì)胞株、試劑及儀器人肝癌細(xì)胞系(HepG2、SMMC7721、Bel7402、Bel7404、SNU739)及正常人肝細(xì)胞系L-02細(xì)胞均購(gòu)自中科院上海生化細(xì)胞所細(xì)胞庫(kù)，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑LipofectamineTM2000、Trizol總RNA抽提試劑購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司，Brilliant? SYBR? Green QPCR Master Mix購(gòu)自美國(guó)Stratagene公司，M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶試劑盒購(gòu)自PROMEGA公司，過(guò)表達(dá)miR-634的真核表達(dá)載體pCDNA3.1(+)-miR-634由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司構(gòu)建。CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱購(gòu)自英國(guó)Forma Scientific公司，F(xiàn)ACS Calibur型流式細(xì)胞儀購(gòu)自美國(guó)BD公司，全自動(dòng)ABI 7300熒光定量PCR儀購(gòu)自美國(guó)Applied Biosystems公司。

1.1.2組織樣本收集本院病理科2013年5月至2015年3月存檔的石蠟包埋肝癌組織及匹配癌旁組織共69例，其中男性46例，女性23例；年齡范圍24～76歲，中位年齡為56.5歲，≤50歲者25例，>50歲者44例；腫瘤直徑：≤5 cm者28例，>5 cm者41例；分化程度：低、未分化36例，中、高分化33例；Child-Pugh分級(jí)：A級(jí)41例，B級(jí)28例；BCLC分期：B期30例，C期39例；37例有門靜脈癌栓；41例有肝外轉(zhuǎn)移。肝癌組織均由兩位病理學(xué)醫(yī)師共同診斷，且取樣前未行放化療。

1.2方法

1.2.1實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)采用研磨機(jī)在液氮條件下磨碎組織，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行總RNA提取，經(jīng)分光光度計(jì)檢測(cè)后將OD260/OD280≈1.80～2.00的RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，反應(yīng)條件為：16℃ 30 min，42℃ 30 min，85℃ 5 min，qPCR使用rilliant? SYBR?Green QPCR Master Mix在ABI 7300熒光定量PCR儀系統(tǒng)上完成。miR-634引物由Premier Primer 5.0 software設(shè)計(jì)(以U6 RNA為內(nèi)參)，miR-634上游引物：5′-CCUUCAAUUUGACCGUCCU -3′， 下游引物：5′-AAUAAAACCAGGUCGAAUAGGU-3′； U6 RNA上游引物：5′- CTCGC-TTCGGCAGCACA -3′ ，下游引物：5′- AACGCTTC-ACGAATTTGCGT -3′ 。反應(yīng)條件為： 95℃預(yù)變性10 min，95℃ 15 s，60℃ 1 min，共40個(gè)循環(huán)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。應(yīng)用2-△△Ct法測(cè)定miR-634基因的相對(duì)表達(dá)量，結(jié)果表示為：△△Ct=(CtmiR-634-CtU6)腫瘤組織-(CtmiR-634-CtU6)癌旁組織。采用qPCR檢測(cè)肝癌細(xì)胞相對(duì)于正常人肝細(xì)胞系L-02細(xì)胞的miR-634表達(dá)量，同時(shí)篩選miR-634水平最低的肝癌細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.2細(xì)胞分組及轉(zhuǎn)染根據(jù)RT-qPCR結(jié)果將miR-634表達(dá)量最低的肝癌細(xì)胞分為3組，分別為過(guò)表達(dá)組，轉(zhuǎn)染真核表達(dá)載體pCDNA3.1(+)-miR-634的肝癌細(xì)胞；空轉(zhuǎn)染組，轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒pCDNA3.1(+)的肝癌細(xì)胞；對(duì)照組，不行任何干預(yù)措施。分別于轉(zhuǎn)染24、48、72和96 h后采取RT-qPCR檢測(cè)miR-634水平以驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效果。

1.2.3CCK-8法將各組細(xì)胞接種于96孔板中，置于37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，分別于轉(zhuǎn)染24、48、72、96 h時(shí)每孔加入10 μl CCK-8溶液，于450 nm波長(zhǎng)下測(cè)定各孔吸光度(A)。根據(jù)公式計(jì)算：增殖抑制率(%)=(1-空轉(zhuǎn)染組或過(guò)表達(dá)組A值/對(duì)照組A值)×100%。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.4流式細(xì)胞儀PI/Annexin V雙染法按1×105個(gè)/ml的密度將3組細(xì)胞接種培養(yǎng)液中，分別于轉(zhuǎn)染48、96 h收集各組細(xì)胞，依次經(jīng)冷乙醇固定過(guò)夜、RNase A孵育后，加入10 μl Annexin V/FITC和0.3 μg PI染色，避光靜置15 min后，使用FACS Calibur流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡情況，計(jì)算細(xì)胞凋亡百分率。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.5Transwell侵襲實(shí)驗(yàn) 將包被有Matrigel的Transwell 小室置于24孔培養(yǎng)板中，于小室外按照1∶1比例混合的條件培養(yǎng)液(400 μl)，取100 μl胰酶消化各組細(xì)胞(密度為1×109細(xì)胞/L)，常規(guī)孵育24、48 h后，取膜采用棉簽擦掉基質(zhì)膠和未穿膜細(xì)胞，4%多聚甲醛固定后進(jìn)行結(jié)晶紫染色，100 倍光鏡下每個(gè)濾膜隨機(jī)挑取8個(gè)視野計(jì)數(shù)穿膜的細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

2　結(jié)果

2.1miR-634在肝癌細(xì)胞系及肝癌組織中的相對(duì)定量圖1A顯示，與正常人肝細(xì)胞系L-02相比，肝癌細(xì)胞的miR-634水平均降低(P<0.05)，且表達(dá)量依次為HepG2>SNU739>Bel7402>Bel7404>SMMC7721，鑒于SMMC7721的miR-634水平最低，故選此細(xì)胞株用于研究miR-634對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為的調(diào)控作用；圖1B顯示與癌旁組織相比，69例肝癌組織的miR-634水平降低至(0.253±0.019)，低于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2miR-634水平與肝癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系肝癌組織中，miR-634水平與性別、年齡及Child-Pugh分級(jí)均無(wú)關(guān)，但與腫瘤直徑、分化程度、BCLC分期、門靜脈癌栓及肝外轉(zhuǎn)移均有關(guān)(P<0.05)，其中腫瘤直徑>5 cm，分化程度為低、未分化，BCLC分期為C期，有門靜脈癌栓及有肝外轉(zhuǎn)移者的miR-634水平較低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

2.3過(guò)表達(dá)miR-634對(duì)SMMC7721細(xì)胞增殖的影響圖2A顯示，過(guò)表達(dá)組轉(zhuǎn)染24～96 h后的miR-634水平持續(xù)升高，與對(duì)照組和空轉(zhuǎn)染組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；圖2B顯示，過(guò)表達(dá)組轉(zhuǎn)染后的增殖能力受抑制，與其余兩組相比，轉(zhuǎn)染24～96 h后的增殖抑制率均升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.4過(guò)表達(dá)miR-634對(duì)SMMC7721細(xì)胞凋亡率的影響流式細(xì)胞儀Annexin V/PI雙染法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)miR-634會(huì)誘導(dǎo)SMMC7721細(xì)胞凋亡，轉(zhuǎn)染組轉(zhuǎn)染后的凋亡率均低于其余兩組，轉(zhuǎn)染24 h的凋亡率分別為對(duì)照組和空轉(zhuǎn)染組的2.64和2.42倍，轉(zhuǎn)染48 h的分別為對(duì)照組和空轉(zhuǎn)染組的3.54和2.78倍，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；對(duì)照組和空轉(zhuǎn)染組轉(zhuǎn)染24、48 h凋亡率的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)圖3、表2。

2.5過(guò)表達(dá)miR-634對(duì)SMMC7721細(xì)胞侵襲水平的影響 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)miR-634會(huì)抑制SMMC7721細(xì)胞侵襲，轉(zhuǎn)染組轉(zhuǎn)染后的穿膜細(xì)胞數(shù)均低于其余兩組，轉(zhuǎn)染24 h的穿膜細(xì)胞數(shù)分別為對(duì)照組和空轉(zhuǎn)染組的0.63和0.64倍，轉(zhuǎn)染48 h的分別為對(duì)照組和空轉(zhuǎn)染組的0.57和0.53倍，差異均有無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，對(duì)照組和空轉(zhuǎn)染組轉(zhuǎn)染24、48 h穿膜細(xì)胞數(shù)的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)圖3、表2。

圖1　miR-634在肝癌細(xì)胞系及肝癌組織中的相對(duì)定量Fig.1　miR-634 in hepatocellular carcinoma cell line and relative quantitative in liver cancer tissueNote: A.Liver cancer cell lines;1.L-02;2.HepG 2;3.SMMC7721;4.Bel 7402;5.Bel 7404;6.SNU739;B.Cancer of liver tissue.

表1　肝癌組織中miR-634水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系Tab.1　miR-634 levels in liver cancer tissue relationship with clinicopathological parameters

圖2　轉(zhuǎn)染對(duì)SMMC7721細(xì)胞miR-634水平及增殖抑制率的影響Fig.2　Transfection miR-634 levels on SMMC7721 cells and effect of proliferation inhibition rateNote: A.mrR-634 relative expression;B.Proliferation inhibition rate.

表2　兩組轉(zhuǎn)染后的凋亡率和穿膜細(xì)胞數(shù)比較Tab.2　Comparied with two groups after transfection of apoptosis rate and number of transmembrane cells

圖3　過(guò)表達(dá)miR-634對(duì)SMMC7721細(xì)胞凋亡和侵襲水平的影響Fig.3　Over expression of miR-634 of SMMC7721 cellNote: A.Cell opsptosis flow detection figure;B.Cells invade transwell detection figure.

3　討論

近年來(lái)，miRNA與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，已成為腫瘤防治熱點(diǎn)，多項(xiàng)研究提示其可調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、侵襲轉(zhuǎn)移等惡性行為，根據(jù)miRNA的作用效果分為癌基因或抑癌基因兩大類[9,10]。臨床研究發(fā)現(xiàn)與正常組織相比，肝癌組織及外周血中的miRNA表達(dá)譜變化較大[5]，如Wen等[11]發(fā)現(xiàn)在與健康體檢者相比，肝癌患者血漿中的miR-20a-5p、miR-25-3p、miR-30a-5p、miR-92a-3p、 miR-132-3p、miR-185-5p、miR-320a 和miR-324-3p為高表達(dá)，其建議可用異常表達(dá)的miRNA來(lái)輔助肝癌的診斷。此外，Sato等[12]發(fā)現(xiàn)異常表達(dá)的miRNA譜可用于預(yù)測(cè)肝癌術(shù)后切除的復(fù)發(fā)情況。以上結(jié)果表明從肝癌中異常表達(dá)的miRNA入手可能有助于闡明肝癌的發(fā)病機(jī)制，但目前miRNA異常表達(dá)對(duì)腫瘤惡性行為的影響仍處于初步階段。

miR-634為新發(fā)現(xiàn)的腫瘤抑制因子，已證實(shí)在多種惡性腫瘤患者的組織和血漿中低表達(dá)，如張永海等[13]發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比，膀胱癌患者血漿miR-634水平下調(diào)，與正常水平相比降低了約61%。Peng等[8]發(fā)現(xiàn)miR-634參與了鼻咽癌細(xì)胞的紫杉醇耐藥，如鼻咽癌紫杉醇耐藥株CNE-1/Taxol中的miR-634水平高于親本CNE-1細(xì)胞。本研究發(fā)現(xiàn)肝癌細(xì)胞中的miR-634水平低于正常人肝細(xì)胞系L-02，且肝癌組織中的miR-634水平亦低于匹配的癌旁組織，以上結(jié)果表明miR-634低表達(dá)可能參與了肝癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。為探討miR-634在肝癌防治中的價(jià)值，本研究進(jìn)一步探討miR-634表達(dá)與肝癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系，結(jié)果顯示miR-634水平與腫瘤直徑、分化程度、BCLC分期、門靜脈癌栓及肝外轉(zhuǎn)移均有關(guān)，且惡性程度越高則miR-634水平越低，表明miR-634水平可能參與了肝癌惡變、生長(zhǎng)及侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程，在肝癌調(diào)控中亦發(fā)揮抑癌基因的作用。

多項(xiàng)研究表明miR-634參與了腫瘤細(xì)胞的惡性表型轉(zhuǎn)化，如Cong等[7]同樣發(fā)現(xiàn)miR-634可抑制宮頸癌細(xì)胞的增殖并誘導(dǎo)其凋亡，其推測(cè)可能與miR-634靶向抑制mTOR信號(hào)通路有關(guān)，Peng等[8]發(fā)現(xiàn)該miRNA可抑制鼻咽癌細(xì)胞的增殖。鑒于本研究檢測(cè)的5株肝癌細(xì)胞株中，SMMC7721的miR-634水平最低，故選取SMMC7721細(xì)胞用于驗(yàn)證miR-634對(duì)肝癌增殖、凋亡及侵襲的影響。本研究在轉(zhuǎn)染后觀察miR-634水平變化發(fā)現(xiàn)，在24～96 h時(shí)間窗內(nèi)轉(zhuǎn)染組的miR-634水平逐漸升高，提示質(zhì)粒構(gòu)建成功，可用于后續(xù)觀察。過(guò)表達(dá)miR-634可明顯抑制肝癌細(xì)胞的增殖和侵襲，同時(shí)可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，確定了miR-634在肝癌調(diào)控中發(fā)揮抑癌基因的作用，推測(cè)可能與miR-634可激活線粒體凋亡途徑來(lái)促進(jìn)凋亡有關(guān)。此外， Fujiwara等[6]在鼻咽癌細(xì)胞株中發(fā)現(xiàn)miR-634表達(dá)可提高提高化療誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性，對(duì)于化療增敏有一定價(jià)值，下一步本研究將驗(yàn)證miR-634對(duì)肝癌細(xì)胞化療是都有增敏效果。以上結(jié)果表明miR-634在惡性腫瘤中發(fā)揮較廣的抑制作用，為惡性腫瘤的基因治療提供了有力依據(jù)。

綜上所述，肝癌細(xì)胞和肝癌組織中miR-634的表達(dá)水平均降低，且肝癌組織中miR-634水平與臨床病理參數(shù)有關(guān)，采用基因手段上調(diào)miR-634水平可抑制肝癌細(xì)胞增殖及侵襲并誘導(dǎo)凋亡，在肝癌防治中有較大潛能，對(duì)于肝癌防治有重要借鑒價(jià)值，但需在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步驗(yàn)證。

[1]Jemal A,Bray F,Center MM,etal.Global cancer statistics [J].CA Cancer J Clin,2011,61(2):69-90.

[2]范鳴,滕云飛,虞麗平,等.新型肝癌標(biāo)志CA125及其靶向毒素在肝癌生物治療中的作用研究[J].中國(guó)免疫學(xué)雜志,2014,30(3):342-346.

[3]江小梅,彭杰文.肝癌組織中miR-200和Notch1蛋白表達(dá)的相關(guān)性[J].中國(guó)老年學(xué)雜志,2015,35(14):3831-3833.

[4]Wang D,Fan Z,Liu F,etal.Hsa-miR-21 and Hsa-miR-29 in tissue as potential diagnostic and prognostic biomarkers for gastric cancer [J].Cell Physiol Biochem,2015,37(4):1454-1462.

[5]Miyazaki T,Ikeda K,Sato W,etal.MicroRNA library-based functional screening identified androgen-sensitive miR-216a as a player in bicalutamide resistance in prostate cancer [J].J Clin Med,2015,4(10):1853-1865.

[6]Fujiwara N,Inoue J,Kawano T,etal.miR-634 activates the mitochondrial apoptosis pathway and enhances chemotherapy-induced cytotoxicity [J].Cancer Res，2015,75(18):3890-3901.

[7]Cong J,Liu R,Wang X,etal.MiR-634 decreases cell proliferation and induces apoptosis by targeting mTOR signaling pathway in cervical cancer cells [J].Artif Cells Nanomed Biotechnol,2015,14:1-8.

[8]Peng X,Cao P,He D,etal.MiR-634 sensitizes nasopharyngeal carcinoma cells to paclitaxel and inhibits cell growth both in vitro and in vivo [J].Int J Clin Exp Pathol,2014,7(10):6784-6791.

[9]Stling P,Leivonen SK,Aakula A,etal.Systematic analysis of microRNAs targeting the androgen receptor in prostate cancer cells [J].Cancer Res,2011,71(5):1956-1967.

[10]肖作漢，孟岡，王立志，等.腹腔積液細(xì)胞DNA倍體及miRNA-21聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肝細(xì)胞癌診斷的臨床價(jià)值[J].臨床肝膽病雜志，2015，31(1)：93-98.

[11]Wen Y,Han J,Chen J,etal.Plasma miRNAs as early biomarkers for detecting hepatocellular carcinoma [J].Int J Cancer,2015,137(7):1679-1690.

[12]Sato F,Hatano E,Kitamura K,etal.MicroRNA profile predicts recurrence after resection in patients with hepatocellular carcinomawithin the Milan Criteria [J].PLoS One,2011,6(1):e16435.

[13]張永海,陳凌武,徐慶春,等.膀胱癌組織及血漿中微小RNA的差異表達(dá)情況分析[J].中華泌尿外科雜志,2014,35(3):222-225.

[收稿2015-11-05修回2015-11-17]

(編輯許四平)

Expression of miR-634 in hepatocellular carcinoma and its effect on biological behavior of Hepatocellular carcinoma cells

LI Fei，LI De-Xin,ZHOU Guang-Peng.The East ward of Sichuan Provincial People′s Hospital of Hepatobiliary Surgery,Chengdu 610101，China

Objective:To detect the expression level of microRNA-634 (miR-634) in hepatocellular carcinoma (HCC) and its regulatory effect on the common biological behavior of hepatocellular carcinoma cells. Methods: Real-time fluorescence quantitative PCR (RT qPCR) method was used to detect HCC cell lines (HepG2, SMMC7721, BEL7402, bel7404, SNU739), 69 cases of HCC tissues and matching relative quantification of miR-634 paracancerous tissues and analysis of relationship between miR-634 expression and HCC patients gender, age, tumor size, degree of differentiation, child Pugh classification, BCLC staging, portal vein tumor thrombus and liver metastasis, while building a miR-634 eukaryotic expression vector and transfected into hepatocellular carcinoma cell lines, using live cell counting kit-8 CCK-8, flow cytometric annexin V/PI double staining and Transwell experiment to detect the transfection miR-634 on cell proliferation, apoptosis and invasion effects.Results: Compared with the normal human liver cell line L-02 and hepatocellular carcinoma cells miR-634 were decreased (P<0.05), the expression followed by HepG2>SNU739>Bel7402>Bel7404>SMMC7721;69 cases of hepatocellular carcinoma (HCC) of miR-634 level (0.253±0.019) and lower than that of the matched paracancerous tissues (P<0.05), and related with the tumor size, degree of differentiation, BCLC stage, portal vein tumor thrombus and liver metastasis (P<0.05). Over expression in the transfected group 24-96 h after miR-634 level continues to rise, control group and blank vector transfected group differences were statistically significant (P<0.05);and the control transfection group and blank group compared to transfection proliferation inhibition rate, apoptosis rate was increased, but wear the number of cell membrane decreased, the difference was statistically significant (P<0.05).Conclusion: miR-634 in hepatocellular carcinoma tissues and cells were low expression and related to clinical pathological parameters, raised its level can inhibit the proliferation and invasion of hepatocellular carcinoma cells and induce apoptosis, for the prevention and treatment of liver cancer has an important reference value.

Hepatocellular carcinoma;miR-634;Proliferation;Invasion;Apoptosis

10.3969/j.issn.1000-484X.2016.08.017

R735.7文獻(xiàn)標(biāo)志碼A

1000-484X(2016)08-1160-05

李飛(1972年-)，男，主治醫(yī)生，主要從事肝膽胰腺外科,E-mail:lllfff_14@sina.com。