孫紅梅，羅　蓉，李冬梅

(1 安利(中國)日用品有限公司，廣州　510613； 2北京聯(lián)合大學(xué)應(yīng)用文理學(xué)院，北京　100191)

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輔酶Q10和維生素E配伍的穩(wěn)定性和食用安全性研究

孫紅梅1，羅蓉1，李冬梅2

(1安利(中國)日用品有限公司，廣州510613；2北京聯(lián)合大學(xué)應(yīng)用文理學(xué)院，北京100191)

摘要：目的：研究輔酶Q10和維生素E配伍的穩(wěn)定性和食用安全性。方法：采用高效液相色譜法，對經(jīng)過加速破壞的輔酶Q10和維生素E配伍的樣品進(jìn)行含量分析和安全性毒理學(xué)評價。結(jié)果：輔酶Q10和維生素E在24個月內(nèi)未發(fā)生明顯化學(xué)反應(yīng)，輔料也未對其穩(wěn)定性產(chǎn)生影響，毒理學(xué)試驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)安全性問題。結(jié)論：輔酶Q10和維生素E配伍穩(wěn)定，并且食用安全。

關(guān)鍵詞：輔酶Q10；維生素E；穩(wěn)定性；安全性

輔酶Q10(CoQ10)是一種脂溶性的類維生素物質(zhì)，廣泛存在于生物體細(xì)胞內(nèi)，具有重要的生理功能活性。有研究表明，輔酶Q10具有增強(qiáng)免疫力、緩解體力疲勞和清除自由基等作用[1-3]，輔酶Q10和維生素E具有顯著的提高機(jī)體免疫力和緩解體力疲勞等功能[4-6]。本文主要研究了輔酶Q10維生素E配伍的穩(wěn)定性和食用安全性。

1材料

1.1樣品

受試樣品由安利(中國)日用品有限公司提供，內(nèi)容物為粘稠狀紅色液體的軟膠囊，塑料瓶裝，樣品核準(zhǔn)凈含量0.414g/粒，60粒/瓶，以輔酶Q10和維生素E為原料，加入抗氧化劑迷迭香提取物、米糠油等經(jīng)混和、包膠、干燥和包裝等主要工藝加工制成軟膠囊。人體推薦日服量為每天1粒。

1.2主要儀器與試劑

Waters2695-2487高效液相色譜儀、Agilent6890氣相色譜儀、電子天平、恒溫恒濕試劑箱、MEK-6318K全自動血球計數(shù)儀、SELECTRA-E全自動生化分析儀、離心機(jī)、切片機(jī)、全自動脫水機(jī)、包埋機(jī)、手術(shù)器械。

CoQ10對照品，中國藥品生物制品檢定所；維生素E(d-α-生育酚)對照品，SAGMA公司；乙腈、甲醇、無水乙醇、三氯化鐵、四氫呋喃均為色譜純。各種生化試劑盒：總蛋白試劑盒(120441)、白蛋白試劑盒(120501)、谷草轉(zhuǎn)氨酶試劑盒(120991)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑盒(122021)、膽固醇試劑盒(131501)、甘油三酯試劑盒(135941)、尿素試劑盒(120991)、葡萄糖試劑盒(133031)、肌酐試劑盒(132591)。稀釋液DH-640(121114)、溶血劑DH-680(121102)。

2方法

2.1穩(wěn)定性試驗(yàn)方法

2.1.1樣品處理3批受試樣品貯存于30℃以下的陰涼干燥處，保存期24個月，供常規(guī)穩(wěn)定性試驗(yàn)用。另取上述3批受試樣品每批次30瓶，置于溫度為37±2℃、濕度75%±5%的恒溫恒濕箱中保存，每個月每個批次取出10瓶，共分成1、2、3個月進(jìn)行加速穩(wěn)定性試驗(yàn)。

2.1.2色譜條件

(1)CoQ10：采用高效液相色譜，Nova-Pak C18色譜柱，柱溫25℃，流動相體積比：乙腈：四氫呋喃：水(55∶40∶5)，進(jìn)樣量5μL，流速1.0mL/min。

(2)維生素E：采用氣相色譜，DB-1色譜柱，載氮?dú)?，載氣流速4.5mL/min，進(jìn)樣口溫度300℃，柱溫箱的初始溫度是200℃、終止溫度300℃，升溫速率10℃/min，到達(dá)終止溫度后保持20min，檢測器溫度是300℃，進(jìn)樣量1μL，分流比10∶1。

2.1.3樣品測定樣品分別在0、1、2、3個月加速穩(wěn)定性試驗(yàn)后進(jìn)行CoQ10和維生素E的含量測定。CoQ10的含量測定采取正己烷與乙醇混合液提取試樣中CoQ10，加1mL 0.1%三氯化鐵的無水乙醇稀釋過濾后，采用高效液相色譜分離，紫外檢測器檢測，根據(jù)保留時間和峰面積進(jìn)行定量[7]。維生素E的含量測定采用天然維生素E的國家標(biāo)準(zhǔn)方法(GB 19191-2003)[8]。

2.2安全性試驗(yàn)方法

2.2.1受試樣品取0時受試樣品，冷藏或貯存于30℃以下的陰涼干燥處，供試驗(yàn)用。人體口服推薦量為1粒/d，即每日0.414g/60 kg BW。

2.2.2受試動物及條件急性毒性試驗(yàn)和30d喂養(yǎng)試驗(yàn)用鼠選用中國食品藥品檢定研究院[許可證號：SCXK(京)2009-0017]繁殖的SPF級昆明種小鼠和SD大鼠。遺傳毒性試驗(yàn)用斯貝福(北京)實(shí)驗(yàn)動物科技有限公司[許可證號：SCXK(京)2011-0004]繁殖的SPF級昆明種小鼠。基礎(chǔ)飼料由北京華阜康生物科技股份有限公司生產(chǎn)[許可證號：SCXK-(京)2009-0008]。各劑量組均給予基礎(chǔ)飼料。采用SPF級動物房[實(shí)驗(yàn)動物使用許可證號：SYXK(京)2012-0031]。

2.2.3急性毒性試驗(yàn)(最大耐受量MTD法)選用18～22g昆明種小鼠20只及180～220g SD大鼠20只，雌雄各半，進(jìn)行試驗(yàn)。取受試樣品的內(nèi)容物125.0g，加玉米油至200.0mL，使用濃度0.625g/mL。灌胃容量20mL/kg BW，分成2次灌胃，間隔6h，灌胃劑量相當(dāng)于25.0g/kg BW(相當(dāng)于人體推薦日攝入量的3 623倍)，連續(xù)觀察14d，記錄大鼠的一般狀態(tài)、體重變化、中毒癥狀及死亡情況，確定最大耐受劑量(MTD)。

2.2.4小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞(PCE)微核試驗(yàn)選用體重25～30g昆明種小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只。以環(huán)磷酰胺(40mg/kg BW)為陽性對照，玉米油為溶劑對照，低、中、高等3個劑量組分別為2.50、5.00、10.00g/kg BW，相當(dāng)于人體推薦劑量的362、725、1 449倍。均采用經(jīng)口灌胃給予，灌胃容量約為20mL/kg BW。2次灌胃給予受試樣品，2次給藥間隔24h，末次灌胃6h后，處死動物。取小鼠胸骨骨髓，用小牛血清稀釋制作涂片。采用雙盲法閱片。顯微鏡下觀察每只小鼠計數(shù)1 000個嗜多染紅細(xì)胞(PCE)，計算含微核的PCE的千分率。同時，每只小鼠計數(shù)200個PCE和成熟紅細(xì)胞(NCE)數(shù)，計算PCE與NCE比值。

2.2.5精子畸形試驗(yàn)選用體重25～30g昆明種小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只。以環(huán)磷酰胺(40mg/kg BW)為陽性對照，玉米油為溶劑對照，低、中、高等3個劑量組分別為2.50、5.00、10.00g/kg BW，相當(dāng)于人體推薦劑量的362、725、1 449倍。均采用經(jīng)口灌胃給予，灌胃容量約20mL/kg BW。每日灌胃1次，連續(xù)5d，末次灌胃30d后，處死動物。取附睪制片，雙盲法閱片。高倍鏡下觀察小鼠的精子狀態(tài)，每組取5只小鼠計數(shù)，每只計數(shù)1 000個精子，計算精子畸變發(fā)生的百分率。

2.2.6大鼠30d喂養(yǎng)試驗(yàn)選用離乳大鼠80只，雌雄各半，隨機(jī)分成4組，每組20只。以玉米油為溶劑對照，低、中、高等3個劑量組，分別為0.17、0.34、0.69g/kg BW，相當(dāng)于推薦人體日攝入量25、50、100倍。采用灌胃給予受試樣品，每日1次，連續(xù)30d灌胃容量為10mL/kg BW。每日觀察并記錄動物的一般表現(xiàn)，中毒和死亡情況。每周稱2次體重，撤食量和剩余量，計算每周攝食量和食物利用率。在第30d禁食16h后稱空腹體重，測定相關(guān)血液指標(biāo)和血清生化指標(biāo)。進(jìn)行大體解剖，稱量肝臟、腎臟、脾和睪丸等臟器的絕對重量并計算臟/體重量比。當(dāng)各劑量組大鼠大體檢查沒有發(fā)現(xiàn)明顯病變，且血液指標(biāo)和血清生化指標(biāo)沒有發(fā)生顯著性變化時，取高劑量組與溶劑對照組的肝臟、腎臟、胃、腸、脾、睪丸和卵巢進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。若發(fā)現(xiàn)病變后對較低劑量組進(jìn)行相應(yīng)檢查。由每只大鼠中切取肝組織、腎組織、脾組織、胃組織、十二指腸組織、卵巢或睪丸組織各一塊，經(jīng)甲醛固定，酒精、二甲苯脫水透明，石蠟包埋，制成5μm厚度切片，蘇木精伊紅染色，光學(xué)顯微鏡觀察。

3結(jié)果與分析

3.1穩(wěn)定性檢測結(jié)果

從表1可見，在溫度37±2℃、濕度75%±5%的條件下分別存放0、1、2、3個月，受試樣品CoQ10和維生素E指標(biāo)無發(fā)生明顯變化，這表明，受試樣品質(zhì)量穩(wěn)定，CoQ10和維生素E在迷迭香提取物和米糠油基質(zhì)中可以穩(wěn)定存在。

表1　受試樣品穩(wěn)定性測試結(jié)果

3.2安全性檢測結(jié)果

3.2.1急性毒性(最大耐受MTD量)試驗(yàn)結(jié)果由表2可見，給雌、雄的昆明小鼠和SD大鼠灌胃2次受試樣品，灌胃劑量為25.0g/kg BW，在觀察14d期間，動物狀態(tài)正常，無中毒體征和死亡等異常情況。第15d將受試動物處死進(jìn)行大體解剖檢查，主要器官未見明顯異常。受試樣品對雌、雄昆明小鼠和SD大鼠的經(jīng)口MTD均大于15g/kg BW，受試樣品屬無毒級別。

表2　急性毒性試驗(yàn)(MTD)結(jié)果

3.2.2小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞(PCE)微核試驗(yàn)結(jié)果 由表3、表4可見，各劑量受試樣品對雌、雄昆明小鼠的骨髓細(xì)胞增殖沒有明顯抑制作用。雌、雄昆明小鼠各劑量組骨髓PCE微核率與溶劑對照組比較均無顯著性差異(P>0.05)。陽性對照組小鼠骨髓PCE微核率顯著高于溶劑對照組(P<0.01)，說明受試動物敏感，試驗(yàn)可靠。結(jié)果表明，在受試劑量范圍內(nèi)，受試樣品小鼠骨髓PCE微核試驗(yàn)陰性。

表3　雌性昆明小鼠骨髓PCE微核試驗(yàn)結(jié)果

表4　雄性昆明小鼠骨髓PCE微核試驗(yàn)結(jié)果

3.2.3小鼠精子畸形試驗(yàn)結(jié)果由表5可見，與溶劑對照組比較，受試樣品各劑量組的小鼠精子畸形發(fā)生率均無顯著性差異(P>0.05)。陽性對照組小鼠精子畸形發(fā)生率有顯著性差異(P<0.01)，說明受試小鼠敏感，試驗(yàn)可靠。結(jié)果表明，在受試劑量范圍內(nèi)，受試樣品小鼠精子畸形試驗(yàn)陰性。

表5　小鼠精子畸形試驗(yàn)結(jié)果

3.2.4大鼠30d喂養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果給予大鼠不同劑量的受試樣品30d后，大鼠體重、體重增重、攝食量、食物利用率、臟器檢查、臟器重量、臟/體比值、血液學(xué)和血液生化學(xué)檢查結(jié)果表明，與溶劑對照組間比較，受試樣品各劑量組的各檢驗(yàn)項目均沒有顯著性差異(P>0.05)。

病理組織學(xué)結(jié)果表明，溶劑對照組與受試樣品各劑量組的雌、雄大鼠的肝臟、腎臟、胃、十二指腸、脾、睪丸或卵巢均沒有發(fā)現(xiàn)明顯損傷性病理變化，說明30d喂養(yǎng)沒有發(fā)現(xiàn)本受試樣品有明顯的毒性作用。

4討論

CoQ10與其他原料一起使用時是否會發(fā)生化學(xué)反應(yīng)一直被食品行業(yè)重視，CoQ10與維生素E都含有共軛雙鍵，兩者混合成軟膠囊時，有可能發(fā)生化學(xué)反應(yīng)而導(dǎo)致產(chǎn)品不穩(wěn)定[9-12]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采用CoQ10和維生素E為主要原料，迷迭香提取物和米糠油為基質(zhì)制成的軟膠囊中，未見CoQ10和維生素E的量發(fā)生明顯變化，可見CoQ10和維生素E在24個月的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的，且輔料的存在也未對其穩(wěn)定性產(chǎn)生任何的影響。毒理學(xué)評價實(shí)驗(yàn)也表明CoQ10和維生素E配伍食用安全。◇

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(責(zé)任編輯李婷婷)

作者簡介：孫紅梅(1985—)，女，碩士，研究方向：保健食品研發(fā)和注冊。

通訊作者：羅蓉(1970—)，女，雙學(xué)士，工程師，研究方向：食品和保健食品技術(shù)法規(guī)。

Compatible Stability and Edible Safety of Coenzyme Q10and Vitamin E

SUN Hong-mei1，LUO Rong1，LI Dong-mei2

(1Amway (China) Co.Ltd.，Guangzhou 510613，China；2College of Applied Arts and Science of Beijing Union University，Beijing 100191，China)

Abstract：【Objective】To study the compatible stability and edible safety of coenzyme Q10and vitamin E.【Method】The samples containing coenzyme Q10and vitamin E were analyzed by high-performance liquid chromatography，and their toxicological safety was assessed.【Result】 No significant changes were found in contents of coenzyme Q10and vitamin E.The presence of excipients did not show any impact on its stability.No reaction of coenzyme Q10and vitamin was found within 24 months.Toxicological evaluation showed no safety issues.【Conclusion】It was proved that combination of coenzyme Q10and vitamin E was stable and safe.

Keywords：coenzyme Q10；vitamin E；stability；safety