熊倩妤，楊　俊，屠大朋

(貴陽市公共衛(wèi)生救治中心檢驗科，貴州 貴陽 550004)

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AIDS患者新型隱球菌檢測方法比較①

熊倩妤，楊俊，屠大朋

(貴陽市公共衛(wèi)生救治中心檢驗科，貴州 貴陽 550004)

摘要：目的：對比分析AIDS(艾滋病)患者新型隱球菌墨汁染色法，抗原凝聚法和培養(yǎng)法。方法：回顧分析我院2012-04～2015-06收治的培養(yǎng)出新型隱球菌的63例AIDS患者資料，觀察采用墨汁染色法和抗原凝聚法檢查63例患者新型隱球菌的陽性率。結(jié)果：采用抗原凝聚法檢驗63例患者的陽性率為85.7%，高于墨汁染色法的73.01%，兩種檢測方法的新型隱球菌陽性檢出率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(x2=1.694，P>0.05)。結(jié)論：墨汁染色法和抗原凝聚法用于檢測AIDS患者新型隱球菌的檢測，均可獲得良好應(yīng)用效果。

關(guān)鍵詞：AIDS；新型隱球菌；墨汁染色；培養(yǎng)；陽性檢出率

新型隱球菌是一種鴿糞、牛乳、水果、土壤等物質(zhì)的腐爛菌，又被臨床稱為溶組織酵母菌，為人類條件致病菌，通常情況下為外源性感染，感染群體主要為細(xì)胞免疫功能受損人群[1]?，F(xiàn)階段，隨著抗生素類藥物的不合理使用，病原菌的耐藥性不斷增強，由新型隱球菌引發(fā)的腦膜炎已成為導(dǎo)致AIDS患者死亡的主要因素之一[2]。我院本次研究對63例AIDS患者采用墨汁染色法和抗原凝聚法鑒定新型隱球菌的結(jié)果進行了回顧分析，旨在能夠盡早發(fā)現(xiàn)病原菌，為患者制定有效的臨床治療方案。

1資料與方法

1.1一般資料

本次研究回顧性分析2012-04～2015-06在我院接受治療的63例AIDS患者的新型隱球菌檢驗資料，采用蛋白印跡法檢測63例患者的HIV(人類免疫缺陷病毒)結(jié)果均為陽性。63例患者中，男50例，女13例，年齡12～75歲，平均(49.5±1.3)歲。本次研究在事先獲取我院倫理委員會批準(zhǔn)的前提下開展。

1.2研究方法

本組63例患者為新型隱球菌真菌培養(yǎng)法檢驗結(jié)果為陽性的患者，鑒定新型隱球菌采用MicroScan Walk Away 40微生物鑒定儀，檢查試劑為儀器原裝試劑。

1.2.1培養(yǎng)法

在兩個不同的靜脈穿刺部位分別無菌抽取患者血液10mL，于2個雙相需氧血培養(yǎng)瓶(由鄭州安圖生物工程股份有限公司提供)中，放入37℃溫箱培養(yǎng)7d，再放入25℃溫箱培養(yǎng)3d，腦脊液培養(yǎng)25d，每天檢查培養(yǎng)瓶是否長菌。若長菌后用血平板轉(zhuǎn)種于37℃CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。若涂片見到真菌孢子適時轉(zhuǎn)種馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基(血平板和PDA培養(yǎng)基由賽默飛世爾生物有限公司提供)，放入25℃溫箱培養(yǎng)48h可見奶油狀、凸起、濕潤的菌落生長后采用MicroScan Walk Away 40微生物鑒定儀鑒定，檢查試劑為儀器原裝試劑。

1.2.2墨汁染色法

將臨床送檢的腦脊液離心5min倒掉上清液，將沉淀物進行墨汁染色，最后用顯微鏡對染色的腦脊液涂片進行觀察。

1.2.3抗原凝聚法

使用新型隱球菌莢膜多糖抗原試劑盒(immuno-mycologicis,inc.)進行檢測，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行操作。本次研究觀察墨汁染色法和抗原凝聚法檢測新型隱球菌的陽性率。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法

采用軟件SPSS24.0處理研究過程中得到的符合正態(tài)分布的研究數(shù)據(jù)，觀察指標(biāo)均采用百分率[例(%)]表示，采用χ2檢驗兩者之間存在的差異，以P<0.05表示兩者比較存在明顯差異，具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

回顧分析發(fā)現(xiàn)采用墨汁染色法檢查63例患者新型隱球菌的陽性率為73.01%，采用抗原凝聚法檢查63例患者新型隱球菌的陽性率為85.7%，兩種檢查方法檢查AIDS患者新型隱球菌的陽性率比較存在的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1　兩種新型隱球菌檢查方法的陽性檢出率比較 [n=63,(%)]

注：墨汁染色法與抗原凝聚法比較χ2=6.948,P<0.05。

3討論

AIDS是由HIV病毒感染引起的一種獲得性免疫缺陷性疾病，具有臨床治療難度大，預(yù)后不佳等臨床特點[3,4]?，F(xiàn)階段，全世界范圍內(nèi)仍無根治該疾病的有效方法，各國臨床治療該疾病的目標(biāo)為最大限度的和持久性的降低患者機體病毒承載量，促使患者免疫功能獲得重建，提高患者的生存質(zhì)量[5]。近年來，不斷有臨床研究發(fā)現(xiàn)，合并新型隱球菌感染是導(dǎo)致AIDS患者死亡的主要原因[5～7]。新型隱球菌是一種具有莢膜的酵母樣真菌，屬于條件致病菌，主要傳播途徑為呼吸道，當(dāng)AIDS患者機體免疫功能明顯下降時，新型隱球菌可經(jīng)血液侵入患者中樞神經(jīng)系統(tǒng)，繼而導(dǎo)致AIDS患者并發(fā)新型隱球菌性腦膜炎，加重AIDS患者病情[8]。臨床盡早檢查出AIDS患者是否感染新型隱球菌，對于延長AIDS患者的生存期具有重要意義。

目前臨床上應(yīng)用的新型隱球菌檢查方法包括真菌培養(yǎng)法、墨汁染色法、抗原凝聚法等，真菌培養(yǎng)法是通過對檢驗標(biāo)本進行培養(yǎng)、提取和鑒定，判斷患者是否發(fā)生相關(guān)病原菌感染，為現(xiàn)階段臨床檢查新型隱球菌的金標(biāo)準(zhǔn)，但該種檢測方法的靈敏度不高，培養(yǎng)時間長，不利于患者病情的早期診斷。墨汁染色法檢驗結(jié)果易受菌量多少的影響，當(dāng)患者接受治療后，體內(nèi)的新型隱球菌會出現(xiàn)退形變，透明的莢膜在高倍鏡下觀察缺乏清晰性，辨認(rèn)難度高。并且必須抽取腦脊液檢測，患者比較痛苦。隱球菌抗原乳膠凝聚法檢測新型隱球菌性的陽性率高。檢測需要時間短，操作方便，有利于患者病情的早期診斷。用墨汁染色法、和隱球菌抗原乳膠凝聚法檢測AIDS患者新型隱球菌性感染的陽性率均在70%以上，不過由于上述方法檢測新型隱球菌性陽性率均達不到100%。因此，臨床上應(yīng)聯(lián)合使用上述方法中的2～3種同時檢測，以確保檢查結(jié)果的準(zhǔn)確性。

我院本次研究對抗原凝聚法和墨汁染色法檢查AIDS患者新型隱球菌的陽性率進行對比發(fā)現(xiàn)，兩種檢測方法檢測AIDS患者新型隱球菌的陽性率比較無明顯差異。但也有少數(shù)臨床研究與我院本次研究所得結(jié)果存在明顯差異，部分研究學(xué)者認(rèn)為選擇優(yōu)質(zhì)墨汁，適當(dāng)調(diào)整腦脊液與墨汁的比例，避免過度離心，可有效提高墨汁染色法的檢查準(zhǔn)確性。但由于臨床對該方面課題開展的研究較少，我院本次研究所得結(jié)果以及上述學(xué)者的研究結(jié)果仍需通過大量的實踐研究進行證明。

參考文獻：

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[3]李國偉.兩性霉素B聯(lián)合氟康唑治療HIV/AIDS合并新型隱球菌腦膜腦炎的療效及不良反應(yīng)[J].大家健康(中旬版),2014,8(6):537-538

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作者簡介：①熊倩妤(1978～)女，貴州貴陽人，本科，主管檢驗師。

中圖分類號：R446.11

文獻標(biāo)識碼：B

文章編號：1008-0104(2016)04-0149-02

(收稿日期：2016-04-18)