吳　亮　張　靖

(海西州人民醫(yī)院普通外科，青?！〉铝罟?17000)

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急性腸梗阻大鼠血漿降鈣素原及C反應(yīng)蛋白水平的動態(tài)變化及臨床意義

吳亮張靖1

(海西州人民醫(yī)院普通外科，青海德令哈817000)

〔摘要〕目的探討急性腸梗阻大鼠血漿降鈣素原(PCT)及C反應(yīng)蛋白(CRP)水平的動態(tài)變化及臨床意義。方法將88只Wistar大鼠分為對照組(n=8)、假手術(shù)組(n=40)和腸梗阻組(n=40)，對照組大鼠采集標(biāo)本后處死，腸梗阻組行開腹手術(shù)結(jié)扎回腸末端，假手術(shù)組僅行開腹手術(shù)，假手術(shù)組和腸梗阻組于手術(shù)后8、24、48、72、96 h采集血液和結(jié)扎上端回腸部位，檢測各組不同時間血漿PCT、CRP水平，并觀察回腸組織病理學(xué)改變。結(jié)果假手術(shù)組PCT、CRP水平在8 h、24 h明顯高于對照組，且逐漸升高，48、72、96 h逐漸下降，CRP在實驗結(jié)束時已接近正常水平(P>0.05)；腸梗阻組PCT、CRP水平在各時間點均明顯高于對照組，并逐漸增加，到實驗結(jié)束時達(dá)到高峰，8 h和24 h假手術(shù)組與腸梗阻組無統(tǒng)計學(xué)差異(均P>0.05)，48 h、72 h和96 h腸梗阻組PCT、CRP水平顯著高于假手術(shù)組(均P>0.05)；組織病理學(xué)檢查對照組大鼠腸壁黏膜結(jié)構(gòu)正常，假手術(shù)組可見輕度病理改變，腸梗阻組隨時間推移病理改變加深，腸梗阻96 h可見黏膜結(jié)構(gòu)明顯破壞，絨毛壞死，嚴(yán)重水腫和炎癥細(xì)胞浸潤。結(jié)論血漿PCT和CRP水平能反映腸梗阻存在狀態(tài)、腸黏膜受損程度，且檢測方法簡單，適于臨床推廣。

〔關(guān)鍵詞〕腸梗阻；降鈣素原；C-反應(yīng)蛋白

腸道對缺血缺氧比較敏感，當(dāng)發(fā)生腸梗阻時，腸道屏障功能障礙、腸壁通透性增加，使存在于腸腔內(nèi)的細(xì)菌穿過腸壁進(jìn)入血液，通過血液到達(dá)機(jī)體其他部位引起全身炎癥反應(yīng)綜合征，嚴(yán)重感染者甚至出現(xiàn)全身多器官功能障礙(MODS)〔1，2〕。已有研究顯示，降鈣素原(PCT)對全身細(xì)菌感染的診斷、鑒別診斷、治療效果及預(yù)后的判斷敏感，已廣泛應(yīng)用于ICU病房、腫瘤科、外科、內(nèi)科、急診科等臨床科室的炎癥鑒別診斷〔3〕。此外，C反應(yīng)蛋白(CRP)已被用于敗血癥、細(xì)菌性感染等疾病的診斷〔4〕。本實驗擬觀察腸梗阻黏膜屏障受損時PCT和CRP的變化。

1材料和方法

1.1實驗動物Wistar大鼠88只，體重300～350 g，購自上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司〔合格證號:SCXK(滬)2009-0005,清潔級〕。動物飼喂在實驗室(實驗室生物安全防護(hù)水平為 BSL-1)。實驗室溫度恒定(24±1)℃，相對濕度50%～70%，維持12 h光照節(jié)律，自由攝食、飲水。

1.2動物分組和建模所有大鼠依據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分為對照組、假手術(shù)組和腸梗阻組，對照組8只，假手術(shù)組和腸梗阻組各40只，將假手術(shù)組和腸梗阻組大鼠再分為5個亞組，每組8只，分別于建模手術(shù)后8、24、48、72、96 h采集標(biāo)本。大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w，實驗前12 h禁食。手術(shù)前用3.5%水合氯醛10 ml/kg進(jìn)行腹腔麻醉，麻醉成功后固定大鼠于鼠板上，手術(shù)區(qū)域備皮，碘伏消毒。對照組大鼠麻醉后不進(jìn)行建模手術(shù)，供采集標(biāo)本用。腸梗阻組大鼠在腹中線下1/3處剪開皮膚，充分暴露回盲部，在回盲瓣處用絲線結(jié)扎末端回腸，逐層縫合腹壁。假手術(shù)組大鼠麻醉后，按上述手術(shù)方法同樣操作，但不用絲線結(jié)扎。手術(shù)結(jié)束后，將大鼠放回籠中。

1.3標(biāo)本采集對照組大鼠麻醉后即行開腹手術(shù)，分離出回腸及腹主動脈，用無菌注射劑采集腹主動脈血約4 ml，注入乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中備用，于結(jié)扎部位上端約2 cm處剪取回腸，生理鹽水反復(fù)沖洗腸腔，濾紙吸干后置于10%的甲醛中固定，采集標(biāo)本完畢后，頸椎脫臼法處死大鼠。假手術(shù)組和腸梗阻組大鼠于建模手術(shù)后8、24、48、72、96 h再次麻醉并按同樣方法采集血液和回腸標(biāo)本。

1.4觀察指標(biāo)及檢測方法(1)PCT及CRP檢測方法：經(jīng)腹主動脈采血4 ml，置于EDTA抗凝管中室溫靜置0.5～1 h，3 000 r/min離心5 min取血清，置于-80℃保存，待全部標(biāo)本采集完畢后統(tǒng)一檢測。PCT及CRP均采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定，試劑盒購自美國R&D公司，操作嚴(yán)格按照試劑盒進(jìn)行。(2)回腸組織病理學(xué)檢查：手術(shù)取出的回腸組織經(jīng)10%甲醛固定48 h后，清水沖洗，經(jīng)脫水和透明后，石蠟包埋，切片，切片脫蠟后用蘇木精-伊紅(HE)染色，顯微鏡下觀察組織病理學(xué)改變。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS17.0軟件，計量資料比較采用t檢驗、方差分析、SNK法。

2結(jié)果

2.1大鼠血清PCT水平假手術(shù)組PCT水平在8 h、24 h明顯高于對照組，且逐漸升高，48 h、72 h、96 h逐漸下降，假手術(shù)組各時間點PCT水平差異顯著(F=21.384，P=0.000)；腸梗阻組PCT水平在各時間點均明顯高于對照組，并逐漸增加，到實驗結(jié)束時達(dá)到高峰，腸梗阻組各時間點PCT水平差異顯著(F=22.187，P=0.000)。不同時間點各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)，8 h和24 h假手術(shù)組與腸梗阻組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)，48 h、72 h和96 h腸梗阻組PCT水平顯著高于假手術(shù)組(均P<0.05)。見表1。

2.2大鼠血清CRP水平假手術(shù)組CRP水平在8 h、24 h明顯高于對照組，且逐漸升高，48 h、72 h、96 h逐漸下降，實驗結(jié)束時已接近正常水平(P>0.05)，假手術(shù)組各時間點CRP水平差異顯著(F=16.254，P=0.000)；腸梗阻組PCT水平從8 h即升高，并逐漸增加，到實驗結(jié)束時達(dá)到高峰，腸梗阻組各時間點CRP水平差異顯著(F=19.276，P=0.000)。不同時間點各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)，8 h和24 h腸梗阻組與假手術(shù)組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)，48 h、72 h和96 h腸梗阻組CRP水平顯著高于假手術(shù)組(均P<0.05)。見表1。

2.3大鼠回腸組織病理學(xué)觀察對照組大鼠腸壁黏膜結(jié)構(gòu)正常，腸絨毛排列整齊，無毛細(xì)血管擴(kuò)張及出血；假手術(shù)組術(shù)后8、24 h可見回腸黏膜萎縮，腸絨毛排列尚整齊，偶見黏膜下層輕度水腫和毛細(xì)血管擴(kuò)張，有少量炎癥細(xì)胞浸潤，但術(shù)后48、72、96 h病理學(xué)變化與對照組無明顯差異；腸梗阻組術(shù)后8、24 h病理改變同假手術(shù)組，術(shù)后48 h，回腸黏膜變薄，腸絨毛排列不整齊，偶見絨毛斷裂、倒伏，黏膜下層水腫及炎癥細(xì)胞浸潤，術(shù)后72、96 h，黏膜結(jié)構(gòu)明顯破壞，腸絨毛排列不整齊，大部分絨毛斷裂、倒伏，可見壞死絨毛，黏膜水腫嚴(yán)重并伴炎癥細(xì)胞浸潤。

表1　各組大鼠不同時間PCT、CRP水平比較

與對照組比較：1)P<0.05，與假手術(shù)組比較：2)P<0.05

3討論

PCT是降鈣素(CT)前肽物質(zhì)，是一種由116個氨基酸組成的糖蛋白。PCT的來源尚未明確，猜測產(chǎn)生的主要部位是肝臟。健康人血清中PCT含量極低，在細(xì)菌脂多糖的誘導(dǎo)下，PCT可釋放入血，3～4 h開始升高，6 h后急劇上升，24 h前不會被降解為CT，且不受體內(nèi)激素及臨床用藥的影響，能夠較長時間地維持在一個相對穩(wěn)定的水平〔5〕。研究表明PCT是維持和擴(kuò)大炎癥的重要介質(zhì)之一〔6〕。CRP是組織損傷、感染性疾病及炎癥反應(yīng)的指標(biāo)之一〔7〕。當(dāng)發(fā)生急性腸梗阻時，受累腸段的血管內(nèi)皮細(xì)胞、吞噬細(xì)胞及單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)產(chǎn)生介質(zhì)經(jīng)靜脈進(jìn)入肝臟，誘導(dǎo)肝臟產(chǎn)生大量的CRP入血。這個機(jī)制的產(chǎn)生較其他部位產(chǎn)生的介質(zhì)刺激肝臟更早且更有效。

本研究結(jié)果顯示，手術(shù)作為一種有創(chuàng)性治療方式，術(shù)后初期造成了動物的應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致腸道缺血，腸道屏障功能障礙，引起細(xì)菌移位，而移位的細(xì)菌和細(xì)菌內(nèi)毒素可顯著誘導(dǎo)PCT水平和CRP水平升高〔8〕；但術(shù)后48～96 h PCT和CRP水平逐漸下降，可能是未結(jié)扎假手術(shù)組大鼠，開腹后僅出現(xiàn)一過性的應(yīng)激反應(yīng)導(dǎo)致PCT和CRP水平上升，待應(yīng)激消失后，腸道功能恢復(fù)正常，釋放入血的PCT和CRP逐漸被代謝而得不到補充，進(jìn)而出現(xiàn)下降的趨勢。組織病理學(xué)觀察也證實假手術(shù)組在術(shù)后72 h和96 h腸壁結(jié)構(gòu)已基本恢復(fù)至正常。腸梗阻組PCT水平和CRP水平呈現(xiàn)連續(xù)上升趨勢，提示手術(shù)造成腸梗阻后，黏膜功能持續(xù)受損，并逐漸加重。由于損傷的持續(xù)存在，感染也隨之加重，因此腸梗阻組PCT水平和CRP水平持續(xù)升高。因此，大鼠腸壁組織病理學(xué)改變與血漿PCT水平和CRP水平有一定相關(guān)性。然而臨床實踐中，不可能通過病理切片來判斷腸黏膜的損傷程度，PCT和CRP水平能反映腸道黏膜受損的程度，可為臨床判斷提供依據(jù)。

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〔2015-09-12修回〕

(編輯袁左鳴)

〔中圖分類號〕R57

〔文獻(xiàn)標(biāo)識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)12-2875-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.12.022

1西安交通大學(xué)附屬陜西省腫瘤醫(yī)院腫瘤婦科

第一作者：吳亮(1974-)，男，副主任醫(yī)師，主要從事普通外科方面的研究。