吳　亮　張　靖

(海西州人民醫(yī)院普通外科，青海　德令哈　817000)

?

急性腸梗阻大鼠血漿降鈣素原及C反應蛋白水平的動態(tài)變化及臨床意義

吳亮張靖1

(海西州人民醫(yī)院普通外科，青海德令哈817000)

〔摘要〕目的探討急性腸梗阻大鼠血漿降鈣素原(PCT)及C反應蛋白(CRP)水平的動態(tài)變化及臨床意義。方法將88只Wistar大鼠分為對照組(n=8)、假手術組(n=40)和腸梗阻組(n=40)，對照組大鼠采集標本后處死，腸梗阻組行開腹手術結扎回腸末端，假手術組僅行開腹手術，假手術組和腸梗阻組于手術后8、24、48、72、96 h采集血液和結扎上端回腸部位，檢測各組不同時間血漿PCT、CRP水平，并觀察回腸組織病理學改變。結果假手術組PCT、CRP水平在8 h、24 h明顯高于對照組，且逐漸升高，48、72、96 h逐漸下降，CRP在實驗結束時已接近正常水平(P>0.05)；腸梗阻組PCT、CRP水平在各時間點均明顯高于對照組，并逐漸增加，到實驗結束時達到高峰，8 h和24 h假手術組與腸梗阻組無統(tǒng)計學差異(均P>0.05)，48 h、72 h和96 h腸梗阻組PCT、CRP水平顯著高于假手術組(均P>0.05)；組織病理學檢查對照組大鼠腸壁黏膜結構正常，假手術組可見輕度病理改變，腸梗阻組隨時間推移病理改變加深，腸梗阻96 h可見黏膜結構明顯破壞，絨毛壞死，嚴重水腫和炎癥細胞浸潤。結論血漿PCT和CRP水平能反映腸梗阻存在狀態(tài)、腸黏膜受損程度，且檢測方法簡單，適于臨床推廣。

〔關鍵詞〕腸梗阻；降鈣素原；C-反應蛋白

腸道對缺血缺氧比較敏感，當發(fā)生腸梗阻時，腸道屏障功能障礙、腸壁通透性增加，使存在于腸腔內的細菌穿過腸壁進入血液，通過血液到達機體其他部位引起全身炎癥反應綜合征，嚴重感染者甚至出現(xiàn)全身多器官功能障礙(MODS)〔1，2〕。已有研究顯示，降鈣素原(PCT)對全身細菌感染的診斷、鑒別診斷、治療效果及預后的判斷敏感，已廣泛應用于ICU病房、腫瘤科、外科、內科、急診科等臨床科室的炎癥鑒別診斷〔3〕。此外，C反應蛋白(CRP)已被用于敗血癥、細菌性感染等疾病的診斷〔4〕。本實驗擬觀察腸梗阻黏膜屏障受損時PCT和CRP的變化。

1材料和方法

1.1實驗動物Wistar大鼠88只，體重300～350 g，購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司〔合格證號:SCXK(滬)2009-0005,清潔級〕。動物飼喂在實驗室(實驗室生物安全防護水平為 BSL-1)。實驗室溫度恒定(24±1)℃，相對濕度50%～70%，維持12 h光照節(jié)律，自由攝食、飲水。

1.2動物分組和建模所有大鼠依據(jù)隨機數(shù)字表法分為對照組、假手術組和腸梗阻組，對照組8只，假手術組和腸梗阻組各40只，將假手術組和腸梗阻組大鼠再分為5個亞組，每組8只，分別于建模手術后8、24、48、72、96 h采集標本。大鼠適應性喂養(yǎng)1 w，實驗前12 h禁食。手術前用3.5%水合氯醛10 ml/kg進行腹腔麻醉，麻醉成功后固定大鼠于鼠板上，手術區(qū)域備皮，碘伏消毒。對照組大鼠麻醉后不進行建模手術，供采集標本用。腸梗阻組大鼠在腹中線下1/3處剪開皮膚，充分暴露回盲部，在回盲瓣處用絲線結扎末端回腸，逐層縫合腹壁。假手術組大鼠麻醉后，按上述手術方法同樣操作，但不用絲線結扎。手術結束后，將大鼠放回籠中。

1.3標本采集對照組大鼠麻醉后即行開腹手術，分離出回腸及腹主動脈，用無菌注射劑采集腹主動脈血約4 ml，注入乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中備用，于結扎部位上端約2 cm處剪取回腸，生理鹽水反復沖洗腸腔，濾紙吸干后置于10%的甲醛中固定，采集標本完畢后，頸椎脫臼法處死大鼠。假手術組和腸梗阻組大鼠于建模手術后8、24、48、72、96 h再次麻醉并按同樣方法采集血液和回腸標本。

1.4觀察指標及檢測方法(1)PCT及CRP檢測方法：經腹主動脈采血4 ml，置于EDTA抗凝管中室溫靜置0.5～1 h，3 000 r/min離心5 min取血清，置于-80℃保存，待全部標本采集完畢后統(tǒng)一檢測。PCT及CRP均采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定，試劑盒購自美國R&D公司，操作嚴格按照試劑盒進行。(2)回腸組織病理學檢查：手術取出的回腸組織經10%甲醛固定48 h后，清水沖洗，經脫水和透明后，石蠟包埋，切片，切片脫蠟后用蘇木精-伊紅(HE)染色，顯微鏡下觀察組織病理學改變。

1.5統(tǒng)計學方法應用SPSS17.0軟件，計量資料比較采用t檢驗、方差分析、SNK法。

2結果

2.1大鼠血清PCT水平假手術組PCT水平在8 h、24 h明顯高于對照組，且逐漸升高，48 h、72 h、96 h逐漸下降，假手術組各時間點PCT水平差異顯著(F=21.384，P=0.000)；腸梗阻組PCT水平在各時間點均明顯高于對照組，并逐漸增加，到實驗結束時達到高峰，腸梗阻組各時間點PCT水平差異顯著(F=22.187，P=0.000)。不同時間點各組間差異有統(tǒng)計學意義(均P<0.05)，8 h和24 h假手術組與腸梗阻組差異無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)，48 h、72 h和96 h腸梗阻組PCT水平顯著高于假手術組(均P<0.05)。見表1。

2.2大鼠血清CRP水平假手術組CRP水平在8 h、24 h明顯高于對照組，且逐漸升高，48 h、72 h、96 h逐漸下降，實驗結束時已接近正常水平(P>0.05)，假手術組各時間點CRP水平差異顯著(F=16.254，P=0.000)；腸梗阻組PCT水平從8 h即升高，并逐漸增加，到實驗結束時達到高峰，腸梗阻組各時間點CRP水平差異顯著(F=19.276，P=0.000)。不同時間點各組間差異有統(tǒng)計學意義(均P<0.05)，8 h和24 h腸梗阻組與假手術組差異無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)，48 h、72 h和96 h腸梗阻組CRP水平顯著高于假手術組(均P<0.05)。見表1。

2.3大鼠回腸組織病理學觀察對照組大鼠腸壁黏膜結構正常，腸絨毛排列整齊，無毛細血管擴張及出血；假手術組術后8、24 h可見回腸黏膜萎縮，腸絨毛排列尚整齊，偶見黏膜下層輕度水腫和毛細血管擴張，有少量炎癥細胞浸潤，但術后48、72、96 h病理學變化與對照組無明顯差異；腸梗阻組術后8、24 h病理改變同假手術組，術后48 h，回腸黏膜變薄，腸絨毛排列不整齊，偶見絨毛斷裂、倒伏，黏膜下層水腫及炎癥細胞浸潤，術后72、96 h，黏膜結構明顯破壞，腸絨毛排列不整齊，大部分絨毛斷裂、倒伏，可見壞死絨毛，黏膜水腫嚴重并伴炎癥細胞浸潤。

表1　各組大鼠不同時間PCT、CRP水平比較

與對照組比較：1)P<0.05，與假手術組比較：2)P<0.05

3討論

PCT是降鈣素(CT)前肽物質，是一種由116個氨基酸組成的糖蛋白。PCT的來源尚未明確，猜測產生的主要部位是肝臟。健康人血清中PCT含量極低，在細菌脂多糖的誘導下，PCT可釋放入血，3～4 h開始升高，6 h后急劇上升，24 h前不會被降解為CT，且不受體內激素及臨床用藥的影響，能夠較長時間地維持在一個相對穩(wěn)定的水平〔5〕。研究表明PCT是維持和擴大炎癥的重要介質之一〔6〕。CRP是組織損傷、感染性疾病及炎癥反應的指標之一〔7〕。當發(fā)生急性腸梗阻時，受累腸段的血管內皮細胞、吞噬細胞及單核-巨噬細胞系統(tǒng)產生介質經靜脈進入肝臟，誘導肝臟產生大量的CRP入血。這個機制的產生較其他部位產生的介質刺激肝臟更早且更有效。

本研究結果顯示，手術作為一種有創(chuàng)性治療方式，術后初期造成了動物的應激反應，導致腸道缺血，腸道屏障功能障礙，引起細菌移位，而移位的細菌和細菌內毒素可顯著誘導PCT水平和CRP水平升高〔8〕；但術后48～96 h PCT和CRP水平逐漸下降，可能是未結扎假手術組大鼠，開腹后僅出現(xiàn)一過性的應激反應導致PCT和CRP水平上升，待應激消失后，腸道功能恢復正常，釋放入血的PCT和CRP逐漸被代謝而得不到補充，進而出現(xiàn)下降的趨勢。組織病理學觀察也證實假手術組在術后72 h和96 h腸壁結構已基本恢復至正常。腸梗阻組PCT水平和CRP水平呈現(xiàn)連續(xù)上升趨勢，提示手術造成腸梗阻后，黏膜功能持續(xù)受損，并逐漸加重。由于損傷的持續(xù)存在，感染也隨之加重，因此腸梗阻組PCT水平和CRP水平持續(xù)升高。因此，大鼠腸壁組織病理學改變與血漿PCT水平和CRP水平有一定相關性。然而臨床實踐中，不可能通過病理切片來判斷腸黏膜的損傷程度，PCT和CRP水平能反映腸道黏膜受損的程度，可為臨床判斷提供依據(jù)。

4參考文獻

1李禹呈,楊拯,袁夢郎,等.新方法建立大鼠不完全性腸梗阻模型的實驗研究〔J〕.四川動物,2013;32(2):276-9,封2.

2黎朝良,方蘭,丁佑銘,等.急性腸梗阻患者血清降鈣素原檢測的臨床意義〔J〕.中華臨床醫(yī)師雜志(電子版),2012;6(7):157-8.

3蘇純潔.全身炎癥反應綜合征評分及血清降鈣素原對絞窄性腸梗阻的診斷及意義〔J〕.胃腸病學和肝病學雜志,2014;23(6):661-3.

4王東紅,李亮,盛麗,等.漿膜剝脫法建立大鼠粘連性不完全性腸梗阻模型〔J〕.中國普外基礎與臨床雜志,2011;18(4):384-90.

5蔡長茂,陳恩德,陳燕嬋,等.腸梗阻大鼠小腸黏膜屏障功能變化的實驗研究〔J〕.中國基層醫(yī)藥,2014;21(5):647-9,650.

6林琳,徐飛鵬,黃解元,等.血清肌酸激酶、C-反應蛋白和D-二聚體的測定在絞窄性腸梗阻早期診斷中的應用價值〔J〕.中國實用醫(yī)藥,2014;9(36):1-3.

7朱鵬程,梁中林,王光輝,等.血漿降鈣素原對結直腸癌術后腸梗阻中的預測作用〔J〕.中國普通外科雜志,2013;22(10):1319-23.

8Firat U,Senol S,Gelincik I,etal.The effects of caffeic acid phenethyl ester(CAPE)on bacterial translocation and inflammatory response in an experimental intestinal obstruction model in rats〔J〕.Eur Rev Med Pharmacol Sci,2015;19(10):1907-14.

〔2015-09-12修回〕

(編輯袁左鳴)

〔中圖分類號〕R57

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)12-2875-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.12.022

1西安交通大學附屬陜西省腫瘤醫(yī)院腫瘤婦科

第一作者：吳亮(1974-)，男，副主任醫(yī)師，主要從事普通外科方面的研究。