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        急性腸梗阻大鼠血漿降鈣素原及C反應(yīng)蛋白水平的動態(tài)變化及臨床意義

        2016-08-02 01:36:30
        中國老年學雜志 2016年12期
        關(guān)鍵詞:反應(yīng)蛋白降鈣素原腸梗阻

        吳 亮 張 靖

        (海西州人民醫(yī)院普通外科,青海 德令哈 817000)

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        急性腸梗阻大鼠血漿降鈣素原及C反應(yīng)蛋白水平的動態(tài)變化及臨床意義

        吳亮張靖1

        (海西州人民醫(yī)院普通外科,青海德令哈817000)

        〔摘要〕目的探討急性腸梗阻大鼠血漿降鈣素原(PCT)及C反應(yīng)蛋白(CRP)水平的動態(tài)變化及臨床意義。方法將88只Wistar大鼠分為對照組(n=8)、假手術(shù)組(n=40)和腸梗阻組(n=40),對照組大鼠采集標本后處死,腸梗阻組行開腹手術(shù)結(jié)扎回腸末端,假手術(shù)組僅行開腹手術(shù),假手術(shù)組和腸梗阻組于手術(shù)后8、24、48、72、96 h采集血液和結(jié)扎上端回腸部位,檢測各組不同時間血漿PCT、CRP水平,并觀察回腸組織病理學改變。結(jié)果假手術(shù)組PCT、CRP水平在8 h、24 h明顯高于對照組,且逐漸升高,48、72、96 h逐漸下降,CRP在實驗結(jié)束時已接近正常水平(P>0.05);腸梗阻組PCT、CRP水平在各時間點均明顯高于對照組,并逐漸增加,到實驗結(jié)束時達到高峰,8 h和24 h假手術(shù)組與腸梗阻組無統(tǒng)計學差異(均P>0.05),48 h、72 h和96 h腸梗阻組PCT、CRP水平顯著高于假手術(shù)組(均P>0.05);組織病理學檢查對照組大鼠腸壁黏膜結(jié)構(gòu)正常,假手術(shù)組可見輕度病理改變,腸梗阻組隨時間推移病理改變加深,腸梗阻96 h可見黏膜結(jié)構(gòu)明顯破壞,絨毛壞死,嚴重水腫和炎癥細胞浸潤。結(jié)論血漿PCT和CRP水平能反映腸梗阻存在狀態(tài)、腸黏膜受損程度,且檢測方法簡單,適于臨床推廣。

        〔關(guān)鍵詞〕腸梗阻;降鈣素原;C-反應(yīng)蛋白

        腸道對缺血缺氧比較敏感,當發(fā)生腸梗阻時,腸道屏障功能障礙、腸壁通透性增加,使存在于腸腔內(nèi)的細菌穿過腸壁進入血液,通過血液到達機體其他部位引起全身炎癥反應(yīng)綜合征,嚴重感染者甚至出現(xiàn)全身多器官功能障礙(MODS)〔1,2〕。已有研究顯示,降鈣素原(PCT)對全身細菌感染的診斷、鑒別診斷、治療效果及預(yù)后的判斷敏感,已廣泛應(yīng)用于ICU病房、腫瘤科、外科、內(nèi)科、急診科等臨床科室的炎癥鑒別診斷〔3〕。此外,C反應(yīng)蛋白(CRP)已被用于敗血癥、細菌性感染等疾病的診斷〔4〕。本實驗擬觀察腸梗阻黏膜屏障受損時PCT和CRP的變化。

        1材料和方法

        1.1實驗動物Wistar大鼠88只,體重300~350 g,購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司〔合格證號:SCXK(滬)2009-0005,清潔級〕。動物飼喂在實驗室(實驗室生物安全防護水平為 BSL-1)。實驗室溫度恒定(24±1)℃,相對濕度50%~70%,維持12 h光照節(jié)律,自由攝食、飲水。

        1.2動物分組和建模所有大鼠依據(jù)隨機數(shù)字表法分為對照組、假手術(shù)組和腸梗阻組,對照組8只,假手術(shù)組和腸梗阻組各40只,將假手術(shù)組和腸梗阻組大鼠再分為5個亞組,每組8只,分別于建模手術(shù)后8、24、48、72、96 h采集標本。大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w,實驗前12 h禁食。手術(shù)前用3.5%水合氯醛10 ml/kg進行腹腔麻醉,麻醉成功后固定大鼠于鼠板上,手術(shù)區(qū)域備皮,碘伏消毒。對照組大鼠麻醉后不進行建模手術(shù),供采集標本用。腸梗阻組大鼠在腹中線下1/3處剪開皮膚,充分暴露回盲部,在回盲瓣處用絲線結(jié)扎末端回腸,逐層縫合腹壁。假手術(shù)組大鼠麻醉后,按上述手術(shù)方法同樣操作,但不用絲線結(jié)扎。手術(shù)結(jié)束后,將大鼠放回籠中。

        1.3標本采集對照組大鼠麻醉后即行開腹手術(shù),分離出回腸及腹主動脈,用無菌注射劑采集腹主動脈血約4 ml,注入乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中備用,于結(jié)扎部位上端約2 cm處剪取回腸,生理鹽水反復(fù)沖洗腸腔,濾紙吸干后置于10%的甲醛中固定,采集標本完畢后,頸椎脫臼法處死大鼠。假手術(shù)組和腸梗阻組大鼠于建模手術(shù)后8、24、48、72、96 h再次麻醉并按同樣方法采集血液和回腸標本。

        1.4觀察指標及檢測方法(1)PCT及CRP檢測方法:經(jīng)腹主動脈采血4 ml,置于EDTA抗凝管中室溫靜置0.5~1 h,3 000 r/min離心5 min取血清,置于-80℃保存,待全部標本采集完畢后統(tǒng)一檢測。PCT及CRP均采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定,試劑盒購自美國R&D公司,操作嚴格按照試劑盒進行。(2)回腸組織病理學檢查:手術(shù)取出的回腸組織經(jīng)10%甲醛固定48 h后,清水沖洗,經(jīng)脫水和透明后,石蠟包埋,切片,切片脫蠟后用蘇木精-伊紅(HE)染色,顯微鏡下觀察組織病理學改變。

        1.5統(tǒng)計學方法應(yīng)用SPSS17.0軟件,計量資料比較采用t檢驗、方差分析、SNK法。

        2結(jié)果

        2.1大鼠血清PCT水平假手術(shù)組PCT水平在8 h、24 h明顯高于對照組,且逐漸升高,48 h、72 h、96 h逐漸下降,假手術(shù)組各時間點PCT水平差異顯著(F=21.384,P=0.000);腸梗阻組PCT水平在各時間點均明顯高于對照組,并逐漸增加,到實驗結(jié)束時達到高峰,腸梗阻組各時間點PCT水平差異顯著(F=22.187,P=0.000)。不同時間點各組間差異有統(tǒng)計學意義(均P<0.05),8 h和24 h假手術(shù)組與腸梗阻組差異無統(tǒng)計學意義(均P>0.05),48 h、72 h和96 h腸梗阻組PCT水平顯著高于假手術(shù)組(均P<0.05)。見表1。

        2.2大鼠血清CRP水平假手術(shù)組CRP水平在8 h、24 h明顯高于對照組,且逐漸升高,48 h、72 h、96 h逐漸下降,實驗結(jié)束時已接近正常水平(P>0.05),假手術(shù)組各時間點CRP水平差異顯著(F=16.254,P=0.000);腸梗阻組PCT水平從8 h即升高,并逐漸增加,到實驗結(jié)束時達到高峰,腸梗阻組各時間點CRP水平差異顯著(F=19.276,P=0.000)。不同時間點各組間差異有統(tǒng)計學意義(均P<0.05),8 h和24 h腸梗阻組與假手術(shù)組差異無統(tǒng)計學意義(均P>0.05),48 h、72 h和96 h腸梗阻組CRP水平顯著高于假手術(shù)組(均P<0.05)。見表1。

        2.3大鼠回腸組織病理學觀察對照組大鼠腸壁黏膜結(jié)構(gòu)正常,腸絨毛排列整齊,無毛細血管擴張及出血;假手術(shù)組術(shù)后8、24 h可見回腸黏膜萎縮,腸絨毛排列尚整齊,偶見黏膜下層輕度水腫和毛細血管擴張,有少量炎癥細胞浸潤,但術(shù)后48、72、96 h病理學變化與對照組無明顯差異;腸梗阻組術(shù)后8、24 h病理改變同假手術(shù)組,術(shù)后48 h,回腸黏膜變薄,腸絨毛排列不整齊,偶見絨毛斷裂、倒伏,黏膜下層水腫及炎癥細胞浸潤,術(shù)后72、96 h,黏膜結(jié)構(gòu)明顯破壞,腸絨毛排列不整齊,大部分絨毛斷裂、倒伏,可見壞死絨毛,黏膜水腫嚴重并伴炎癥細胞浸潤。

        表1 各組大鼠不同時間PCT、CRP水平比較

        與對照組比較:1)P<0.05,與假手術(shù)組比較:2)P<0.05

        3討論

        PCT是降鈣素(CT)前肽物質(zhì),是一種由116個氨基酸組成的糖蛋白。PCT的來源尚未明確,猜測產(chǎn)生的主要部位是肝臟。健康人血清中PCT含量極低,在細菌脂多糖的誘導下,PCT可釋放入血,3~4 h開始升高,6 h后急劇上升,24 h前不會被降解為CT,且不受體內(nèi)激素及臨床用藥的影響,能夠較長時間地維持在一個相對穩(wěn)定的水平〔5〕。研究表明PCT是維持和擴大炎癥的重要介質(zhì)之一〔6〕。CRP是組織損傷、感染性疾病及炎癥反應(yīng)的指標之一〔7〕。當發(fā)生急性腸梗阻時,受累腸段的血管內(nèi)皮細胞、吞噬細胞及單核-巨噬細胞系統(tǒng)產(chǎn)生介質(zhì)經(jīng)靜脈進入肝臟,誘導肝臟產(chǎn)生大量的CRP入血。這個機制的產(chǎn)生較其他部位產(chǎn)生的介質(zhì)刺激肝臟更早且更有效。

        本研究結(jié)果顯示,手術(shù)作為一種有創(chuàng)性治療方式,術(shù)后初期造成了動物的應(yīng)激反應(yīng),導致腸道缺血,腸道屏障功能障礙,引起細菌移位,而移位的細菌和細菌內(nèi)毒素可顯著誘導PCT水平和CRP水平升高〔8〕;但術(shù)后48~96 h PCT和CRP水平逐漸下降,可能是未結(jié)扎假手術(shù)組大鼠,開腹后僅出現(xiàn)一過性的應(yīng)激反應(yīng)導致PCT和CRP水平上升,待應(yīng)激消失后,腸道功能恢復(fù)正常,釋放入血的PCT和CRP逐漸被代謝而得不到補充,進而出現(xiàn)下降的趨勢。組織病理學觀察也證實假手術(shù)組在術(shù)后72 h和96 h腸壁結(jié)構(gòu)已基本恢復(fù)至正常。腸梗阻組PCT水平和CRP水平呈現(xiàn)連續(xù)上升趨勢,提示手術(shù)造成腸梗阻后,黏膜功能持續(xù)受損,并逐漸加重。由于損傷的持續(xù)存在,感染也隨之加重,因此腸梗阻組PCT水平和CRP水平持續(xù)升高。因此,大鼠腸壁組織病理學改變與血漿PCT水平和CRP水平有一定相關(guān)性。然而臨床實踐中,不可能通過病理切片來判斷腸黏膜的損傷程度,PCT和CRP水平能反映腸道黏膜受損的程度,可為臨床判斷提供依據(jù)。

        4參考文獻

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        8Firat U,Senol S,Gelincik I,etal.The effects of caffeic acid phenethyl ester(CAPE)on bacterial translocation and inflammatory response in an experimental intestinal obstruction model in rats〔J〕.Eur Rev Med Pharmacol Sci,2015;19(10):1907-14.

        〔2015-09-12修回〕

        (編輯袁左鳴)

        〔中圖分類號〕R57

        〔文獻標識碼〕A

        〔文章編號〕1005-9202(2016)12-2875-02;

        doi:10.3969/j.issn.1005-9202.2016.12.022

        1西安交通大學附屬陜西省腫瘤醫(yī)院腫瘤婦科

        第一作者:吳亮(1974-),男,副主任醫(yī)師,主要從事普通外科方面的研究。

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