吳 亮 張 靖
(海西州人民醫(yī)院普通外科,青海 德令哈 817000)
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急性腸梗阻大鼠血漿降鈣素原及C反應(yīng)蛋白水平的動(dòng)態(tài)變化及臨床意義
吳亮張靖1
(海西州人民醫(yī)院普通外科,青海德令哈817000)
〔摘要〕目的探討急性腸梗阻大鼠血漿降鈣素原(PCT)及C反應(yīng)蛋白(CRP)水平的動(dòng)態(tài)變化及臨床意義。方法將88只Wistar大鼠分為對(duì)照組(n=8)、假手術(shù)組(n=40)和腸梗阻組(n=40),對(duì)照組大鼠采集標(biāo)本后處死,腸梗阻組行開(kāi)腹手術(shù)結(jié)扎回腸末端,假手術(shù)組僅行開(kāi)腹手術(shù),假手術(shù)組和腸梗阻組于手術(shù)后8、24、48、72、96 h采集血液和結(jié)扎上端回腸部位,檢測(cè)各組不同時(shí)間血漿PCT、CRP水平,并觀察回腸組織病理學(xué)改變。結(jié)果假手術(shù)組PCT、CRP水平在8 h、24 h明顯高于對(duì)照組,且逐漸升高,48、72、96 h逐漸下降,CRP在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)已接近正常水平(P>0.05);腸梗阻組PCT、CRP水平在各時(shí)間點(diǎn)均明顯高于對(duì)照組,并逐漸增加,到實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)達(dá)到高峰,8 h和24 h假手術(shù)組與腸梗阻組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P>0.05),48 h、72 h和96 h腸梗阻組PCT、CRP水平顯著高于假手術(shù)組(均P>0.05);組織病理學(xué)檢查對(duì)照組大鼠腸壁黏膜結(jié)構(gòu)正常,假手術(shù)組可見(jiàn)輕度病理改變,腸梗阻組隨時(shí)間推移病理改變加深,腸梗阻96 h可見(jiàn)黏膜結(jié)構(gòu)明顯破壞,絨毛壞死,嚴(yán)重水腫和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。結(jié)論血漿PCT和CRP水平能反映腸梗阻存在狀態(tài)、腸黏膜受損程度,且檢測(cè)方法簡(jiǎn)單,適于臨床推廣。
〔關(guān)鍵詞〕腸梗阻;降鈣素原;C-反應(yīng)蛋白
腸道對(duì)缺血缺氧比較敏感,當(dāng)發(fā)生腸梗阻時(shí),腸道屏障功能障礙、腸壁通透性增加,使存在于腸腔內(nèi)的細(xì)菌穿過(guò)腸壁進(jìn)入血液,通過(guò)血液到達(dá)機(jī)體其他部位引起全身炎癥反應(yīng)綜合征,嚴(yán)重感染者甚至出現(xiàn)全身多器官功能障礙(MODS)〔1,2〕。已有研究顯示,降鈣素原(PCT)對(duì)全身細(xì)菌感染的診斷、鑒別診斷、治療效果及預(yù)后的判斷敏感,已廣泛應(yīng)用于ICU病房、腫瘤科、外科、內(nèi)科、急診科等臨床科室的炎癥鑒別診斷〔3〕。此外,C反應(yīng)蛋白(CRP)已被用于敗血癥、細(xì)菌性感染等疾病的診斷〔4〕。本實(shí)驗(yàn)擬觀察腸梗阻黏膜屏障受損時(shí)PCT和CRP的變化。
1材料和方法
1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠88只,體重300~350 g,購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司〔合格證號(hào):SCXK(滬)2009-0005,清潔級(jí)〕。動(dòng)物飼喂在實(shí)驗(yàn)室(實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)水平為 BSL-1)。實(shí)驗(yàn)室溫度恒定(24±1)℃,相對(duì)濕度50%~70%,維持12 h光照節(jié)律,自由攝食、飲水。
1.2動(dòng)物分組和建模所有大鼠依據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組、假手術(shù)組和腸梗阻組,對(duì)照組8只,假手術(shù)組和腸梗阻組各40只,將假手術(shù)組和腸梗阻組大鼠再分為5個(gè)亞組,每組8只,分別于建模手術(shù)后8、24、48、72、96 h采集標(biāo)本。大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w,實(shí)驗(yàn)前12 h禁食。手術(shù)前用3.5%水合氯醛10 ml/kg進(jìn)行腹腔麻醉,麻醉成功后固定大鼠于鼠板上,手術(shù)區(qū)域備皮,碘伏消毒。對(duì)照組大鼠麻醉后不進(jìn)行建模手術(shù),供采集標(biāo)本用。腸梗阻組大鼠在腹中線下1/3處剪開(kāi)皮膚,充分暴露回盲部,在回盲瓣處用絲線結(jié)扎末端回腸,逐層縫合腹壁。假手術(shù)組大鼠麻醉后,按上述手術(shù)方法同樣操作,但不用絲線結(jié)扎。手術(shù)結(jié)束后,將大鼠放回籠中。
1.3標(biāo)本采集對(duì)照組大鼠麻醉后即行開(kāi)腹手術(shù),分離出回腸及腹主動(dòng)脈,用無(wú)菌注射劑采集腹主動(dòng)脈血約4 ml,注入乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中備用,于結(jié)扎部位上端約2 cm處剪取回腸,生理鹽水反復(fù)沖洗腸腔,濾紙吸干后置于10%的甲醛中固定,采集標(biāo)本完畢后,頸椎脫臼法處死大鼠。假手術(shù)組和腸梗阻組大鼠于建模手術(shù)后8、24、48、72、96 h再次麻醉并按同樣方法采集血液和回腸標(biāo)本。
1.4觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法(1)PCT及CRP檢測(cè)方法:經(jīng)腹主動(dòng)脈采血4 ml,置于EDTA抗凝管中室溫靜置0.5~1 h,3 000 r/min離心5 min取血清,置于-80℃保存,待全部標(biāo)本采集完畢后統(tǒng)一檢測(cè)。PCT及CRP均采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定,試劑盒購(gòu)自美國(guó)R&D公司,操作嚴(yán)格按照試劑盒進(jìn)行。(2)回腸組織病理學(xué)檢查:手術(shù)取出的回腸組織經(jīng)10%甲醛固定48 h后,清水沖洗,經(jīng)脫水和透明后,石蠟包埋,切片,切片脫蠟后用蘇木精-伊紅(HE)染色,顯微鏡下觀察組織病理學(xué)改變。
1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS17.0軟件,計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)、方差分析、SNK法。
2結(jié)果
2.1大鼠血清PCT水平假手術(shù)組PCT水平在8 h、24 h明顯高于對(duì)照組,且逐漸升高,48 h、72 h、96 h逐漸下降,假手術(shù)組各時(shí)間點(diǎn)PCT水平差異顯著(F=21.384,P=0.000);腸梗阻組PCT水平在各時(shí)間點(diǎn)均明顯高于對(duì)照組,并逐漸增加,到實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)達(dá)到高峰,腸梗阻組各時(shí)間點(diǎn)PCT水平差異顯著(F=22.187,P=0.000)。不同時(shí)間點(diǎn)各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05),8 h和24 h假手術(shù)組與腸梗阻組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05),48 h、72 h和96 h腸梗阻組PCT水平顯著高于假手術(shù)組(均P<0.05)。見(jiàn)表1。
2.2大鼠血清CRP水平假手術(shù)組CRP水平在8 h、24 h明顯高于對(duì)照組,且逐漸升高,48 h、72 h、96 h逐漸下降,實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)已接近正常水平(P>0.05),假手術(shù)組各時(shí)間點(diǎn)CRP水平差異顯著(F=16.254,P=0.000);腸梗阻組PCT水平從8 h即升高,并逐漸增加,到實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)達(dá)到高峰,腸梗阻組各時(shí)間點(diǎn)CRP水平差異顯著(F=19.276,P=0.000)。不同時(shí)間點(diǎn)各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05),8 h和24 h腸梗阻組與假手術(shù)組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05),48 h、72 h和96 h腸梗阻組CRP水平顯著高于假手術(shù)組(均P<0.05)。見(jiàn)表1。
2.3大鼠回腸組織病理學(xué)觀察對(duì)照組大鼠腸壁黏膜結(jié)構(gòu)正常,腸絨毛排列整齊,無(wú)毛細(xì)血管擴(kuò)張及出血;假手術(shù)組術(shù)后8、24 h可見(jiàn)回腸黏膜萎縮,腸絨毛排列尚整齊,偶見(jiàn)黏膜下層輕度水腫和毛細(xì)血管擴(kuò)張,有少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),但術(shù)后48、72、96 h病理學(xué)變化與對(duì)照組無(wú)明顯差異;腸梗阻組術(shù)后8、24 h病理改變同假手術(shù)組,術(shù)后48 h,回腸黏膜變薄,腸絨毛排列不整齊,偶見(jiàn)絨毛斷裂、倒伏,黏膜下層水腫及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),術(shù)后72、96 h,黏膜結(jié)構(gòu)明顯破壞,腸絨毛排列不整齊,大部分絨毛斷裂、倒伏,可見(jiàn)壞死絨毛,黏膜水腫嚴(yán)重并伴炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。
表1 各組大鼠不同時(shí)間PCT、CRP水平比較
與對(duì)照組比較:1)P<0.05,與假手術(shù)組比較:2)P<0.05
3討論
PCT是降鈣素(CT)前肽物質(zhì),是一種由116個(gè)氨基酸組成的糖蛋白。PCT的來(lái)源尚未明確,猜測(cè)產(chǎn)生的主要部位是肝臟。健康人血清中PCT含量極低,在細(xì)菌脂多糖的誘導(dǎo)下,PCT可釋放入血,3~4 h開(kāi)始升高,6 h后急劇上升,24 h前不會(huì)被降解為CT,且不受體內(nèi)激素及臨床用藥的影響,能夠較長(zhǎng)時(shí)間地維持在一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的水平〔5〕。研究表明PCT是維持和擴(kuò)大炎癥的重要介質(zhì)之一〔6〕。CRP是組織損傷、感染性疾病及炎癥反應(yīng)的指標(biāo)之一〔7〕。當(dāng)發(fā)生急性腸梗阻時(shí),受累腸段的血管內(nèi)皮細(xì)胞、吞噬細(xì)胞及單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)產(chǎn)生介質(zhì)經(jīng)靜脈進(jìn)入肝臟,誘導(dǎo)肝臟產(chǎn)生大量的CRP入血。這個(gè)機(jī)制的產(chǎn)生較其他部位產(chǎn)生的介質(zhì)刺激肝臟更早且更有效。
本研究結(jié)果顯示,手術(shù)作為一種有創(chuàng)性治療方式,術(shù)后初期造成了動(dòng)物的應(yīng)激反應(yīng),導(dǎo)致腸道缺血,腸道屏障功能障礙,引起細(xì)菌移位,而移位的細(xì)菌和細(xì)菌內(nèi)毒素可顯著誘導(dǎo)PCT水平和CRP水平升高〔8〕;但術(shù)后48~96 h PCT和CRP水平逐漸下降,可能是未結(jié)扎假手術(shù)組大鼠,開(kāi)腹后僅出現(xiàn)一過(guò)性的應(yīng)激反應(yīng)導(dǎo)致PCT和CRP水平上升,待應(yīng)激消失后,腸道功能恢復(fù)正常,釋放入血的PCT和CRP逐漸被代謝而得不到補(bǔ)充,進(jìn)而出現(xiàn)下降的趨勢(shì)。組織病理學(xué)觀察也證實(shí)假手術(shù)組在術(shù)后72 h和96 h腸壁結(jié)構(gòu)已基本恢復(fù)至正常。腸梗阻組PCT水平和CRP水平呈現(xiàn)連續(xù)上升趨勢(shì),提示手術(shù)造成腸梗阻后,黏膜功能持續(xù)受損,并逐漸加重。由于損傷的持續(xù)存在,感染也隨之加重,因此腸梗阻組PCT水平和CRP水平持續(xù)升高。因此,大鼠腸壁組織病理學(xué)改變與血漿PCT水平和CRP水平有一定相關(guān)性。然而臨床實(shí)踐中,不可能通過(guò)病理切片來(lái)判斷腸黏膜的損傷程度,PCT和CRP水平能反映腸道黏膜受損的程度,可為臨床判斷提供依據(jù)。
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〔2015-09-12修回〕
(編輯袁左鳴)
〔中圖分類(lèi)號(hào)〕R57
〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A
〔文章編號(hào)〕1005-9202(2016)12-2875-02;
doi:10.3969/j.issn.1005-9202.2016.12.022
1西安交通大學(xué)附屬陜西省腫瘤醫(yī)院腫瘤婦科
第一作者:吳亮(1974-),男,副主任醫(yī)師,主要從事普通外科方面的研究。