楊昌偉，鄭家深，李雪，吳雁，王攀

(遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科，貴州　遵義563003)

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不同稀釋液及稀釋倍數(shù)對(duì)β- HCG測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確性的影響

楊昌偉，鄭家深，李雪，吳雁，王攀

(遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科，貴州遵義563003)

摘要：目的探討臨床實(shí)際工作中不同稀釋液及稀釋倍數(shù)對(duì)β-HCG測(cè)定結(jié)果的影響。方法選用Roche E601電化學(xué)發(fā)光法：⑴不同稀釋液比較：選取廠家原裝稀釋液、自制陰性血清、生理鹽水、去離子水與已知高濃度的標(biāo)本血清，分別進(jìn)行倍比稀釋檢測(cè)，其結(jié)果與理論值進(jìn)行偏倚分析，確定最佳的稀釋液。⑵最佳稀釋倍數(shù)選擇：收集本院β-HCG>10000mIU/ml血清標(biāo)本150例，采用廠家原裝稀釋液、自制陰性血清分別進(jìn)行1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128倍稀釋后檢測(cè)，將檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析比較，確定最佳稀釋倍數(shù)。結(jié)果⑴用自制陰性血清稀釋后的檢測(cè)結(jié)果與原裝稀釋液稀釋后所得結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.952，P=0.927）；生理鹽水、去離子水稀釋后所得結(jié)果與原裝稀釋液稀釋后所得結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=22.131、19.415，P=0.000、0.000）。⑵對(duì)收集的高濃度150例血清標(biāo)本，選擇自制陰性血清稀釋，確立1:32倍為最佳稀釋倍數(shù)。其一次性檢出率為95%，并與原裝稀釋液稀釋檢測(cè)結(jié)果基本一致。結(jié)論對(duì)于β-HCG濃度過高的標(biāo)本，可以直接選用自制陰性血清作為替代稀釋液，稀釋倍數(shù)應(yīng)首選32倍。其結(jié)果的檢出率和準(zhǔn)確性均較高，同時(shí)節(jié)省了成本，值得臨床大力推廣。但其血清未經(jīng)滅活，存在潛在感染危險(xiǎn)，操作時(shí)多加強(qiáng)預(yù)防措施。

關(guān)鍵詞：電化學(xué)發(fā)光；β-HCG；稀釋液；稀釋倍數(shù)

在臨床實(shí)際工作中，β-HCG值常常濃度較高，超出檢測(cè)范圍得不到具體的濃度值，為臨床工作帶來極大不便，為了得到具體的結(jié)果，需要對(duì)標(biāo)本進(jìn)行多次稀釋，重復(fù)檢測(cè)[1，2]，這樣既耽誤就診時(shí)間還浪費(fèi)大量成本。同時(shí)，如果稀釋液和稀釋倍數(shù)選擇不當(dāng)，也會(huì)對(duì)結(jié)果的準(zhǔn)確性產(chǎn)生嚴(yán)重的影響，為了得到最佳的準(zhǔn)確結(jié)果和節(jié)省成本，本文采用廠家原裝稀釋液、陰性血清、生理鹽水、去離子水作為稀釋液，對(duì)已知高濃度β-HCG血清進(jìn)行稀釋測(cè)定，其結(jié)果報(bào)告如下。

1　材料與方法

1.1樣本來源本院就診患者2015年1月至2015 年10月β-HCG>10000mIU/ml血清標(biāo)本共150例，女，平均年齡24.5歲，均來自正常受孕婦女，排除其他甲狀腺、感染、婦科疾病。

1.2儀器與試劑β-HCG試劑校準(zhǔn)品及復(fù)合質(zhì)控物，廠家原裝β-HCG稀釋液，儀器和試劑均由羅氏公司提供。選取本實(shí)驗(yàn)室男性體檢標(biāo)本血清作為陰性血清（要求無溶血、黃疸、無脂血）；生理鹽水、去離子水自備。

1.3檢測(cè)方法將已知濃度為9350mIU/ml的β-HCG血清樣本分別用原裝稀釋液、陰性血清、生理鹽水、去離子水按（1：2、1：4、1：8、1：16、1：32、1：

64、1：128)稀釋，做雙份檢測(cè)求平均值。將收集的150例β-HCG>10000mIU/ml血清標(biāo)本同上方法稀釋后檢測(cè)，確定最佳稀釋倍數(shù)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 18.0，對(duì)正態(tài)計(jì)量資料采用以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，運(yùn)用單因素方差分析（One-way ANOVA），數(shù)據(jù)進(jìn)一步的兩兩比較采用LSD法，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為0.05；結(jié)果比較采用測(cè)定數(shù)據(jù)與其理論值之間比較其偏差程度(%)。

2　結(jié)果

2.1偏差計(jì)算分析已知濃度為9350mIU/ml的β-HCG血清樣本經(jīng)原裝稀釋液、陰性血清、生理鹽水、去離子水稀釋后檢測(cè)結(jié)果與理論值比較。對(duì)同一高值β-HCG用原裝稀釋液和陰性血清分別按不同比例稀釋檢測(cè)，測(cè)定值與理論值比較，偏差分別為0.38%～4.87%，0.78%～5.93%，檢測(cè)結(jié)果分別兩兩比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.952，P=0.927）；生理鹽水、去離子水稀釋后與理論值結(jié)果比較，其偏差分別為4.45%~29.75%，8.71%~26.55%。生理鹽水、去離子水稀釋后所得結(jié)果與原裝稀釋液稀釋后所得結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=22.131、19.415，P=0.000、0.000）。見表1。

2.2稀釋倍數(shù)選擇將150例β-HCG>10000mIU/ mL血清標(biāo)本分別用原裝稀釋液和陰性血清進(jìn)行1：2、1：4、1：8、1：16、1：32、1：64、1：128倍稀釋后檢測(cè)。能一次性檢測(cè)出實(shí)際結(jié)果的機(jī)率分別為（21%、39%、75%、90%、95%、98%、99%），結(jié)果的準(zhǔn)確性顯示稀釋倍數(shù)越低，檢測(cè)結(jié)果越靠近理論值，稀釋倍數(shù)越高，結(jié)果偏差越大，但1：32的稀釋倍數(shù)的檢出率和準(zhǔn)確性均較高。

表1　高值β-HCG經(jīng)不同稀釋液稀釋后檢測(cè)結(jié)果（±s，mIU/ml）

表1　高值β-HCG經(jīng)不同稀釋液稀釋后檢測(cè)結(jié)果（±s，mIU/ml）

稀釋倍數(shù)　1:2理論值原稀釋液陰性血清生理鹽水去離子水F值P值9350 4615±80.28 4601±78.11 4883±99.12 5082±111.19 307.191 0.000 1:4　1:8　1:16　1:32　偏倚（%）4675 2328±41.32 2319±64.52 2604±71.38 2691±75.11 190.709 0.000 2337.50 1173±43.25 1188±48.71 1349±60.33 1433±50.27 200.738 0.000 1168.75 592±33.12 603±35.28 744±55.19 739±60.18 211.387 0.000 584.38 306±21.71 309±18.33 379±30.15 363±43.17 254.333 0.000 292.18 0.38～4.87 0.78～5.93 4.45～29.75 8.71～26.55

3　討論

目前，人絨毛膜促性腺激素（Human chorionic gonadotropin，HCG）在臨床上主要用于早期妊娠、妊娠相關(guān)疾病及滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤等疾病診斷[3，4]。HCG由α、β兩個(gè)亞基組成，α亞單位與某些激素如TSH、LH、FSH具有相同的抗原性，在測(cè)定時(shí)易產(chǎn)生交叉反應(yīng)從而對(duì)HCG的測(cè)定造成一定的影響，β亞單位則有其特異性，所以臨床常以檢測(cè)β亞單位來作為HCG檢測(cè)[5]。化學(xué)發(fā)光法及電化學(xué)發(fā)光法是目前臨床上主要檢測(cè)HCG的方法，具有靈敏度高，特異性好，檢測(cè)線性寬等優(yōu)點(diǎn)。但在臨床常規(guī)檢測(cè)中，也經(jīng)常會(huì)遇到病人樣本β-HCG含量超出檢測(cè)范圍的情況，臨床得不到實(shí)際的準(zhǔn)確值。為提供一個(gè)真實(shí)、準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果，稀釋液及其最佳稀釋倍數(shù)的選擇顯得尤為重要。

由于廠家所提供的原裝稀釋液價(jià)格昂貴，檢測(cè)成本高，在國內(nèi)實(shí)際工作中使用生理鹽水、去離子水稀釋檢測(cè)的現(xiàn)象非常普遍，這樣嚴(yán)重影響檢測(cè)結(jié)果。本次研究結(jié)果顯示，原裝稀釋液和陰性血清分別按不同比例稀釋檢測(cè)，檢驗(yàn)結(jié)果與理論值比較接近，而生理鹽水稀釋后與理論值差異較大，與文獻(xiàn)報(bào)道相符[6]。其中可能的原因是生理鹽水的離子強(qiáng)度，pH值（5.9左右）與病人樣本及標(biāo)準(zhǔn)品差別較大，存在基質(zhì)效應(yīng)而導(dǎo)致結(jié)果偏差較大[7，8]，因而不能滿足免疫反應(yīng)的環(huán)境要求。去離子水pH6～7，但溶質(zhì)極低[9]，極大的改變了免疫反應(yīng)體系中的蛋白質(zhì)種類和離子強(qiáng)度，同樣不能作為稀釋液使用。但陳廣福等用磁分離酶聯(lián)免疫法檢測(cè)高濃度HCG標(biāo)本時(shí)，結(jié)論是除專用稀釋液外，生理鹽水是磁分離酶聯(lián)免疫法測(cè)定血清HCG的首選稀釋液[10]，這與本文結(jié)果不相符，具體原因有待進(jìn)一步探討。所以不同檢測(cè)項(xiàng)目用同一檢測(cè)方法或同一檢測(cè)項(xiàng)目用不同檢測(cè)方法選用稀釋液時(shí)，應(yīng)做類似試驗(yàn)加以確定。

自制陰性血清新鮮、無溶血、黃疸、脂血等，不會(huì)對(duì)免疫反應(yīng)的環(huán)境造成影響，其pH值、溶質(zhì)、蛋白質(zhì)種類、離子強(qiáng)度均滿足免疫反應(yīng)條件，靈敏度和準(zhǔn)確性均較高，可代替專用的原裝β-HCG稀釋液使用[11]。且制備來源、保存條件均方便，在-40℃冷凍保存至少可穩(wěn)定半年，置2～8℃普通冰箱保存2～3周，常溫下避光保存至少可穩(wěn)定5d[12]。稀釋倍數(shù)選擇，使用1：32稀釋倍數(shù)，一次性檢測(cè)出實(shí)際結(jié)果的幾率達(dá)95%，檢測(cè)結(jié)果與理論值比較非常接近。其不同稀釋倍數(shù)檢出能力與檢測(cè)準(zhǔn)確性變化的規(guī)律為稀釋倍數(shù)越低，準(zhǔn)確性越高，一次性檢出率越低；稀釋倍數(shù)越高，準(zhǔn)確性越低，而一次性檢出率越高。這可能是隨著稀釋倍數(shù)的增大，產(chǎn)生的誤差也越大所導(dǎo)致的結(jié)果，因此，在確立稀釋倍數(shù)的同時(shí)，既要考慮檢出結(jié)果的準(zhǔn)確性，還得顧及一次性檢出的幾率，從而降低檢測(cè)成本。

總之，使用自制陰性血清進(jìn)行高值β-HCG稀釋，既不影響結(jié)果的準(zhǔn)確性和靈敏度，同時(shí)選擇適當(dāng)稀釋倍數(shù)還可提高一次性的檢出率。且制備來源和保存條件均非常方便，同時(shí)節(jié)省了成本，值得臨床大力推廣。但其血清未經(jīng)滅活，存在潛在感染危險(xiǎn)，操作時(shí)應(yīng)加強(qiáng)預(yù)防措施。

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·檢驗(yàn)與臨床·

中圖分類號(hào)：R446.62

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1674-1129(2016)03-0347-02

DOI：10.3969/j.issn.1674-1129.2016.03.025

通信作者：王攀。

(收稿日期2016-03-07；修回日期2016-04-21)