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        類孟買型Ahm分泌型的血型鑒定及輸血

        2016-08-01 02:13:32應(yīng)盼
        關(guān)鍵詞:孟買唾液血型

        應(yīng)盼

        (浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院輸血科,浙江 杭州310009)

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        ·輸血與檢驗(yàn)·

        類孟買型Ahm分泌型的血型鑒定及輸血

        應(yīng)盼

        (浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院輸血科,浙江杭州310009)

        摘要:目的血清學(xué)和分子生物學(xué)鑒定類孟買型Ahm分泌型,為患者準(zhǔn)備手術(shù)用血。方法應(yīng)用常規(guī)血清學(xué)方法檢測患者紅細(xì)胞抗原及血清中的抗體,吸收放散試驗(yàn)鑒定紅細(xì)胞上弱表達(dá)的ABO抗原,測定唾液中的血型物質(zhì),進(jìn)行分子生物學(xué)測序分析。結(jié)果患者血型為罕見的類孟買型Ahm分泌型,血清中有抗-H抗體。結(jié)論鑒定出罕見類孟買型,血清中含有抗-H,其FUT1基因?yàn)榈?47~552位AG兩堿基缺失的純合態(tài),為最常見單體型。

        關(guān)鍵詞:類孟買型Ahm分泌型;抗-H;FUT1基因

        1952年Bhende發(fā)現(xiàn)孟買型(Bombay phenotype),1961年Levine發(fā)現(xiàn)類孟買型(para-Bombay phenotype),這兩種罕見表型的紅細(xì)胞上完全或部分缺失H抗原[1]。目前研究證實(shí)α-1,2巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶基因(FUT1)的突變是導(dǎo)致類孟買的主要原因[2]。筆者在本院入院病人中發(fā)現(xiàn)1例,并在血清學(xué)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上做基因測序分析,鑒定為類孟買型Ahm分泌型。

        1 材料與方法

        1.1樣本來源患者鮑某,女,70歲,無既往輸血史,臨床診斷為鼻腔腫瘤,擬手術(shù)治療,申請手術(shù)備血。入院后常規(guī)血型鑒定及備血,血型檢測時發(fā)現(xiàn)正反定型不符,正定型為A型,反定型與標(biāo)準(zhǔn)A、B、O型紅細(xì)胞均發(fā)生不同程度凝集,與自身紅細(xì)胞不凝集,抗體篩查陽性。重新收集其全血及唾液標(biāo)本進(jìn)一步檢測。

        1.2試劑和儀器單克隆抗-A、抗-B、抗-AB、抗-H、抗篩細(xì)胞、標(biāo)準(zhǔn)A、B、O型紅細(xì)胞(上海市血液生物醫(yī)藥有限公司),抗-Lea、抗-Leb(加拿大TITUS公司產(chǎn)品),微柱凝膠抗球蛋白卡(西班牙戴安娜公司生產(chǎn)),9700型PCR自動擴(kuò)增儀(PE公司)、純化試劑盒(QIAGEN公司)、ABI PRISM 377測序儀。

        1.3血型鑒定⑴正定型:取4支試管,各加入洗滌后的5%患者紅細(xì)胞懸液50μl;再分別各加入抗-A、抗-B、抗-AB、抗-H試劑50μl,離心觀察結(jié)果。⑵反定型:取4支試管各加入患者血清50μl,再分別各加入A、B、O細(xì)胞和自身細(xì)胞50μl,離心觀察結(jié)果。⑶Lewis血型:取2支試管,各加入洗滌后5%患者紅細(xì)胞懸液50μl,再分別加入單克隆抗-Lea、抗-Leb試劑50μl,離心觀察結(jié)果。

        1.4抗體篩選在微柱凝膠抗球蛋白卡中三孔分別加入患者血清50μl,和抗體篩選細(xì)胞(OⅠ~OⅢ)各50μl,37℃溫育15min,專用離心機(jī)離心10min取出觀察結(jié)果。

        1.5吸收放散試驗(yàn)取一定量患者壓積紅細(xì)胞洗滌4次后平均分成2份(每份1ml),分別加入等量抗-A、抗-B血清混合,經(jīng)冰箱4℃吸收1h,取出用冷鹽水洗滌4次,經(jīng)56℃10min熱放散,并保溫離心,吸取上層暗紅色放散液分別與A、B型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞反應(yīng)。

        1.6唾液中血型物質(zhì)測定把單克隆抗-A、抗-B、抗-H血清以4+的最高稀釋倍數(shù)分別稀釋備用,取患者煮沸處理后的唾液與稀釋過的抗血清作中和抑制試驗(yàn),檢測唾液中A、B、H血型物質(zhì)。

        1.7測序分析FUT1基因擴(kuò)增方法同文獻(xiàn)[3]的方法。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠上電泳30 min,紫外透射儀下顯示擴(kuò)增成功后,從凝膠上切取目的DNA片段,用QIA-quick gelextraction kit(德國Qiagen公司)試劑盒純化后直接用ABI PRISM 377測序儀進(jìn)行測序分析。

        2 結(jié)果

        2.1血型鑒定結(jié)果見表1。

        2.2抗體篩選患者血清與上海血液生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)的抗體篩選細(xì)胞(OⅠ~OⅢ)均呈陽性(2+)反應(yīng)。經(jīng)抗-A血清吸收后的紅細(xì)胞釋放液與標(biāo)準(zhǔn)A細(xì)胞呈凝集反應(yīng),經(jīng)抗-B血清吸收后的紅細(xì)胞釋放液與標(biāo)準(zhǔn)B細(xì)胞無凝集,結(jié)果證實(shí)患者紅細(xì)胞上含有A抗原。唾液中檢出A、H物質(zhì),未檢出B物質(zhì),結(jié)果證實(shí)患者為A分泌型。

        2.3測序結(jié)果患者ABO基因第6外顯子第261位為G/del雜合,第7外顯子第297位A/A純合、第467位C/T雜合、第526位C/C純合、第657位C/C純合、第703位G/G純合、第796位C/C純合、第803位G/G純合、第930位G/G純合,表明ABO基因型為A102/O01?;颊邷y序發(fā)現(xiàn)FUT1基因第547~552位兩堿基(AG)缺失純合態(tài),見圖1。

        表1 ABO、H、Lewis血型鑒定結(jié)果

        圖1 正常對照和類孟買型Ahm分泌型的FUT1基因序列圖

        3 討論

        類孟買血型是一種罕見的紅細(xì)胞血型表型,其主要特征是紅細(xì)胞表面H抗原部分或完全缺失,而分泌液中存在H物質(zhì)?;颊咭蛘炊ㄐ筒灰恢伦鬟M(jìn)一步檢測時發(fā)現(xiàn)其紅細(xì)胞與抗-H血清反應(yīng)陰性,但紅細(xì)胞吸收釋放試驗(yàn)中能釋放A抗原,唾液中分泌A、H物質(zhì),證實(shí)患者的ABO血型為Ahm分泌型,但紅細(xì)胞上缺乏H抗原。

        分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中患者ABO基因第6、7外顯子的測序結(jié)果也證實(shí)含有A基因。文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)類孟買型的Lewis血型通常為Le (a-b+),該患者的Lewis血型也為Le(a-b+)。根據(jù)Race分類患者血型可命名為Ahm[4]?;颊逨UT1編碼序列測序結(jié)果顯示:α-1,2巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶基因第547~552處的兩個核苷酸AG缺失(CAGAGAG→CAGAG),導(dǎo)致閱讀框架發(fā)生移碼,提前形成終止密碼。本例患者的突變?yōu)轭惷腺I型的常見突變[5],也與中國香港和臺灣等地的報(bào)道完全一致[6,7]。

        從輸血安全出發(fā),為避免誤檢、漏檢,筆者認(rèn)為凡是手工血型鑒定時一定要嚴(yán)格執(zhí)行臨床輸血技術(shù)規(guī)范,ABO正、反定型??ㄊ蕉ㄑ蜁r,因血型卡中沒有O細(xì)胞孔,應(yīng)同時進(jìn)行抗體篩選。在交叉配血時,應(yīng)警惕除冷抗體外是否存在ABO以外IgM性質(zhì)的血型抗體。通過此次血型鑒定,臨床輸血科實(shí)驗(yàn)室配備抗-H血清試劑以備疑難血型鑒定之需,筆者認(rèn)為是非常有必要的,不僅有利于ABO亞型鑒定[8,9],也有利于發(fā)現(xiàn)罕見的類孟買血型。

        該患者經(jīng)血清學(xué)和分子生物學(xué)鑒定為類孟買血型后,只有ABO同型的類孟買血液才能交叉配合并輸注,特向省血液中心成功預(yù)約到冰凍庫內(nèi)的A類孟買型血液,確保了手術(shù)的成功。但由于類孟買血型十分罕見,很難找到相同類孟買血型供者,筆者認(rèn)為對于擇期手術(shù)類孟買血型患者如果無法找到相同H抗原缺乏血型血液時,應(yīng)根據(jù)患者的臨床狀況盡量采用貯存式及稀釋式自體輸血。此類患者在無法找到相同H抗原缺乏血型之血液時又需緊急輸血,應(yīng)根據(jù)患者抗-A、抗-B、抗-H的實(shí)際情況,選擇37℃與患者血清反應(yīng)最弱的ABO血型同型血液進(jìn)行輸血治療[10]。

        參考文獻(xiàn)

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        [4]陳忠,張莉尼.孟買型與類孟買型—附國內(nèi)文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[J].中國輸血雜志,1991,4(3):154.

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        [8]葛云萍.患者血型初檢錯誤原因分析及對策[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2013,31(3):274.

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        [10]孫云,閆芳,范道旺,等. 1例類孟買血型的鑒定和家系調(diào)查及輸血[J].中國輸血雜志,2006,19(6):491-493.

        中圖分類號:R457.1+1,R446.62

        文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A

        文章編號:1674-1129(2016)03-0391-02

        DOI:10.3969/j.issn.1674-1129.2016.03.044

        (收稿日期2016-03-09;修回日期2016-04-17)

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