鄧曉鴻,強(qiáng)敏,朱新生,王韋崗(鎮(zhèn)江市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心,江蘇鎮(zhèn)江212132)
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食品中致病微生物檢測(cè)結(jié)果的不確定度評(píng)定
鄧曉鴻,強(qiáng)敏,朱新生,王韋崗
(鎮(zhèn)江市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心,江蘇鎮(zhèn)江212132)
摘要:了解本地區(qū)抽查的速凍面米制品的微生物指標(biāo)狀況,并探討金黃色葡萄球菌的定量檢測(cè)的數(shù)值結(jié)果的不確定度評(píng)定方法。按照國(guó)標(biāo)法GB 4789.1-2010《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)總則》、GB 4789.4-2010《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)》、GB4789.10-2010《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)》和GB 19295-2011《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)速凍面米制品》進(jìn)行抽樣和檢測(cè),依據(jù)JJF1059.1-2012《測(cè)定不確定度評(píng)定與表示》,泊松分布及相關(guān)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)檢測(cè)結(jié)果數(shù)字不確定度進(jìn)行評(píng)定。抽檢的142批次速凍面米制品,兩種制品抽檢合格率都為100%,得出的兩份樣品檢測(cè)結(jié)果平均數(shù)分別為290 CFU/g和20 CFU/g,相對(duì)應(yīng)該的標(biāo)準(zhǔn)不確定度分別為30 CFU/g和4 CFU/g。本文采用的評(píng)定方法,可以對(duì)面米制品金黃菌定量檢測(cè)結(jié)果平均數(shù)不確定度作出估計(jì),用于速凍面米制品的安全評(píng)估。
關(guān)鍵詞:速凍面米制品;金黃色葡萄球菌;不確定度
速凍面米制品以小麥粉、大米、雜糧等谷物為主要原料,或同時(shí)配以肉、禽、蛋、水產(chǎn)品、蔬菜、果料、糖、油、調(diào)味品等單一或多種配料為餡料,經(jīng)加工成型(或熟制),速凍而成的食品。它包括生制品(即產(chǎn)品凍結(jié)前未經(jīng)加熱成熟的制品)和熟制品(即產(chǎn)品凍結(jié)前經(jīng)加熱成熟的非即食制品[1]。
根據(jù)我國(guó)速凍面米制品產(chǎn)業(yè)發(fā)展和居民消費(fèi)的特點(diǎn),GB 19295-2011《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)速凍面米制品》的范圍包括了餃子、餛飩、包子、粽子、湯圓等速凍預(yù)包裝食品。隨著年底的臨近,各種速凍食品即將也將大量生產(chǎn),有的企業(yè)很早就準(zhǔn)備,由于管理不到位,及擺放時(shí)間過(guò)長(zhǎng),及擺放環(huán)境的因素,各種食品受到污染的情況,層出不窮。
金黃色葡萄球菌廣泛分布于環(huán)境中,人和動(dòng)物是主要攜帶者,通常存在于50%或更多健康人群的鼻腔、咽喉、頭發(fā)和表皮中,對(duì)熱敏感,一般烹飪煮熟即可殺滅。金黃色葡萄球菌食物中毒主要是由其產(chǎn)生的致病性腸毒素導(dǎo)致的,通常在數(shù)量大于105 CFU/g時(shí)可能產(chǎn)生致病性腸毒素,引起食物中毒[2]。
2011年12月21日速凍面米制品食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施以來(lái)微生物指標(biāo)是GB 19295-2011《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)速凍面米制品》的重要內(nèi)容,分為致病性微生物和指示菌。根據(jù)速凍面米制品檢驗(yàn)和監(jiān)測(cè)情況,借鑒國(guó)際組織和相關(guān)國(guó)家管理規(guī)定,GB 19295-2011《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)速凍面米制品》采用了國(guó)際食品微生物標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)采樣原則[3-4]。
1.1材料
1.1.1樣品來(lái)源
累計(jì)2013~2014兩年4次監(jiān)督抽查共142批次速凍面米制品,其中生制品Y188批次,熟制品Y254批次,所有制品中包括水餃,湯圓和速凍包子等類型。
1.1.2培養(yǎng)基
BP計(jì)數(shù)瓊脂:由杭州微生物試劑有限公司提供,按照說(shuō)明配制;腦心浸出液肉湯(BHI)、兔血漿、營(yíng)養(yǎng)瓊脂小斜面:由紹興天恒生物技術(shù)有限公司提供;生理鹽水緩沖液由鎮(zhèn)江產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心微生物制配。
1.1.3儀器
BILON-08比朗均質(zhì)器:上海比朗儀器公司;Brand移液器:大龍興創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器(北京)有限公司。
1.1.4微生物限量
速凍面米制品在-18℃以下保存時(shí),不利于金黃色葡萄球菌繁殖和產(chǎn)生腸毒素。國(guó)際食品微生物標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)根據(jù)致病菌及其致病風(fēng)險(xiǎn),將金黃色葡萄球菌列為一般性危害致病菌,通常采用三級(jí)采樣方案。三級(jí)采樣方案具體意義是:規(guī)定同一批次產(chǎn)品采樣數(shù)(n)、微生物指標(biāo)可接受水平的限量值(m)、最大可允許超出m值的樣品數(shù)(c)、微生物指標(biāo)的最高安全限量值(M)[3]。
根據(jù)GB19295-2011《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)速凍面米制品》要求,生制品微生物限量見(jiàn)表1。
表1 生制品的微生物的限量Table 1 Microbial limit of raw products
由表1可知:新標(biāo)準(zhǔn)采用了三級(jí)采樣方案,用多個(gè)樣品定量檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行綜合判定,具體規(guī)定為:生制速凍預(yù)包裝面米制品中金黃色葡萄球菌限量為(n=5,c=1,m=103CFU/g,M=104CFU/g)。
根據(jù)GB19295-2011《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)速凍面米制品》要求,熟制品微生物限量見(jiàn)表2。
表2 熟制品的微生物的限量Table 2 Microbial limit of cooked products
由表2可知:熟制速凍預(yù)包裝面米制品金黃色葡萄球菌為(n=5,c=1,m=100 CFU/g,M=1 000 CFU/g),即在同一批次采5個(gè)樣品,允許全部樣品檢驗(yàn)值小于或等于100CFU/g,允許1個(gè)樣品檢驗(yàn)值在100CFU/g至1000CFU/g之間;不允許有樣品檢驗(yàn)值大于103CFU/g;不允許2個(gè)及以上樣品檢測(cè)值大于100 CFU/g。
1.2方法
1.2.1金黃色葡萄菌定量檢測(cè)法的基本步驟[2]
檢樣按照GB4789.10-2010《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)》第二法Baird-Parker平板記數(shù)法進(jìn)行。每稀釋度按0.3、0.3、0.4 mL 做3塊平板,選擇同一稀釋度3個(gè)平板所有菌落數(shù)在20CFU~200CFU的平板,計(jì)典型菌落數(shù)和典型菌落確認(rèn)試驗(yàn),Baird-Parker平板記數(shù)法檢測(cè)的基本程序見(jiàn)圖1。
圖1 金黃色葡萄球菌Baird-Parker平板法檢驗(yàn)程序Fig.1 Staphylococcus aureus Baird-Parker tablet test procedures
1.2.2數(shù)學(xué)模型的建立及金黃色葡萄菌落總數(shù)計(jì)算方法[3]
1)只有一個(gè)稀釋度平板的菌落數(shù)在20CFU~200CFU之間且有典型菌落,計(jì)數(shù)該稀釋度平板上的典型菌落;
2)最低稀釋度平板的菌落數(shù)小于20 CFU且有典型菌落,計(jì)數(shù)該稀釋度平板上的典型菌落;
3)某一稀釋度平板的菌落數(shù)大于200 CFU且有典型菌落,但下一稀釋度平板上沒(méi)有典型菌落,應(yīng)計(jì)數(shù)該稀釋度平板上的典型菌落;
4)某一稀釋度平板的菌落數(shù)大于200 CFU且有典型菌落,且下一稀釋度平板上有典型菌落,但其平板上的菌落數(shù)不在20 CFU~200 CFU之間,應(yīng)計(jì)數(shù)該稀釋度平板上的典型菌落;
以上按公式(1)計(jì)算。
公式(1):
式中:T為樣品中金黃色葡萄球菌菌落數(shù);A為某一稀釋度典型菌落的總數(shù);B為某一稀釋度血漿凝固酶陽(yáng)性的菌落數(shù);C為某一稀釋度用于血漿凝固酶試驗(yàn)的菌落數(shù);D為稀釋因子。
5)2個(gè)連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)均在20 CFU~ 200 CFU之間,按公式(2)計(jì)算。
式中:T為樣品中金黃色葡萄球菌菌落數(shù);A1為第一稀釋度(低稀釋倍數(shù))典型菌落的總數(shù);A2為第二稀釋度(高稀釋倍數(shù))典型菌落的總數(shù);B1為第一稀釋度(低稀釋倍數(shù))血漿凝固酶陽(yáng)性的菌落數(shù);B2為第二稀釋度(高稀釋倍數(shù))血漿凝固酶陽(yáng)性的菌落數(shù);C1為第一稀釋度(低稀釋倍數(shù))用于血漿凝固酶試驗(yàn)的菌落數(shù);C2為第二稀釋度(高稀釋倍數(shù))用于血漿凝固酶試驗(yàn)的菌落數(shù);1.1為計(jì)算系數(shù);d為稀釋因子(第一稀釋度)。
1.2.3金黃色葡萄球定量檢測(cè)結(jié)果的不確定度來(lái)源
1)基質(zhì)及培養(yǎng)條件[標(biāo)準(zhǔn)菌種,培養(yǎng)基質(zhì)量及培養(yǎng)箱參數(shù)(培養(yǎng)時(shí)間,溫度)]。
2)取樣操作(樣品取樣均勻,溶解均質(zhì),樣品的逐級(jí)稀釋)。
3)結(jié)果處理(確證試驗(yàn)判定,平板記數(shù),數(shù)字修約)。
2.1本次抽查樣品致病菌檢測(cè)結(jié)果
本次抽查的142批次生熟制品的微生物檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表3。
表3 面米制品的致病菌檢測(cè)結(jié)果Table 3 Pathogenic bacteria detection results of rice products
由表3可知,在本次統(tǒng)計(jì)的已檢測(cè)的142批次的速凍面米制品中,對(duì)于沙門(mén)氏菌指標(biāo),生熟制品所檢樣品都未檢出;對(duì)于金黃色葡萄球菌指標(biāo),生熟制品所檢樣品都在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)限定值范圍內(nèi);88份生制品和54份熟制品依據(jù)GB 19295-2011《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)速凍面米制品》都符合要求,合格率都為100%。
2.2選定兩份樣品Y1和Y2檢測(cè)的結(jié)果報(bào)告
選定的兩份樣品Y1(生制品)和Y2(熟制品)檢測(cè)記錄見(jiàn)表4。
表4 樣品Y1和Y2檢測(cè)記錄Table 4 Samples Y1 and Y2 detection records
由表4可知:樣品Y1和樣品Y2都定性地檢出了金黃色葡萄球菌,在樣品Y1中同批次的5個(gè)獨(dú)立包裝中,根據(jù)公式(2)生制品有兩個(gè)連續(xù)稀釋度(10-1,10-2)平板所有菌落數(shù)合計(jì)在20 CFU~200 CFU之間,經(jīng)計(jì)算數(shù)字分別為:270、410、260、330、190 CFU/g。
在樣品Y2中同批次的5個(gè)獨(dú)立包裝中,根據(jù)公式(1)熟制品結(jié)果數(shù)字分別為:18、3、0、44 CFU/g和37 CFU/g。結(jié)果表明,樣品Y1和Y2金黃色葡萄球菌定量未超標(biāo),符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)要求且平均報(bào)告數(shù)分別為:290 CFU/g和20 CFU/g。
2.3各分量不確定度分量[5]
金黃色葡萄球菌計(jì)數(shù)的不確定度主要由系統(tǒng)性效應(yīng)和隨機(jī)性效應(yīng)引起。本文主要分析稀釋度、加樣體積、菌落數(shù)、個(gè)人計(jì)數(shù)重復(fù)性、確證實(shí)驗(yàn)人員計(jì)數(shù)的不確定度。金黃色葡萄球菌計(jì)數(shù)各分量合成的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為:
式中:WN為金黃色葡萄球菌計(jì)數(shù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度;WD為稀釋過(guò)程中相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度;WV為樣品加樣體積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度;WC為平板金黃菌落數(shù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度;WT為個(gè)人重復(fù)計(jì)數(shù)所產(chǎn)生的不確定度;WQ為血漿凝固酶陽(yáng)性菌落數(shù)的比例所引入的不確定度。
取k=2,U(WN)為擴(kuò)展標(biāo)準(zhǔn)不確定度,U(WN)=k×WN,而金黃色葡萄球菌總數(shù)擴(kuò)展不確定度為:UN=U(WN)× N,(N為樣品一次檢測(cè)中金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)平均值。)
2.3.1稀釋過(guò)程中相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度
稀釋過(guò)程中相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度包括:首步10倍稀釋(25 g檢樣+225 mL生理鹽水)和后續(xù)連續(xù)10倍系列稀釋(1 mL首步稀釋?xiě)乙?9 mL生理鹽水)所產(chǎn)生的不確定度,每步稀釋所產(chǎn)生的相對(duì)不確定度平方可由下式計(jì)算
式中:a為被稀釋固體樣品質(zhì)量或樣品稀釋液體積;b為生理鹽水體積。
試驗(yàn)中除首步外,其余各步稀釋均相同。則稀釋度的相對(duì)不確定度平方為:
在本次試驗(yàn)檢測(cè)中,用電子天平稱取樣品25 g(分度0.01 g)加入225 mL生理鹽水中(250 mL量筒),它們的容許誤差分別為0.01 g和2 mL。兩者允差屬于矩形分布;后續(xù)的稀釋中,所用的量器為1 mL和10 mL移液槍,依據(jù)JJG 646-2006《移液器檢定規(guī)程》,吸取1 mL和9 mL時(shí)容量允差分別為±1.0%和±0.6%,屬于矩形分布[7]。則:
1)天平的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為:
2)量筒的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為:
3)移液槍的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為:
根據(jù)公式,則首步稀釋的相對(duì)不確定度的平方為:
后續(xù)稀釋各步的相對(duì)不確定度的平方:
本次試驗(yàn)中,用于金黃色葡萄球菌平板計(jì)數(shù)的樣品Y1(生制品)稀釋度10-1和10-2在計(jì)數(shù)范圍內(nèi)。
W2D=2W2d1+W2d2=4.271 908×10-5+2.708 7×10-5= 6.980 6×10-5
樣品Y2(熟制品)稀釋度10-1在計(jì)數(shù)范圍內(nèi)。W2D=W2d1=2.1360×10-5
2.3.2樣品加樣體積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度
分別用1 mL移液器取,每個(gè)稀釋度分別吸取1 mL樣品勻液按0.3、0.3、0.4 mL接種量加入到Baird-Parker平板。依據(jù)JJG 646-2006《移液器檢定規(guī)程》,則本次試驗(yàn)加樣過(guò)程中,1個(gè)獨(dú)立包裝的1個(gè)梯度產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定為:
U2V1mL=U2V0.4mL+U2V0.3mL+U2V0.3mL=3×0.005 772=5.376×10-7
對(duì)于樣品Y1(生制品),以第一稀釋度為準(zhǔn)。則加樣總體積為5.5 mL。因涉及到稀釋度,根據(jù)公式(6),則相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為:
對(duì)于樣品Y2(熟制品),加樣總體積為5mL,則相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為:
W2V=1.152 6×10-7
2.3.3平板金黃菌落數(shù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度
胡巔[8]等認(rèn)為平板法測(cè)金黃菌數(shù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度宜按照普松分布理論計(jì)算,由于泊松分布的可加性,平板上菌落數(shù)總和的泊松分布(相對(duì)方差)可以由公式W2c=1/C估計(jì)得到。則本次試驗(yàn)中:
樣品Y1(生制品)相對(duì)不確定度平方為:
W2c=1/(270+510+260+330+190)=6.41×10-4
樣品Y2(熟制品)相對(duì)不確定度平方為:
W2c=1/(18+3+44+37+0)=9.81×10-3
2.3.4個(gè)人重復(fù)計(jì)數(shù)所產(chǎn)生的不確定度
本次試驗(yàn),以重復(fù)測(cè)量的平均值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度作為依據(jù),通常的做法是取對(duì)數(shù)以后在用常規(guī)的貝塞爾方法進(jìn)行計(jì)算合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度[9]。
生制品Y1組合的平均值,重復(fù)次數(shù)為10次,每次5個(gè)獨(dú)立包裝食品平板菌落總平均值分別為:290、240、180、220、390、360、310、190、210、370 CFU/g。這組數(shù)據(jù)的平均值為:=280故平均值的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為:
則W2T=1.473×10-3
熟制品Y2組合的平均值,重復(fù)次數(shù)為10次,每次5個(gè)獨(dú)立包裝食品平板菌落總平均值分別為:20、35、17、59、44、18、25、40、22、23 CFU/g這組數(shù)據(jù)的平均值為:=31CFU/g故平均值的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為:
2.3.5血漿凝固酶陽(yáng)性菌落數(shù)的比例所引入的不確定度[10]
每個(gè)梯度BP平板上長(zhǎng)出來(lái)的典型菌落任選5個(gè)菌落(小于5個(gè)全選),做血漿凝固酶試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證[2],因?yàn)樘暨x的差異,則會(huì)產(chǎn)生不確定度。
本次試驗(yàn),重復(fù)次數(shù)為10次,每次5個(gè)獨(dú)立包裝食品平板菌落總數(shù),從典型菌落中樣品Y1確證陽(yáng)性菌落數(shù)的比例分別為:0.92、0.96、1.0、0.96、0.88、0.8、 0.92、0.96、1.0、1.0。這組數(shù)據(jù)的平均值為:0.94
故平均值的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為:
對(duì)于熟制品Y2,陽(yáng)性菌落數(shù)的比例分別為:1.0、1.0、0.96、1.0、0.92、1.0、0.96、0.96、1.0、0.96。這組數(shù)據(jù)的平均值為:=0.976故平均值的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為:
2.3.6樣品中金黃葡萄球菌合成不確定度和擴(kuò)展不確定度
綜合2.3.1-2.3.5各分量不確定度結(jié)果,可以得出,樣品金黃色葡萄球菌計(jì)數(shù)合成的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度。
對(duì)于樣品Y1(生制品),相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為:
對(duì)于樣品Y2(熟制品),相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為:
在置信概率p=0.95時(shí),取k=2則擴(kuò)展不確定度為:
樣品Y1:U95uel=kp×WN=1.02×10-1,
樣品Y2:U95uel=kp×WN=2.32×10-1
根據(jù)以上數(shù)樣品Y1檢測(cè)結(jié)果報(bào)告為:平均菌落為290 CFU/g;不確定度為30 CFU/g;樣品Y2檢測(cè)結(jié)果報(bào)告為:20 CFU/g;不確定度為4 CFU/g。
影響金黃色葡萄球菌平板記數(shù)法結(jié)果不確定度的因素很多,本次試驗(yàn)中主要討論了稀釋度、加樣體積、菌落數(shù)、個(gè)人計(jì)數(shù)重復(fù)性、確證實(shí)驗(yàn)人員計(jì)數(shù)過(guò)程中的不確定度。在其整個(gè)檢測(cè)過(guò)程中除了上述不確定度之外,結(jié)果還受標(biāo)準(zhǔn)菌種、培養(yǎng)基質(zhì)量、培養(yǎng)箱參數(shù)、樣品取樣均勻、菌落的重疊和菌落的計(jì)數(shù)誤差等因素的影響[10]。
通過(guò)對(duì)各不確定度分量進(jìn)行分析和計(jì)算表明,樣品金黃色葡萄球菌平板記數(shù),重復(fù)計(jì)數(shù)及確證試驗(yàn)血漿凝固酶中陽(yáng)性菌比例及計(jì)數(shù)產(chǎn)生的不確定度所占分量最大。
通過(guò)選擇合適的、可行的試驗(yàn)方案,規(guī)范操作就可以減小關(guān)鍵步驟的不確定度分量值,保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確、可靠。該方法可以廣泛應(yīng)用于各類食品中大腸菌群平板計(jì)數(shù)不確定度的評(píng)定[10]。
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DOI:10.3969/j.issn.1005-6521.2016.11.038
作者簡(jiǎn)介:鄧曉鴻(1986—),男(漢),工程師,碩士研究生,研究方向:食品微生物。
收稿日期:2015-05-14
Uncertainty Evaluation for Palte Counts of Pathogenic Bacteria Colonies in Foods
DENG Xiao-hong,QIANG Min,ZHU Xin-sheng,WANG Wei-gang
(Zhenjiang Center for Products Quality Supervision&Inspection,Zhenjiang 212132,Jiangsu,China)
Abstract:To understand the microbial indicators of frozen rice products in the region and probe the uncertainty assessment methods for testing the results of Staphylococcus aureus.the products were sampled and test accord
ing to GB 4789.1-2010,GB 4789.4-2010,GB 4789.10-2010 and GB 19295-2011 and evaluated uncertainty of the samples based on JJF1059.1-2012,poisson scatter and related statistical methods to evaluate uncertainty of the samples.142 quick-frozen product of wheat flour and rice,including 88 samples of Frozen without cook
ing and 54 samples of Cooked before frozen,both qualified rate of them was 100%.According to the methods used,it was concluded that the average results of two samples was 290 CFU/g and 20 CFU/g.Also the relative standard uncertainty of test results of was 30 CFU/g and 4 CFU/g respectively.Evaluation method used in this paper could estimate the uncertainty of test results of Staphylococcus aureus coming form quick-frozen products of wheat flour and rice,which was suitable to evaluate the safety of them.
Key words:quick-frozen product of wheat flour and rice;Staphylococcus aureus;Uncertainty evaluation