董 穎，欒玉靜，杜鴻雁，常 靖，王瑞花

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體液中測(cè)定嗎啡含量的不確定度評(píng)定

董 穎，欒玉靜，杜鴻雁，常 靖，王瑞花

（公安部物證鑒定中心，北京100038）

摘要：目的 依據(jù)測(cè)量不確定度的評(píng)定原則，對(duì)不確定度的評(píng)定方法進(jìn)行探討，建立液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定體液中測(cè)定嗎啡含量的不確定度分析方法。方法 采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對(duì)體液中嗎啡含量檢測(cè)的不確定度進(jìn)行評(píng)定，建立該方法測(cè)定體液中嗎啡含量不確定度的數(shù)學(xué)模型，確定不確定度來(lái)源及分量，選擇合理的評(píng)定方法，計(jì)算出檢測(cè)結(jié)果的合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度和擴(kuò)展不確定度。結(jié)果 當(dāng)體液中嗎啡含量為224.3 ng/mL時(shí)，其擴(kuò)展不確定度為5.4 ng/mL，k=2。其中，測(cè)量重復(fù)性對(duì)不確定度的影響最大。結(jié)論 采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定體液中嗎啡的含量應(yīng)嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件，要多人多次重復(fù)測(cè)量。

關(guān)鍵詞：法醫(yī)毒物分析；嗎啡；不確定度

毒物分析結(jié)果往往成為司法判定的重要依據(jù)，其測(cè)量不確定度評(píng)定與表示具有重要意義。隨著實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可活動(dòng)的發(fā)展，越來(lái)越多的實(shí)驗(yàn)室都具有了方法確認(rèn)的程序［1-4］，而測(cè)量不確定度的評(píng)定是其重要內(nèi)容之一，但是很多實(shí)驗(yàn)室程序規(guī)定與現(xiàn)實(shí)脫節(jié)，不確定度的評(píng)定方法比較混亂。本文對(duì)體液（指血液或尿液）中嗎啡含量測(cè)定方法的不確定度評(píng)定進(jìn)行探討，為定量測(cè)定生物體液中嗎啡含量的不確定度評(píng)定提供參考模型。

1 材料與方法

1.1 主要儀器及試劑

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀Waters Xevo TQ MS（Wat-ers，美國(guó)）；電子天平Sartotius BP210S（Sartotius，徳國(guó)）；所用試劑均為色譜純，水為超純水（18.2W）。

1.2 檢測(cè)方法

測(cè)量方法參照本實(shí)驗(yàn)室IFSC 04-01-04-2011《生物樣品中嗎啡、單乙酰嗎啡的液相色譜檢驗(yàn)方法》。取生物體液檢材1mL于15mL具塞試管中，加入乙腈，振蕩、離心，分離有機(jī)相，濃縮至干，加1mL甲醇或乙腈溶液定容，0.22μ m微孔有機(jī)濾膜過(guò)濾，供儀器分析。取相應(yīng)空白體液1mL，添加100ng嗎啡，按上述操作規(guī)程與檢材平行操作。檢材溶液與添加嗎啡的溶液分別進(jìn)樣3μ L，峰面積各取平均值，以外標(biāo)峰面積比較法定量。

2 結(jié)果與討論

2.1 數(shù)學(xué)模型

液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定體液中嗎啡含量的定量數(shù)學(xué)模型為：

式中：w —體液中嗎啡的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，ng/mL；frep—重復(fù)性校正因子；

m—添加嗎啡總量，ng；AT—添加色譜峰面積平均值；

Ai—檢材色譜峰面積平均值；V—檢材量，mL。

式中：m —添加嗎啡總量，ng；—嗎啡標(biāo)準(zhǔn)使用液的濃度，ng/mL；

Vi—移取標(biāo)準(zhǔn)使用液的體積，mL。

2.2 不確定度來(lái)源分析及量化合成

從測(cè)量過(guò)程和數(shù)學(xué)模型上分析來(lái)源并量化合成。

2.2.1 重復(fù)性校正因子freprep引入不確定度u（freprep）

來(lái)源于測(cè)量方法的重復(fù)性。取10份檢材，按照1.2項(xiàng)下處理，10次測(cè)量平均值為224.3ng/mL，并根據(jù)貝塞爾公式計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)偏差為7.15。

來(lái)源于標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備和標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液稀釋成標(biāo)準(zhǔn)使用液的過(guò)程。

2.2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液

稱取嗎啡純品100mg置于100mL 容量瓶中配制成1mg/mL的溶液。

式中：c1—標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的濃度，mg/mL ；m1—嗎啡純品的質(zhì)量，g；

V1— 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液定容體積，mL。

（1）m1引入標(biāo)準(zhǔn)不確定度u （m1）

（2）V1引入標(biāo)準(zhǔn)不確定度u （V1）1）校準(zhǔn)對(duì)體積的影響u1（V1）：合格的A級(jí)100mL容量瓶，依據(jù)JJG196-2006《常用玻璃量器》，最大允差ΔV1為±0.10 mL，假定為矩形分布，則

2.2.2.2 稀釋過(guò)程

用100～1000mL可 調(diào) 移 液 器 吸 取V2=1mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，置于100mL容量瓶中，稀釋定容。再用100～1000mL可調(diào)移液器吸取1mL稀釋液，置于100mL容量瓶中，稀釋定容，制成標(biāo)準(zhǔn)工作液。

（1）100～1000mL可調(diào)移液器引入標(biāo)準(zhǔn)不確定度u（V2）

1）校準(zhǔn)對(duì)體積的影響u1（V2）：已知100～1000mL可調(diào)移液器取1000mL樣品時(shí)容量允差為±1.0%，取矩形分布，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

將上述V2不確定度分量合成：

（2）100mL容量瓶引入標(biāo)準(zhǔn)不確定度

同u（V1），在重復(fù)性校正因子f rep引入不確定度u（f rep）中已考慮，此處不重復(fù)計(jì)算。

2.2.2.3 合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度u（）

2.2.3 生物檢材移取V引入標(biāo)準(zhǔn)不確定度

同u（V2），在重復(fù)性校正因子frep引入不確定度u（frep）中已考慮，此處不重復(fù)計(jì)算。

2.2.4 移取標(biāo)準(zhǔn)使用液Vi引入標(biāo)準(zhǔn)不確定度

同u（V2），在重復(fù)性校正因子frep引入不確定度u（frep）中已考慮，此處不重復(fù)計(jì)算。

2.2.5 合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度的計(jì)算

表 1 不確定度分量表Table 1 Constituent factors of uncertainty

2.2.6 擴(kuò)展不確定度的計(jì)算

2.2.7 測(cè)量結(jié)果表示

檢材中嗎啡的含量：（224.3±5.4）ng/mL，k=2

本文以測(cè)定體液中嗎啡含量為例，討論了不確定度的主要來(lái)源及其各不確定度分量評(píng)定方法。分析影響測(cè)量不確定度結(jié)果的各個(gè)因素，比較其對(duì)總測(cè)量不確定度的貢獻(xiàn)?？梢钥闯?，主要來(lái)源是測(cè)量的重復(fù)性引起的。因此在嗎啡類(lèi)案件的檢驗(yàn)鑒定中，要多人多次重復(fù)測(cè)量。

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中圖分類(lèi)號(hào)：DF795.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A

文章編號(hào)：1008-3650（2016）01-0054-03

收稿日期：2014-12-22

基金項(xiàng)目：“十二五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃課題（2012BAK02B02）

作者簡(jiǎn)介：董 穎，副研究員，碩士，研究方向?yàn)槎疚锓治觥?E-mail： dy@cifs.gov.cn

Evaluation of Measurement Uncertainty for the Determination of Morphine in body Fluids

DONG Ying，LUAN Yujing，DU Hongyan，CHANG Jing，WANG Ruihua （Institute of Forensic Science， Ministry of Public Security， Beijing 100038， China）

ABSTRACT：Objective To evaluate the measurement uncertainty for the determination of morphine content in body fl uids because of its great signifi cance in the fi eld of forensic toxicology. Methods A mathematical model of uncertainty evaluation was designed for the determination results of morphine in body fl uids performed with liquid chromatography-tandem mass spectrometry. The various sources and quantity of uncertainty were determined by the established mathematical model. A reasonable evaluation method was selected to calculate the combined standard uncertainty and expanded uncertainty. Results The expanded uncertainty of 5.4 ng/Ml （k=2） was derived with 224.3 ng/mL of morphine. The repeatability of detection was regarded as the major source of uncertainty of measurement. Conclusions It is necessary and important to control experimental conditions strictly and perform repeated measurements by different people to ensure the accuracy of the testing results.

KEY WORDS：forensic toxicology；morphine；uncertainty of measurement