解放軍第306醫(yī)院婦產(chǎn)科 (北京 100101)

黨艷麗　王　莉　馬曉旗△

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妊娠女性熒光定量檢測(cè)高危HPV感染情況及基因型分析

解放軍第306醫(yī)院婦產(chǎn)科 (北京 100101)

黨艷麗王莉馬曉旗△

摘要目的：應(yīng)用熒光定量PCR反應(yīng)(FQ- PCR)技術(shù)檢測(cè)北京地區(qū)妊娠中期不同年齡女性高危人乳頭瘤病毒(HPV)感染情況，了解基因型別分布情況。 方法：采用FQ- PCR方法對(duì)2030例妊娠中期女性進(jìn)行15種高危型HPV型別分析。 結(jié)果：北京地區(qū)妊娠中期女性HPV感染率為10.79%，其中高危型HPV-52、HPV-58、HPV-51、HPV-16感染率最高,占15種HPV型別檢出型別的百分率依次為23.29%、15.53%、14.16%、13.70%。6個(gè)年齡組感染率最高依次為小于20歲、20～24歲、40歲以上，分別為20.00%、15.85%、13.63%。 結(jié)論：北京地區(qū)妊娠中期女性高危型HPV感染較為普遍，HPV-52、HPV-58、HPV-51、HPV-16型別感染最為多見。低齡段妊娠期女性感染率最高，應(yīng)加強(qiáng)隨訪。

主題詞乳頭狀瘤病毒感染妊娠中期妊娠，高?；蚍中图夹g(shù)

人乳頭狀瘤病毒(HPV)是常見的一種性傳播疾病的病原體，分為高危型HPV及低危型HPV，其中高危型HPV已被證實(shí)與宮頸癌密切相關(guān)。高危型HPV(癌相關(guān)型，HRHPV)主要包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59等型別，尤其HPV16、HPV18是女性宮頸癌發(fā)病的重要型別。HPV越來越受到重視，有學(xué)者提出以高危HPV檢測(cè)作為宮頸癌篩查的首選方案[1]。妊娠期是人體的特殊時(shí)期，HPV感染的影響和處理是非常重要的問題。為此，我們用熒光定量PCR反應(yīng)(FQ - PCR)技術(shù)對(duì)近1年來我院妊娠中期女性標(biāo)本進(jìn)行分析，以了解妊娠期高危HPV感染情況，現(xiàn)報(bào)告如下。

資料和方法

1標(biāo)本與采集收集2015年5月到2016年4月在我院婦產(chǎn)科門診就診篩查HPV的中期妊娠女性2030例，年齡18～47歲。采集前先用棉拭子將宮頸口的分泌物沾除，再將宮頸刷伸入宮頸內(nèi)1～2cm處，順時(shí)針旋轉(zhuǎn)5圈，收集宮頸口及頸管的脫落上皮細(xì)胞，取出宮頸刷，將其放入標(biāo)有編號(hào)的取樣管中，取樣管內(nèi)已加有專用細(xì)胞保存液，擰緊瓶蓋，標(biāo)本保存后，4℃存放，并在1周內(nèi)檢測(cè)。

2方法采用上海之江生物科技股份有限公司生產(chǎn)的“高危型HPV分型核酸測(cè)定試劑盒(熒光PCR照試劑盒)標(biāo)注的操作流程提取患者宮頸脫落細(xì)胞DNA，每份標(biāo)本構(gòu)建4個(gè)PCR反應(yīng)體系(4個(gè)反應(yīng)體系所包含15種高危型別包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、82分型)。同時(shí)在 SLAN96R 實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增儀上進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增條件如下：除垢 37℃ 5 min；預(yù)變性94℃ 1min；95℃ 5s → 60℃ 30 s循環(huán) 40次，于60℃處收集熒光信號(hào)。反應(yīng)結(jié)束后，由電腦自動(dòng)分析 ,最終根據(jù)每個(gè)樣本4個(gè)體系的結(jié)果情況綜合判讀HPV具體型別。有兩種或兩種以上型別顯色陽(yáng)性者認(rèn)定為多重感染，P?0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用 SAS9.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P?0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1HPV高危型檢測(cè)結(jié)果妊娠中期篩查人數(shù)2030例，15種高危型基因分型檢測(cè)陽(yáng)性219例，陽(yáng)性率10.79%，其中單純感染177例，占妊娠期總感染者8.72%,二重型別感染33例，占妊娠期總感染率者1.63%，三重型別感染8例，占妊娠期總感染率者0.4%，四重型別感染1例，占妊娠期總感染率者0.05%。

2HPV感染率與妊娠年齡關(guān)系小于19歲感染率最高，達(dá)到20%；20～24歲感染率其次，達(dá)到15.85%，再次是大于40歲組，為13.65%。各年齡段經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

3HPV高危型型別分布在妊娠中期篩查中， 15種型別感染率由高到低分布為HPV52(51例，23.29%)、58HPV(34例，15.53%)、51HPV(31例，14.16%)、16HPV(30例，13.70%)、39HPV(24例，10.96%)、56HPV(19例，8.68%)、18HPV(15例，6.85%)、59HPV(14例，6.39%)、66HPV(14例，6.39%)、31HPV(13例，5.94%)、68HPV(12例，5.48%)、33HPV(6例，2.74%)、45HPV(4例，1.83%)、35HPV(2例，0.91%)、82HPV(2例，0.91%)(多種重復(fù)感染型別重復(fù)計(jì)數(shù))，見表2。

4HPV16、HPV18在妊娠中期感染率HPV16、HPV18在妊娠中期177例單一感染分別為22例(12.43%)、10例(5.65%)，共計(jì)32例(18.08%)；在42例重復(fù)感染中HPV16、HPV18感染分別為8例(19.05%)、5例(11.90%)，共計(jì)13例(30.95%)，見表3。

表1　妊娠中期女性宮頸HPV感染年齡分布

注：各年齡組之間感染率比較，P>0.05(P=0.5575)；其中，小于20歲組例數(shù)5例不計(jì)入統(tǒng)計(jì)

表2　HPV型別在妊娠中期感染分布

注：本檢測(cè)中單一感染177例，二重感染33例，三重感染8例，四重感染1例

表3　HPV16、HPV18在妊娠中期感染情況

討論

HPV感染已被公認(rèn)為是引起宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)瘤病變的主要原因，HPV檢測(cè)在宮頸癌篩查中的作用已無(wú)可非議。單純HPV陽(yáng)性不代表宮頸癌的發(fā)生，但是能有效地判斷宮頸癌發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)。子宮頸的癌前病變(CIN)到癌是個(gè)相對(duì)較長(zhǎng)時(shí)間的過程，即宮頸感染HPV→CIN→原位癌→早期浸潤(rùn)癌→浸潤(rùn)癌，整個(gè)病理過程要經(jīng)過10年左右的時(shí)間。近年來，人乳頭瘤患病率呈上升趨勢(shì)，且趨于年輕化。據(jù)研究，約50%～90%的HPV感染可在感染后數(shù)月至2年內(nèi)被免疫系統(tǒng)清除，感染的平均持續(xù)時(shí)間為8～12個(gè)月。如果在間隔1年以上的時(shí)間連續(xù)兩次檢測(cè)出同一高危型HPV被認(rèn)為是持續(xù)感染，只有慢性持續(xù)高危型HPV感染最終演變?yōu)閷m頸癌。

不同文獻(xiàn)顯示對(duì)于妊娠期HPV感染陽(yáng)性率報(bào)道也不一致，可能于地區(qū)差異、不同人群有關(guān)[2]，認(rèn)為妊娠期感染率明顯增高，同時(shí)年齡小于25歲，更容易感染[3]。在我們本次研究的2030名北京地區(qū)孕婦中，HPV檢出率為10.79%，而且HPV感染率在25歲以下高達(dá)20%及15.85%。雖然組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.5575)，但低齡年齡段陽(yáng)性率明顯高于其他年齡段，表明需進(jìn)一步重視年輕女性的HPV感染。在HPV型別檢測(cè)中最常見的型別是HPV52，HPV16型別位于第4位，HPV18型別位于第7位。除了對(duì)HPV16、HPV18型別重視，HPV52型的感染率也需要給予重點(diǎn)關(guān)注和研究。在重復(fù)感染中HPV16、18型感染率更高，因而更應(yīng)注重重復(fù)感染。由于妊娠期盆腔外生殖器血運(yùn)豐富，胎盤分泌大量的絨毛膜促性腺激素、雌激素、孕激素、胎盤生乳素等抑制免疫反應(yīng)，使母體出現(xiàn)免疫耐受或免疫反應(yīng)無(wú)應(yīng)答，且胎兒宮內(nèi)發(fā)育過程中也可產(chǎn)生大量胚胎抗原抑制母體的免疫反應(yīng)。因此，妊娠女性可能新感染HPV或者HPV感染的女性會(huì)加重感染程度，而這些仍需進(jìn)一步證實(shí)。另一個(gè)需要關(guān)注的是新生兒的結(jié)局，雖然有文獻(xiàn)報(bào)道妊娠中期HPV感染對(duì)新生兒預(yù)后影響相對(duì)較小[4]，但妊娠期HPV的高感染率對(duì)新生兒也需要繼續(xù)關(guān)注。

參考文獻(xiàn)

[1]Huh WK, Ault KA, Chelmow D,etal. Use of primary high-risk huma papillomavirus testing for cervical cancer screening: Interim clinical guidance[J]. Gynecol Oncol,2015,136(2):178-182.

[2]Uribarren-Berrueta O, Sánchez-Corona J, Montoya-Fuentes H,etal.Presence of HPV DNA in placenta and cervix of pregnant mexican women[J].Arch Gynecol Obstet,2012,285(1)：55-60.

[3] Liu P, Xu L, Sun Y,etal.The prevalence and risk of human papillomavirus infection in pregnant women[J].Epidemiology and Infection，2014,142(8)，1567-1578.

[4]Tenti P, Zappatore R, Migliora R,etal.Perinatal transmission of human papillomavirus from gravidas with latent infections[J]. Obstet Gynecol, 1999,93:475-479.

(收稿:2016-05-04)

【中圖分類號(hào)】R714.2

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7377.2016.07.41

△ 西北婦女兒童醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心