高許雷（青島市嶗山區(qū)農(nóng)林局，山東青島 266061）

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黃曲霉毒素對雛雞免疫機能的影響

高許雷
（青島市嶗山區(qū)農(nóng)林局，山東青島 266061）

摘 要：為了研究黃曲霉素對雛雞免疫機能的影響，試驗選用40只14日齡的海蘭褐雛雞，隨機分為兩組，每組20只。試驗組飼喂被黃曲霉菌毒素污染的飼料，對照組飼喂未污染飼料，并于試驗后14 d和21 d，從試驗組和對照組分別隨機抽取5只雞進行免疫器官指數(shù)測定和血清NDV抗體檢測。結(jié)果表明，試驗后14 d試驗組與對照組各項指標無顯著差異；試驗后21 d試驗組胸腺指數(shù)顯著低于對照組，法氏囊指數(shù)極顯著低于對照組，而脾臟指數(shù)無顯著差異；試驗組抗體效價降低，差異極顯著（P＜0.01），說明黃曲霉毒素會抑制雛雞的免疫機能。

關(guān)鍵詞：黃曲霉毒素；雛雞；抗體效價

霉菌毒素是真菌的次級代謝產(chǎn)物，是其產(chǎn)物中有毒物質(zhì)的統(tǒng)稱。其中，黃曲霉毒素（afl atoxin，AF）主要是黃曲霉菌和寄生曲霉菌的某些菌株產(chǎn)生的高毒性和高致癌性毒素，其在飼料中相當穩(wěn)定，一旦污染較難清除。

目前已發(fā)現(xiàn)黃曲霉毒素及其衍生物有20多種，已確定結(jié)構(gòu)的有18種［1］，在霉菌毒素中其毒性最高，也最常見，且都具有致癌作用。我國飼料普遍容易受到黃曲霉毒素的污染，河南、山東、湖北、安徽四省的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，飼料中黃曲霉菌檢出率為75%。在廣西，玉米、稻谷、花生和豆類黃曲霉毒素的檢出率分別為72%、71.4%、70.1%、31%［2］。王若軍從內(nèi)蒙、寧夏、黑龍江、北京、遼寧、天津、湖南、湖北、河北、江蘇、浙江、福建、廣東、海南等?。ㄖ陛犑?、自治區(qū)）采集31份玉米、21份全價飼料、27份植物蛋白飼料、12份菌體蛋白飼料、11份動物蛋白飼料和3份青貯飼料進行黃曲霉毒素檢測，其中玉米樣品中的檢出率為83.9%、全價料中的檢出率高達100%、蛋白質(zhì)飼料中的檢出率也高達100%［3］，這說明我國飼料及飼料原料中黃曲霉毒素的污染情況比較嚴重。

曲霉菌毒素的毒性因動物的種類、年齡、性別和體況以及營養(yǎng)狀況的不同有差異。一般情況動物年齡越小其易感性越強，雌性動物比雄性動物具有較強的耐受性，營養(yǎng)狀況越差越容易發(fā)病，懷孕比未懷孕更容易產(chǎn)生反應［4］。

黃曲霉毒素對雞生產(chǎn)性能的影響主要表現(xiàn)在采食量降低、生長緩慢，平均體重比正常體重低283.5 g，比正常雞低13.53%，嚴重中毒的雞體重可下降708.9 g，比正常雞低33.85%［5］。畜禽食入低劑量的AFB1（1 mg/kg飼料）就能引起體重減輕、飼料利用效率和生產(chǎn)性能下降［6］。用含有AFB13×10-6的飼料喂養(yǎng)家禽一個星期就會出現(xiàn)明顯的臨床癥狀，雖然產(chǎn)蛋家禽死亡率不高，但輕則產(chǎn)蛋量下降，嚴重的會使產(chǎn)蛋完全停止，而且蛋黃重量減輕，蛋黃顏色變淺［7］。這可能是由于AFB1干擾了脂肪代謝和色素沉積。另外，黃曲霉毒素也可破壞公雞的性功能，使睪丸萎縮，曲細精管發(fā)育不良，阻礙精液產(chǎn)生。

近來的研究認為，T淋巴細胞調(diào)節(jié)的細胞免疫反應似乎更易受到黃曲霉毒素影響。Ghosh等［8］觀察到，產(chǎn)蛋雞淋巴細胞數(shù)量的下降與飼喂毒素劑量有相關(guān)性，并發(fā)現(xiàn)毒素能夠影響淋巴細胞中的腺苷脫氨酶的活性，使其活性下降。他們已證實0.3和1 mg/kg的AFB1都能降低由T細胞介導的細胞免疫，使T細胞數(shù)顯著降低、脾中巨噬細胞活性明顯減弱。

本實驗主要從飼料被黃曲霉毒素污染對雛雞生長發(fā)育侵害的因素，研究其對免疫機能的影響。

1　材料與方法

1.1材料

14日齡健康海蘭褐蛋雞雛雞，膠東某雞場提供；新城疫低毒力活疫苗（IV系），北京市獸醫(yī)生物藥品廠生產(chǎn)；霉菌毒素污染飼料和未污染飼料各一份，膠東某雞場提供。

1.2方法

1.2.1雛雞日常飼養(yǎng)觀察。試驗過程中，每日觀察記錄雞群的精神狀態(tài)、個頭、食欲和行為變化、糞便變化等。

1.2.2免疫器官指數(shù)測定。分別于試驗后14 d和 21 d從試驗組和對照組隨機抽取5只雞，空腹稱重，從心臟采集新鮮血液置于抗凝劑中備用。宰殺，取胸腺、脾臟和法氏囊，用天平稱重量，做好記錄，按此方法計算免疫器官指數(shù)：免疫器官指數(shù)=免疫器官重量（g）/雞活體重（kg）。

1.2.3血清中ND抗體滴度檢測。將采集的血液以2 000 r/min低速離心5 min，取上層血清備用。在96孔V型微量凝集板上進行抗體滴度檢測。先在第一孔加入1：1280倍NDV標準陽性血清50 μL，依次做倍比稀釋至第7孔，棄去最后50 μL，第8孔不加抗原做對照。每孔加入50 μL的生理鹽水及50 μL待檢血清，每孔再加入1%的致敏紅細胞懸液1滴，輕輕搖勻30 min后觀察，判定結(jié)果。

1.2.4微生物學檢查。涂片染色：兩次撲殺前均隨機挑取實驗組雛雞2只做染色鏡檢。準備好清晰透明、潔凈而無油漬的載玻片，用鑷子夾持雛雞的部分肝臟，然后以滅菌剪刀取一小塊，夾出后將其新鮮切面在玻片上壓印或涂抹成一薄片，使其自然干燥。將干燥好的抹片用鑷子夾持一端，在酒精燈火焰上來回通過數(shù)次，略做加熱固定。將固定好的抹片進行革蘭氏染色。

1.2.5數(shù)據(jù)處理。將各項數(shù)據(jù)用T檢驗進行統(tǒng)計分析。

2　結(jié)果與分析

2.1黃曲霉毒素感染雛雞后的臨床觀察

對照組雛雞生長發(fā)育良好，雞群精神狀態(tài)良好，飲食欲正常，增長速度快，個體差異小。

實驗組雛雞生長發(fā)育不良，羽毛蓬亂，嗜睡，食欲減退，羽翼下垂，體重低于正常發(fā)育雞水平，雞群均勻度差，個別雛雞虛弱站立不穩(wěn)，運動失調(diào)，排白色或血色稀糞，?？s脖閉眼呆立，角弓反張，采血時可見血液凝固不良。

2.2黃曲霉毒素感染后對體重的影響

雛雞在采食受黃曲霉毒素污染的飼料后，臨床上無典型中毒表現(xiàn)，但無論是在14 d后，還是21 d后，與對照組相比較，試驗組的雛雞生長發(fā)育明顯受阻，體增重顯著減慢，飼料報酬降低。對照組雞群14 d和21 d后的平均體重高于試驗組，差異極顯著（P＜0.01）（表1）。

表1　黃曲霉毒素感染后對不同日齡肉雞體重的影響（X±SD）

2.3黃曲霉毒素感染后對雞免疫器官指數(shù)的影響

與對照組相比，試驗組21 d后胸腺和法氏囊明顯萎縮，胸腺指數(shù)和法氏囊指數(shù)顯著和極顯著低于對照組，而各組間脾臟指數(shù)無顯著差異（表2）。

表2　黃曲霉毒素感染對免疫器官指數(shù)（g/kg）的影響（X±SD）

2.4黃曲霉毒素感染后對雞NDV疫苗免疫后抗體滴度的影響

用NDV弱毒苗免疫雞只后，由于受黃曲霉毒素感染，實驗組雛雞抗體水平顯著降低（表3）。

表3　黃曲霉毒素感染對NDV疫苗免疫抗體水平的影響（X±SD，log2）

2.5微生物學檢查

將組織碎片顯微鏡下觀察，可見短的分枝狀有隔菌絲，菌絲直徑約4～6 um，用墨汁和氫氧化鉀液混合后染色，再置高倍鏡下觀察，可見到被墨汁染成藍色的菌絲。

在沙堡弱葡萄糖瓊脂平板和察氏瓊脂平板上培養(yǎng)7 d后，可見菌落表面有皺紋，中心帶呈暗綠色，稍突起，周邊呈散射纖毛樣無色結(jié)構(gòu)，背面為奶油色，直徑約6 mm，有霉味。用解剖針或接種針挑取少許培養(yǎng)物，置于載玻片上，滴加乳酸苯酚液少許（乳酸苯酚液配方：乳酸20 mL、石炭酸20 g、甘油40 mL、美藍0.05 g、蒸餾水20 mL），用針將菌絲體分開，勿成團，加蓋玻片后，顯微鏡下觀察可見典型黃霉菌樣結(jié)構(gòu)。

在普通瓊脂培養(yǎng)基及麥糠凱瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)檢查，未發(fā)現(xiàn)大腸桿菌、白痢桿菌、支原體等病原微生物。

3　討論

幼雛采食受微量霉毒素污染的飼料后，臨床上無典型中毒表現(xiàn)，但是會使生長發(fā)育受阻，體重增重顯著減慢，并且參次不齊，飼料報酬降低。這是因為黃曲霉毒素感染能使機體免疫機能下降，免疫器官發(fā)育受阻，生長緩慢，并且影響疫苗保護力，使抗體水平降低，從而造成生長不均。

黃曲霉毒素廣泛存在于玉米、花生和棉籽餅（粕）中，和其他霉菌毒素相比，毒性最強，對人畜危害最大。我國之所以是飼料被黃曲霉毒素污染的重災國，原因多是人們對其認識不足。特別是在多雨的年份，大部分玉米發(fā)霉變質(zhì)，甚至在未收獲時就發(fā)生隱性霉變。

綜上所述，黃曲霉毒素的危害的確很大，中毒后目前沒有特效藥物進行治療，因此養(yǎng)殖戶應該從杜絕飼喂被黃曲霉毒素污染的飼料出發(fā)，減輕它對養(yǎng)殖業(yè)造成的危害，也為人類健康豎一道屏障。

參考文獻：

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［8］ Ghosh R C.實驗性黃曲霉中毒的肉雞發(fā)生免疫抑制［J］.國外獸醫(yī)學：畜禽傳染病，1991（4）：22-23.

［9］ 李夢云，陳代文. 飼料中黃曲霉毒素的危害及幾種脫毒劑的作用機理［J］.飼料博覽，2005，137（4）：5.

（責任編輯：胡藕祥）

中圖分類號：S859.87

文獻標識碼：B

文章編號：1005-944X（2016）01-0059-03

Infl uence of Afl atoxin on Immunity of Chicklings

Gao Xulei
（Laoshan District Agriculture and Forestry Bureau，Qingdao，Shandong 266061）

Abstract：In order to evaluate the influence of aflatoxin to chicken immune function，40 14-day-old Hyline Brown chicks were selected and randomly divided into two groups. The test group was fed with afl atoxin contaminated feed and the control group was fed with uncontaminated feed. 5 chicks were randomly taken from the test group and the control group respectively 14 d and 21d after the experiment for immune organ index test and NDV antibody test. Test results showed that there was no signifi cant difference of the immune organ index between the group and control group 14 d after the test；Thymus and bursa index of the test group were signifi cantly lower than the control group，and the spleen index had no signifi cant difference between the two groups 21d after the test；The ND antibody titer of the test group was lower signifi cantly. The test indicated that afl atoxin could inhibit chick immune system.

Key words：afl atoxin；chicks；antibody level