陳　琳，喻　明，張翠平，汪紅平，陸　明

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糖尿病腎病患者尿血管緊張素轉(zhuǎn)換酶表達(dá)及培哚普利治療后改變

陳琳，喻明*，張翠平，汪紅平，陸明

上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬普陀醫(yī)院，上海200062

[摘要]目的評估糖尿病腎病合并輕、中度腎功能損害患者應(yīng)用培哚普利及氯沙坦治療后尿血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)、ACE2的改變，并觀察其與腎功能損害的關(guān)系。方法130例2型糖尿病合并糖尿病腎病患者，根據(jù)腎小球?yàn)V過率(eGFR)分為3組，慢性腎臟病(CKD)1～2期50例，CKD 3期53例，CKD 4期27例；選擇50例無糖尿病患者為對照組。檢測尿ACE、ACEmRNA和蛋白含量。選取CKD1～3期糖尿病腎病患者60例，分為2組，分別給予血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(ACEI組，培哚普利片4 mg，1次/d)和血管緊張素Ⅱ受體抑制劑(ARB組，氯沙坦50 mg，1次/d)治療12周，復(fù)查尿ACE、ACEmRNA，評估治療前后尿白蛋白/肌酐(UACR)改變與尿ACE、ACEmRNA的相關(guān)性。結(jié)果糖尿病腎病患者尿ACE蛋白水平高于對照組[(49.92±12.45) pg/mLvs.(6.58±2.78) pg/mL，P=0.001)。糖尿病腎病患者分組比較顯示，CKD 3期組尿ACEmRNA表達(dá)(4.92±3.44)顯著高于CKD1～2期組(1.77±1.86)、CKD 4期組(0.91±0.72)；CKD 1～2期組尿ACEmRNA(4.43±2.66)表達(dá)顯著高于CKD 3期組(2.15±1.52)、CKD 4期組(0.96±0.79)。CKD 4期組尿ACE、ACE2、ACEmRNA、ACEmRNA均明顯低于CKD1～2期組、CKD 3期組。UACR與尿ACEmRNA、ACE水平呈顯著正相關(guān)(r=0.402，P=0.001；r=0.187，P=0.033)。ACEI組治療12周尿ACEmRNA表達(dá)較治療前下降(1.91±0.99 vs.2.71±1.08，P=0.027)，且UACR下降率與治療前尿ACEmRNA表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.435，P=0.04)。結(jié)論2型糖尿病腎病患者尿ACE、ACEmRNA表達(dá)和蛋白水平與微量白蛋白尿、腎功能受損程度相關(guān)。ACEI可能通過抑制腎臟ACE表達(dá)改善微量白蛋白尿，且改善程度與尿ACEmRNA表達(dá)相關(guān)。

[關(guān)鍵詞]ACE；ACE2；培哚普利；糖尿病腎病

0引言

糖尿病腎病(Diabetic kidney disease，DKD)是2型糖尿病患者主要的慢性致死性并發(fā)癥，具有較高的發(fā)病率和死亡率[1]。在維持性血液透析ESRD患者中，DKD患者3～5年生存率最低[2]。糖尿病的防治不僅應(yīng)以個體化的血糖控制為目標(biāo)，更應(yīng)著力于慢性并發(fā)癥的防治，基于糖尿病腎病的高發(fā)生率和高致殘致死率，2型糖尿病患者腎功能損害早期防治和高危人群篩查及治療靶點(diǎn)的研究得到廣泛關(guān)注。腎素血管緊張素系統(tǒng)(Rennin-angiotensin system，RAS)調(diào)節(jié)機(jī)體水、電解質(zhì)、血壓平衡，維持腎臟和心血管的活性與功能。RAS調(diào)節(jié)因子異常導(dǎo)致腎臟微循環(huán)改變，是腎臟疾病的重要發(fā)病機(jī)制。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(Angiotensin converting enzyme，ACE)是RAS重要的活性因子，催化活性血管緊張素Ⅱ(AngiotensinⅡ，AngⅡ)生成，通過血流動力學(xué)和非血流動力學(xué)效應(yīng)導(dǎo)致腎小球硬化及間質(zhì)纖維化[3]。ACE及AngⅡ表達(dá)生成過量是DKD發(fā)生及進(jìn)展的重要因素。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2(ACE2)是近年發(fā)現(xiàn)的RAS關(guān)鍵酶，研究證實(shí)，ACE2可選擇性降解AngⅡ，抑制腎臟微循環(huán)異常、保護(hù)腎功能[3-4]。檢測糖尿病患者腎臟ACE和ACE2表達(dá)及活性有助于評估腎損害發(fā)生風(fēng)險并評價其預(yù)后。本研究收集DKD患者與糖代謝正常人群尿液，比較尿ACE、ACE2mRNA表達(dá)及蛋白含量，分析DKD患者合并不同時期腎功能損害與尿ACE、ACE2表達(dá)相關(guān)性。評估糖尿病腎病合并輕中度腎功能損害患者降壓治療后尿ACE、ACE2改變及與微量白蛋白尿的相關(guān)性。

1對象與方法

1.1觀察對象選取2014年2月至2015年4月我院內(nèi)分泌科門診及住院2型糖尿病腎病患者130例，符合1999年WHO診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：年齡≥80歲或≤18歲；HbA1c≥9.1%或空腹靜脈血糖≥11.1mmol/L；1型糖尿病、糖尿病酮癥、糖尿病高滲、乳酸性酸中毒等急性并發(fā)癥；非糖尿病性腎臟疾患；腎動脈狹窄、尿路感染、膀胱或前列腺慢性疾患；慢性肝病或血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶>2倍正常上限；心力衰竭、結(jié)締組織病、惡性腫瘤及其他內(nèi)分泌代謝疾病；近3個月曾經(jīng)使用血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(ACEI)或血管緊張素Ⅱ受體阻滯劑(ARB)。除既往明確診斷為糖尿病腎病外，新診斷糖尿病腎病參照美國腎臟基金會腎臟病預(yù)后質(zhì)量倡議(NKF-K/DOQI)指南標(biāo)準(zhǔn)，2型糖尿病患者出現(xiàn)以下任何1項(xiàng)：①大量白蛋白尿；②糖尿病視網(wǎng)膜病變伴微量白蛋白尿。根據(jù)估算腎小球?yàn)V過率(eGFR)分為3組，即慢性腎臟病(CKD)1～2期組[eGFR≥90 mL/(min·1.73m2)或60～89 mL/(min·1.73 m2)]，CKD3期組[eGFR30～59 mL/(min·1.73 m2)]，CKD4期組[eGFR15～29 mL/(min·1.73 m2)]。選取我院健康體檢者50例為對照組，無糖代謝異常、高血壓、肝腎功能不全或心腦血管疾病、近3個月未使用ACEI或ARB、尿常規(guī)蛋白陰性。本研究由我院倫理委員會通過，所有受試者均簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1尿ACE、ACE2mRNA和蛋白檢測尿RNA提取參照Li等[5]方法，收集受試者空腹晨尿50 mL，即刻4℃低溫離心(4 000 r/min)15 min，棄去上清，再次低溫離心(1 000 r/min)5 min，吸去上清，沉淀物加入1 mLTrizol吹打混勻，放置-70 ℃凍存。取RNA提取樣本5 μL加入石英比色杯內(nèi)，加入雙蒸水1 mL，充分混勻。分光光度計讀取260、280 nm的檢測值，260 nm/280 nm比值為1.8～2.0，說明樣本RNA純度較高。實(shí)時定量PCR(RT-PCR)檢測尿ACE、ACE2 mRNA表達(dá)。按總RNA提取試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書提取RNA、合成cDNA模板。引物由廣州銳博生物科技有限公司合成。ACE：上游5′-GGAGGAATATGACCGGACATCC-3′，下游5′-TGGTTGGCTATTTGCATGTTCTT-3′；ACE2：上游5′-CGAAGCCGAAGACCTGTTCTA-3′，下游：5′-GGGCAAGTGTGGACTGTTCC-3′。以GADPH為內(nèi)參，引物序列：上游5′-ATGGGGAAGGTGAAGGTCG-3′，下游5′-GGGGTCATTGATGGCAACAATA-3′。按RT-PCR說明書取4×dNTP、隨機(jī)引物各1 μL，組織總RNA 2 μg，加水至12 μL，65 ℃×5 min，快速插入冰水中，離心，冰上加入DTT(100 mmol/L)2 μL、RNAsin(40 U/μL)1 μL、M-MLVRT反轉(zhuǎn)錄酶(200 U/μL)1 μL，37 ℃×50 min，70 ℃×15 min，-20 ℃保存。Sybrgreen10 μL，上游引物和下游引物各1 μL(5 μM)，反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物2 μL，加水至20 μL，兩步法PCR反應(yīng)擴(kuò)增。反應(yīng)條件為95 ℃×30 s，95 ℃×5 s，60 ℃×34 s，40個循環(huán)，擴(kuò)增完畢讀取Ct(擴(kuò)增循環(huán))值，計算目的基因相對表達(dá)量。雙抗體夾心法-酶聯(lián)免疫吸附檢測尿ACE、ACE2蛋白含量。

1.2.2培哚普利與氯沙坦治療前后尿白蛋白/肌酐比(Urinary albumin creatinine ratio,UACR)、尿ACE、ACE2mRNA比較糖尿病腎病患者中選取CKD1～3期合并微量白蛋白尿(UACR30～300 mg/g)患者60例，均無ACEI或ARB應(yīng)用禁忌證。排除高血壓、血壓<120/80 mmHg、血鉀>5.0 mmol/L、HbA1c>8.0%、UACR≥500 mg/g。將60例患者分為2組，分別給予ACEI(ACEI組，培哚普利片4 mg，1次/d)和ARB(ARB組，氯沙坦50 mg，1次/d)，治療12周，復(fù)查尿ACE、ACE2mRNA，評估治療前后UACR改變與尿ACE、ACE2mRNA相關(guān)性。

2結(jié)果

2.1DKD患者與正常對照組臨床資料比較DKD患者130例，男60例，女70例；CKD1～2期50例，CKD3期53例，CKD4期27例；餐后2 h血糖(14.2±5.5) mmol/L，HbA1c 8.1%±1.1%，糖尿病病程(6.2±5.5)年，血清肌酐(75.4±22.5) μmol/L，eGFR(66.7±32.5)mL/(min·1.73 m2)。兩組臨床資料比較見表1。

2.2糖尿病腎病患者與對照組尿ACEmRNA、ACE2mRNA、ACE、ACE2水平比較見表2。糖尿病腎病患者尿ACE蛋白水平高于對照組[(49.92±12.45)pg/mL vs.(6.58±2.78)pg/mL，P=0.001)。糖尿病腎病患者分組比較顯示：與CKD4期組比較，CKD3期組、CKD1～2期組尿ACE、ACE2、ACEmRNA、ACE2mRNA表達(dá)均顯著升高。UACR與尿ACEmRNA、ACE水平呈顯著正相關(guān)(r=0.402，P=0.001；r=0.187，P=0.033)。

2.3培哚普利和氯沙坦治療前后尿ACEmRNA、ACE2mRNA、UACR比較見表3。治療12周后，兩組UACR均降低；ACEI組尿ACEmRNA下降。培哚普利組UACR下降率(△UACR/治療前UACR)與治療前尿ACE2mRNA表達(dá)正相關(guān)(r=0.435，P=0.04)，氯沙坦組UACR下降率與治療前后尿ACEmRNA、ACE2mRNA均無明顯相關(guān)。

3討論

ACE促使AngⅡ形成，通過以下機(jī)制調(diào)節(jié)血管生理性收縮舒張：①小動脈平滑肌收縮，外周阻力增加；②交感神經(jīng)興奮性增高，兒茶酚胺分泌增加；③刺激腎上腺皮質(zhì)醛固酮分泌[6]，機(jī)體ACE水平升高是腎臟疾病進(jìn)展的重要因素。Nielsen等[7]研究證實(shí)，賴諾普利(ACEI)可顯著改善糖尿病患者腎小球和腎小管損害，提示通過阻斷ACE拮抗RAS是延緩糖尿病患者腎功能損害的重要手段。ACE2可選擇性降解AngⅡ和產(chǎn)生血管緊張素1-7(Angiotensin1-7，Ang1-7)，后者能夠通過其受體Mas抑制血管平滑肌細(xì)胞生長增生，是機(jī)體天然的RAS作用阻滯劑[8-9]。研究顯示，外周循環(huán)ACE2水平升高提示ACE2-Ang1-7-Mas軸作用優(yōu)勢，表現(xiàn)為RAS系統(tǒng)抗纖維化和抗炎作用加強(qiáng)，ACE作用減弱[10]。ACE2作用缺失導(dǎo)致明顯的臨床和病理腎損害。注射ACE2特異性阻滯劑可加重糖尿病小鼠腎小球損傷，導(dǎo)致顯著的蛋白尿[11]。ACE2基因缺失大鼠腎臟中AngⅡ水平明顯增加，早期出現(xiàn)腎小球系膜中纖維膠原沉積，12個月即發(fā)展為腎小球硬化[12]。提示RAS中ACE/ACE2作用互為拮抗，ACE通過AngⅡ產(chǎn)生縮血管、促增殖、促進(jìn)炎癥反應(yīng)的作用，而ACE2介導(dǎo)產(chǎn)生Ang1-7阻滯AngⅡ作用，發(fā)揮擴(kuò)血管、抑制細(xì)胞增殖、保護(hù)腎功能作用。ACE/ACE2的平衡狀態(tài)是RAS系統(tǒng)穩(wěn)定發(fā)揮調(diào)節(jié)血管生理性收縮舒張和內(nèi)皮功能的基礎(chǔ)[13]。研究ACE/ACE2調(diào)節(jié)重要因子改變，是反映血管功能和腎臟損害的有效指標(biāo)。

表1　DKD組與對照組臨床資料比較(例)

表2　CKD1～4期糖尿病組與正常對照組患者尿ACEmRNA、ACE2mRNA、ACE、ACE2水平比較

注：與對照組比較，**P<0.01；與CKD4期組比較，#P<0.05，##P<0.01

表3　ACEI組和ARB組治療前后ACEmRNA、ACE2mRNA、UACR比較

注：與治療前比較，△P<0.05

目前研究多以血清ACE、ACE2及其標(biāo)志物反映機(jī)體RAS功能，提示糖尿病血管并發(fā)癥。然而，血清ACE與糖尿病血管并發(fā)癥相關(guān)性，目前研究結(jié)果尚不一致。Hadjadj等[14]證實(shí)，糖尿病伴腎損害患者血ACE水平明顯增高，Kutluturk等[15]發(fā)現(xiàn)，視網(wǎng)膜血管阻塞的糖尿病患者血清ACE活性顯著升高，且與病變嚴(yán)重水平有關(guān)。也有學(xué)者提出，糖尿病患者血ACE活性明顯升高，伴有慢性并發(fā)癥時降低，血ACE改變可能受病程以及血糖控制等情況影響[16]，提示外周血ACE、ACE2水平改變可能難以準(zhǔn)確反映早期血管病變和腎功能損害。糖尿病腎病患者腎臟大量足細(xì)胞脫落隨尿液排出，其中生物活性物質(zhì)能保持原有活性而被檢測，較外周血含量更能準(zhǔn)確特異地反映該活性物質(zhì)在腎臟中的表達(dá)，且具有無創(chuàng)收集、處理相對簡單等優(yōu)點(diǎn)[17]。

本研究中，2型糖尿病患者的尿ACE水平明顯高于糖代謝正常者，且與尿白蛋白水平相關(guān)，說明腎臟RAS激活導(dǎo)致ACE增多參與了糖尿病腎病進(jìn)展。機(jī)制可能為長期高胰島素血癥使腎臟交感神經(jīng)興奮性增加，刺激腎小球近球細(xì)胞壓力感受器，使腎素-血管緊張素Ⅰ分泌增加，由于底物對酶的誘導(dǎo)作用，ACE分泌亦隨底物增加。本研究根據(jù)CKD分組檢測不同腎功能損害糖尿病腎病患者的ACE、ACE2表達(dá)，結(jié)果顯示，尿ACEmRNA和蛋白水平在CKD3期組表達(dá)最高，尿ACE2mRNA在CKD1～2期組表達(dá)最高，說明尿ACE、ACE2表達(dá)與糖尿病腎病腎功能受損進(jìn)展相關(guān)。本研究還發(fā)現(xiàn)，CKD4期組尿ACE、ACE2表達(dá)及蛋白水平均降低，可能為糖尿病腎病進(jìn)展至重度腎功能損害，腎小球硬化、萎縮，球旁細(xì)胞壓力感受器敏感性和RAS反應(yīng)能力下降，且球旁細(xì)胞存在不同程度受損，可能導(dǎo)致腎素分泌的解剖結(jié)構(gòu)破壞，腎素產(chǎn)生不足，腎臟分泌ACE、AngⅡ等RAS活性組分及其他相關(guān)生物活性因子，如拮抗因子的ACE2水平亦下調(diào)。提示腎臟RAS系統(tǒng)標(biāo)志物檢測可能較外周血RAS系統(tǒng)能更敏感、早期地反映腎功能受損及程度。

微量白蛋白尿的出現(xiàn)是早期糖尿病腎損害的重要表現(xiàn)，正常條件下腎小球?yàn)V過膜只允許小分子蛋白質(zhì)(相對分子質(zhì)量<40 000)通過，絕大部分被腎小管重吸收，而大分子蛋白質(zhì)不能通過。在腎臟損害早期，腎小球?yàn)V過膜的電荷屏障損傷，尿中相對分子質(zhì)量較小的白蛋白排泄增加。隨著腎小球功能受損的進(jìn)展，濾過膜上濾孔的孔徑增大，更多大分子質(zhì)量蛋白漏出。本研究相關(guān)分析顯示，UACR與尿ACEmRNA、ACE水平顯著正相關(guān)，提示腎臟ACE表達(dá)增加可能參與早期腎小球?yàn)V過屏障損害。且ACE蛋白為相對分子質(zhì)量較大的肽酶，隨著腎小球?yàn)V過屏障進(jìn)一步受損，患者表現(xiàn)為蛋白尿持續(xù)增多，ACE等蛋白漏出亦隨之增多。

循證研究表明，RAS特異性阻滯劑ACEI、ARB可減少糖尿病患者血管病變進(jìn)展，保護(hù)靶器官[18-19]。Palmer等[20]薈萃分析156項(xiàng)循證研究，發(fā)現(xiàn)ACEI、ARB是防治糖尿病進(jìn)展為終末期腎病的最有效降壓藥物。盡管ACEI、ARB均可有效改善糖尿病腎病患者的微量白蛋白尿，延緩腎病進(jìn)展，為糖尿病腎病治療重要手段之一，但比較二者對RAS及腎臟ACE、ACE2作用的研究較少。本研究選取CKD1～3期糖尿病腎病患者，分別經(jīng)培哚普利和氯沙坦治療后，結(jié)果顯示，治療12周，培哚普利組患者尿ACEmRNA表達(dá)下降，UACR下降率與治療前尿ACE2mRNA表達(dá)呈正相關(guān)。氯沙坦組治療前后尿ACEmRNA、ACE2mRNA均無明顯改變，UACR下降率與尿ACE、ACE2mRNA均無顯著的相關(guān)性。說明培哚普利可能通過抑制糖尿病腎病患者腎臟ACE表達(dá)，降低尿微量白蛋白漏出。培哚普利為ACEI，直接抑制ACE，拮抗ACE介導(dǎo)的血管收縮、腎組織基質(zhì)增殖、醛固酮分泌等。氯沙坦為ARB，主要阻斷AngⅡ受體1(AT1)，抑制RAS。盡管均作用于RAS，但ACEI、ARB不同的作用機(jī)制決定了其在腎臟保護(hù)作用中的不同靶點(diǎn)。本研究發(fā)現(xiàn)，培哚普利和氯沙坦均能改善CKD1～3期糖尿病腎病患者的尿微量白蛋白排泄，但培哚普利組尿ACE表達(dá)受到抑制，且微量白蛋白尿改善程度與尿ACE2mRNA表達(dá)相關(guān)，而氯沙坦組未出現(xiàn)類似結(jié)果。提示培哚普利可能通過抑制腎臟ACE表達(dá)和分泌，減輕患者微量白蛋白尿。ACE2作為早期糖尿病腎病的重要保護(hù)因子，表達(dá)和分泌水平可能影響患者對培哚普利的治療反應(yīng)。氯沙坦可能作用于RAS系統(tǒng)其他關(guān)鍵酶發(fā)揮腎臟保護(hù)功能。

綜上所述，本研究結(jié)果顯示，尿ACE、ACE2-mRNA及蛋白水平在CKD不同分期患者中有顯著差異；尿微量白蛋白與尿ACE表達(dá)相關(guān)；ACEI治療可抑制尿ACE表達(dá)，且微量白蛋白尿改善程度與尿ACE2表達(dá)相關(guān)。本研究結(jié)果提示，糖尿病腎病患者尿ACE、ACE2mRNA表達(dá)和蛋白水平與微量白蛋白尿、腎功能受損程度相關(guān)。ACEI培哚普利可能通過抑制腎臟ACE改善微量白蛋白尿，患者白蛋白尿改善程度與尿ACE2mRNA表達(dá)相關(guān)。本研究初步證實(shí)了腎臟ACE、ACE2表達(dá)與糖尿病腎病微量白蛋白尿和腎功能損害密切相關(guān)，將來還需進(jìn)一步研究觀察ACE、ACE2在糖尿病腎病進(jìn)展中的具體作用機(jī)制及重要下游效應(yīng)因子改變，從而為糖尿病腎病提供更多的治療靶點(diǎn)和方向。

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Expression of urinary angiotensin converting enzyme (ACE) in patients with diabetic kidney disease before and after using perindopril

CHEN Lin,YU Ming*,ZHANG Cui-ping,WANG Hong-ping,LU Ming

(Putuo Hospital,Shanghai University of Traditional Chinese Medicine,Shanghai 200062,China)

[Abstract]ObjectiveTo observe the expression of urinary angiotensin converting enzyme (ACE) and ACE2 in patients with diabetic kidney disease (DKD) before and after using perindopril and losartan,and assess the correlation between alteration of expression after medication and renal injury.MethodsTotally 130 patients with type 2 diabetes and DKD were divided into 3 groups according to the glomerular filtration rate (eGFR):CKD1～2 group,CKD 3 group and CKD 4 group;50 non-diabetic patients were set as control group.The mRNA expression of urinary ACE and ACE2 was detected by real-time quantitative PCR,and the protein contents of urinary ACE and ACE2 were gained simultaneously.Sixty cases with CKD 1～3 stage were divided into ACEI group (perindopril 4 mg,once daily) and ARB group (losartan 50 mg,once daily).The urinary mRNA expression of ACE and ACE2 was measured before and at 12 weeks after treatment,meanwhile,the correlation of change of urinary albumin to creatine ratio (UACR) and mRNA expression of ACE and ACE2 was evaluated.ResultsThe level of urinary ACE protein in DKD group was higher than that of control group:(49.92±12.45) pg/mL vs.(6.58±2.78) pg/mL,P=0.001.The ACEmRNA expression was higher in CKD 3 group (4.92±3.44) than those of CKD1～2 group (1.77±1.86) and CKD 4 group (0.91±0.72);the ACE2mRNA in CKD1～2 group (4.43±2.66) was higher than those of CKD3 group (2.15±1.52) and CKD4 group (0.96±0.79).The levels of mRNA and protein of ACE and ACE2 were significantly lower in CKD4 group.UACR positively correlated with urinary expression of ACEmRNA (r=0.402,P=0.001) and ACE (r=0.187,P=0.033) respectively.Perindopril decreased the urinary ACEmRNA from 1.91±0.99 to 2.71±1.08 (P=0.027) at 12 weeks after treatment,and the decreased rate of UACR was correlated positively to ACEmRNA expression at baseline (r=0.435,P=0.04).ConclusionThe urinary expression of ACE and ACE2 is related to the microalbuminuria and renal dysfunction.The effects of ACEI on microalbuminuria are probably mediated by the inhibition of kidney ACE,and the improvement may be related to ACEmRNA expression.

Key words：ACE;ACE2;Perindopril;Diabetic kidney disease

收稿日期：2015-11-12

基金項(xiàng)目：上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬普陀醫(yī)院重點(diǎn)課題(2013ZD187)

*通信作者

DOI:10.14053/j.cnki.ppcr.201606019