馬慧麗石藥集團中諾藥業(yè)（石家莊）有限公司

長效DPP-4抑制劑奧格列汀含量及有關(guān)物質(zhì)的測定

馬慧麗
石藥集團中諾藥業(yè)（石家莊）有限公司

采用HPLC法測定了奧格列汀原料藥含量和有關(guān)物質(zhì)。色譜條件如下：色譜柱：Apo11o Cl8，檢測波長為263nm。結(jié)果表明：奧格列汀在0.5～3.5 μg/m L范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為99.95%，RSD為0.10%。此法操作簡便、準確，可用于測定奧格列汀原料藥含量和有關(guān)物質(zhì)。

HPLC；奧格列??；有關(guān)物質(zhì)；含量

2型糖尿病的治療理念近年來已悄然發(fā)生改變，由過去簡單降血糖正逐漸演變?yōu)閷μ悄虿〖捌洳l(fā)癥的綜合治療?？诜﨑PP-4抑制劑因其強效降糖、保護胰島功能、安全性良好等優(yōu)勢備受關(guān)注［1］。第一個上市的DPP-4抑制劑為西格列汀，目前銷售規(guī)模已達40億美元。然而，最近發(fā)展起來的長效口服DPP-4抑制劑，由于每周僅需給藥1次而提高了患者的便利性和依從性，其臨床價值和臨床地位或?qū)⒂型嵘?。迄今為止，已有兩個長效口服DPP-4抑制劑應(yīng)用于臨床，分別是于2015年3月26日和2015年9 月28日獲日本醫(yī)藥品與醫(yī)療器械綜管理局批準的武田公司的琥珀酸曲格列汀和默克公司的奧格列?。?］。目前國內(nèi)關(guān)于奧格列汀的分析檢測方法尚未見報道，本文建立了該藥物原料藥的HPLC測定方法，該法靈敏、準確、專屬性及重復性好，可用于奧格列汀的含量測定及有關(guān)物質(zhì)限量檢查。

1　實驗

1.1試劑與儀器

奧格列汀標準品，進口；奧格列汀原料藥樣品，自制；乙腈，色譜純；水為自制蒸餾水；其它試劑均為分析純。

日本島津1C一10AT高效液相色譜儀；德國賽多利斯CP-224S型電子分析天平。

1.2方法

1.2.1色譜條件

色譜柱：Apo11o Cl8，5μm，250mm X 4.6mm；流動相：甲醇一0.03mol/l的磷酸二氫鉀溶液（7：3）；檢測波長為263nm；流速：1.0mL/min；進樣量：10μL；理論板數(shù)按奧格列汀計算應(yīng)不低于2000；奧格列汀峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)大于1.5。

1.2.2標準品溶液的配制

取奧格列汀標準品約25mg，精密稱定，置25mL量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為標準品儲備液。用流動相稀釋10倍作為對照品溶液。

1.2.3供試品溶液的配制

精密稱取奧格列汀原料藥，配制成1 mg/mL的溶液，作為供試品儲備液。用流動相稀釋10倍得到供試品溶液。

2　結(jié)果與討論

2.1系統(tǒng)適應(yīng)性

分別量取空白溶液、標準品溶液、供試品溶液，按1.2.1色譜條件進樣測定。結(jié)果表明，主峰保留時間5.1 min，拖尾因子為1.06，與相鄰雜質(zhì)峰的分離度均大于1.5，理論塔板數(shù)按奧格列汀峰計算不低于2000。

2.2專屬性考察

取5 m L奧格列汀標準品儲備液分別加入1 mol/L氫氧化鈉溶液、1 mol/L鹽酸溶液、30%過氧化氫溶液各2 mL和100℃水浴加熱1 h。中和后加流動相至10 m L，分別進樣10 μL，考察降解物的分離性能。經(jīng)酸、堿、高溫、氧化破壞后的降解物與主峰奧格列汀均能達到良好分離，分離度大于1.5，說明所建方法的專屬性強。

2.3線性及最低檢測限

精密量取奧格列汀標準品儲備液適量，加流動相稀釋制成濃度（μg/mL）分別為3.5、3.0、2.5、2.0、1.5、1.0、0.5系列溶液。各取10 μL進樣測定，以峰面積（y）為縱坐標、進樣濃度（x）為橫坐標，繪制標準曲線，擬合得回歸方程y=1106.9x+2.972，R=0.9999，表明在0.5～3.5 μg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。在選定的色譜條件下，按信噪比（S/N=3），測得其最低檢測限為0.0028%。

2.4精密度

取奧格列汀濃度為1.0 μg/mL的供試品溶液，按1.2.1色譜條件進樣，連續(xù)進樣6次，測定峰面積，主成分峰面積的RSD為0.6% （n=6），相關(guān)物質(zhì)峰面積的RSD為1.1%（n=6）。

2.5穩(wěn)定性

取“1.2.3”項下供試品溶液，按1.2.1色譜條件分別于0 h、4 h、8 h、12 h、24 h、48 h進樣10μL，記錄色譜圖，以峰面積計算主峰峰面積的RSD為0.2%（n=6），相關(guān)物質(zhì)峰面積的RSD為0.7%（n=6）。表明供試品溶液在48 h內(nèi)檢測穩(wěn)定性良好。

2.6重復性

取“2.5”項下的一份供試品溶液，按1.2.1色譜條件連續(xù)進針6次，計算奧格列汀的RSD為0.58%（n=6），表明重復性良好。

2.7加樣回收率

精密量取“1.2.3”項下供試品溶液9份，每份10 mL，按其濃度的80%、100%、120%分別加入105℃干燥至恒重的奧格列汀對照品各3份，按1.2.1色譜條件進樣10μL。平均加樣回收率為99.95%，RSD為0.10%，說明該方法的準確度高。

2.8樣品測定

按1.2.1色譜條件測定3批次供試品，量取“1.2.3”項下供試品溶液各10μL進樣，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算奧格列汀含量分別為99.6%、99.9%、99.8%。

2.9有關(guān)物質(zhì)的測定

按1.2.1色譜條件進樣標準品溶液，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的2O%，再分別量取“1.2.2”項下標準品溶液和“1.2.3”項下供試品溶液各10μL進樣，記錄色譜圖，參照有關(guān)物質(zhì)測定方法測定，3批有關(guān)物質(zhì)含量分別為0.256%、0.269%、0.251%。

3　結(jié)論

建立了HPLC法測定奧格列汀的含量和有關(guān)物質(zhì)。色譜條件如下：色譜柱：Apo11o Cl8，5μm，250mm X 4.6mm；流動相：甲醇一0.03mol/l的磷酸二氫鉀溶液（7：3）；檢測波長為263nm；流速：1.0mL/min；進樣量：10μL。該法簡便、精密、專屬、靈敏，可用于奧格列汀原料藥含量測定和有關(guān)物質(zhì)的檢查，可滿足企業(yè)質(zhì)量控制的要求。

［1］周辛波.關(guān)注長效口服降糖藥-DPP4抑制劑，臨床藥物治療雜志，2015年第5期，92頁

［2］全球首個每周一次口服降糖藥獲批，中國食品藥品監(jiān)管，2015年第4期，8頁

馬慧麗（1981-），女，河北省石家莊市人，工程師，主要從事醫(yī)藥研發(fā)、知識產(chǎn)權(quán)方面工作。