曲學偉

哈藥集團技術中心

高效液相色譜法測定氟氧頭孢鈉有關物質

曲學偉

哈藥集團技術中心

目的通過方法篩選，建立注射用氟氧頭孢鈉有關物質檢查方法。方法色譜條件為磷酸鹽緩沖液：甲醇（75：25），調整流速主峰出峰時間為9min，系統(tǒng)適用性應符合規(guī)定，保留時間應為主峰出峰時間的7倍。結果供試品溶液不穩(wěn)定，需現(xiàn)配現(xiàn)進樣；檢測限為35ng/ml；專屬性降解產物主要為1-（2-羥乙基）-1氫-四唑-5-硫醇。結論所建立有關物質方法可有效控制產品質量，方法可行。

有關物質；檢測限；氟氧頭孢鈉

氟氧頭孢鈉為白色至淺黃色粉末，主要用于各種感染，在臨床上應用比較廣泛，近年來在醫(yī)院占有率逐漸增加，目前已上市的氟氧頭孢鈉注射劑只有一家，為日本鹽野義制藥株式會社在中國進口的制劑，于2001年進口中國，規(guī)格有0.5g及1.0g，沒有國內廠家上市，主要因為氟氧頭孢鈉原料合成比較困難，制劑在制備過程中質量不易控制。注射用氟氧頭孢鈉的進口注冊標準2001年批準，有關物質控制不全面，未對主要的已知雜質進行控制，同時沒有考察相關雜質與主成分的相對相應因子，同時與日本藥典制劑標準相比，未明確出峰時間，保留時間定為主峰的3倍，不同色譜柱導致出峰時間不相同，可能存在雜質不容易檢出情況，參照相關標準［2-3］，我們對氟氧頭孢鈉制劑雜質進行詳細研究，建立制劑標準。

1.儀器與材料

Agilent 1260高效液相色譜儀（DAD檢測器）。

注射用氟氧頭孢鈉樣品，來源：日本鹽野義制藥株式會社，規(guī)格：0.5g。

氟氧頭孢鈉對照品及1-（2-羥乙基）-1氫-四唑-5硫醇對照品，來源為日本藥典委員會。四甲基氫氧化銨、磷酸氫二鈉及甲醇均為色譜純。

2.方法

2.1方法篩選

對進口注冊標準及《日本藥典》標準進行比較，可知所用流動相相同，均為磷酸鹽緩沖液及甲醇，比例有差異（《日本藥典》為75：25，進口注冊標準為40：60），檢測波長相同均為246nm，《日本藥典》規(guī)定出峰時間為9min，而進口注冊標準沒有規(guī)定出峰時間，檢測波長均為246nm。

我們按照上述色譜條件對檢測色譜條件進行優(yōu)化，同時也對色譜柱進行篩選，通過篩選可知，當流動相比例為磷酸鹽緩沖液—甲醇（25∶75）時，且色譜柱為熱電色譜柱（250mm*4.6mm*5um），出峰時間為9min時雜質檢出最佳，同時，我們研究發(fā)現(xiàn)需進行系統(tǒng)適用性考察，因為在供試品加入流動相制成0.25mg/ml的溶液后，在60℃下放置1小時，在主峰之后會出現(xiàn)5%左右的雜質，該雜質與主峰比較難分離，只有主峰在9min時才可有效分離，作為系統(tǒng)適用性檢測條件，如出峰在10min之后，該雜質無法與主峰分離。因此，確定主峰出峰時間為9min，主峰出峰時間為9min。

2.2檢測限

取氟氧頭孢鈉對照品加水制成不同濃度溶液，洗針進樣，以信噪比約為3∶1時溶液濃度作為檢測限濃度。結果本品檢測限溶液濃度為35ng/ml（信噪比為2.8）。供試品溶液的濃度為0.25mg/ml，供試品溶液與檢測限的溶液之比約為7100，表明0.015%以上的雜質均可有效檢出，證明供試品溶度可行。

2.3耐用性試驗

變換柱溫、改變流速、改變流動相比例，考察雜質檢出情況，結果各條件變化時要保證主峰出峰時間在9min，否則系統(tǒng)適用性不符合規(guī)定，因此，在測定本品時主要調整主峰出峰時間，使其在9min。

2.4溶液穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液，分別于0小時、1小時、2小時、4小時測定，結果1小時時供試品雜質明顯增加，說明溶液不穩(wěn)定，應現(xiàn)配現(xiàn)進。

2.5專屬性試驗

考察供試品溶液在酸、堿、氧化、高溫及強光條件下穩(wěn)定性情況，使用DAD檢測器全波長監(jiān)測，對主峰純度進行檢測，為確定檢測波長提供依據(jù)，評價在各條件下穩(wěn)定性及判斷制劑可能降解產物。結果主峰純度均符合要求，破壞時的主要產物為1-（2-羥乙基）-1氫-四唑-5-硫醇，該雜質為合成過程中起始物料，也是制劑主要雜質，出峰時間與主峰保留時間約為0.45。通過專屬性試驗發(fā)現(xiàn)有一個雜質出峰時間比較晚，該雜質含量約為0.5%左右，主峰出峰時間為9min，該雜質出峰時間約50min。

2.6相對相應因子測定

采用標準曲線斜率之比測定氟氧頭孢鈉與1-（2-羥乙基）-1氫-四唑-5-硫醇得相對相應因子，為準確測定該雜質量提供依據(jù)。制備不同濃度樣品溶液，進樣并取5點繪制線性，結果氟氧頭孢鈉與該雜質的相對相應因子為0.48。

通過上述方法學驗證證明本品所建立的方法可行，保留時間為主峰7倍，在進樣前應進行系統(tǒng)適用性考察，即取供試品加流動相制成0.25mg/ml的溶液后，于60℃下放置1小時，作為系統(tǒng)適用性溶液

2.7三批供試品檢查

取三批供試品，加水制成濃度為0.25mg/ml的溶液作為供試品溶液，取供試品溶液0.5ml加水50ml作為對照溶液，取樣進樣，已知雜質（1-（2-羥乙基）-1氫-四唑-5-硫醇）按照相對相應因子計算，結果已知雜質均在0.5%左右，50min左右雜質為0.6%左右，其它單一未知雜質均小于0.1%，三批供試品雜質基本一致。

3.討論

方法學研究結果表明所建立方法可行，溶液不穩(wěn)定需要現(xiàn)配現(xiàn)進，檢測限為35ng/ml，供試品溶液濃度與檢測限比值約為7100，說明供試品濃度可行，破壞條件下降解產物主要為已知雜質。比較進口注冊標準及日本藥典標準可知，9min出峰時間對雜質有效檢出尤為重要，在新的方法中增加了系統(tǒng)適用性考察，通過破壞樣品，破壞出來的雜質峰與主峰應有效分離，同時我們研究發(fā)現(xiàn)，在主峰出峰時間為9min時，在50min有一比較大雜質峰，同時我們對已知雜質與氟氧頭孢鈉的相對相應因子進行測定，相對相應因子為0.48，這樣可以更準確測定雜質量。通過上述研究，可知進口注冊標準存在不完善的地方，我們建立的質量標準可更有效地控制產品質量。

［1］李波，何洪，陸豫.氟氧頭孢中間體1-羥乙基-5-巰基-1H-四唑的合成進展.化學世界，2014，55（4）∶247-250.

［2］注射用氟氧頭孢鈉日本藥典標準（JP16）.

［3］注射用氟氧頭孢鈉進口注冊標準（X20010221）.

曲學偉（1983-），女，黑龍江省木蘭縣人，碩士研究生，中級，作者單位：哈藥集團技術中心，研究方向：藥物質量研究。