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        新型蛋白酶體抑制劑MLN2238對胃癌細胞增殖、凋亡及細胞周期的影響

        2016-06-30 01:17:25萬里新張成輝
        中國老年學雜志 2016年11期
        關鍵詞:增殖凋亡細胞周期

        郭 錳 萬里新 張成輝 徐 赟

        (南陽市中心醫(yī)院腫瘤內科,河南 南陽 473000)

        新型蛋白酶體抑制劑MLN2238對胃癌細胞增殖、凋亡及細胞周期的影響

        郭錳萬里新張成輝徐赟

        (南陽市中心醫(yī)院腫瘤內科,河南南陽473000)

        〔摘要〕目的探討新型蛋白酶體抑制劑MLN2238對胃癌細胞增殖、凋亡及細胞周期的影響。方法取對數(shù)生長期胃癌細胞系 BGC-823和SGC-7901,按照MLN2238終濃度0、25、50、75、100 nmol/L分為5組,處理24、48、72 h后采用四甲基偶氮唑藍比色法(MTT)檢測各孔吸光值并計算存活率以評價MLN2238對胃癌細胞的增殖抑制作用;處理48 h后經(jīng)膜聯(lián)蛋白V-異硫氰酸熒光素(Annexin V-FITC)和碘化丙啶(PI)雙標或PI標記后,采用流式細胞術檢測胃癌細胞凋亡率及細胞周期的變化。結果相同作用時間(24、48或72 h)下,隨著MLN2238濃度的增加,MLN2238處理后BGC-823、SGC-7901細胞的存活率降低(P<0.05);相同MLN2238濃度(25、50、75或100 nmol/L)情況下,除100 nmol/L MLN2238作用24 h和48 h的BGC-823細胞存活率間無統(tǒng)計學差異外(P>0.05),隨MLN2238作用時間的延長,MLN2238對BGC-823、SGC-7901細胞的增殖抑制作用也基本呈遞增趨勢(P<0.05);MLN2238處理BGC-823、SGC-7901細胞48 h后,除75、100 nmol/L MLN2238作用BGC-823細胞各周期細胞比例的差異無統(tǒng)計學意義外(P>0.05),隨MLN2238濃度的增加,BGC-823、SGC-7901細胞的凋亡率、G0/G1期細胞比例均升高,S、G2/M期細胞比例降低,且MLN2238的促凋亡效應和促細胞周期G0/G1期阻滯作用呈濃度依賴性(P<0.05)。結論MLN2238可抑制胃癌細胞的增殖并誘導細胞凋亡及G0/G1期阻滯,MLN2238的以上作用與作用時間和作用濃度有關。

        〔關鍵詞〕MLN2238;胃癌細胞;增殖;凋亡;細胞周期

        目前蛋白酶體已成為一個有效的抗癌治療靶點〔1,2〕。MLN2238是一種口服活性蛋白酶體抑制劑,為第二代蛋白酶體抑制劑〔3〕。有研究表明,MLN2238有較為廣譜的強抗腫瘤作用,不僅在體外可抑制腫瘤細胞株,而且在前列腺癌裸鼠移植瘤上亦有較好的抗癌效果〔4〕。目前MLN2238對胃癌細胞是否有抑制作用尚不清楚,本研究旨在探討MLN2238對胃癌細胞增殖、凋亡及細胞周期的影響。

        1材料與方法

        1.1主要試劑胃癌細胞系 BGC-823、SGC-7901購自中國科學院上海生命科學研究院細胞庫,新型蛋白酶體抑制劑MLN2238購自美國Selleck公司,青霉素、鏈霉素購于北京索萊寶科技有限公司,胰蛋白酶、胎牛血清均購自美國Hyclone公司,RPMI-1640培養(yǎng)基購自美國Gibco BRL公司,二甲亞砜(DMSO)、四甲基偶氮唑鹽(MTT)及碘化丙錠(PI)購自美國Sigma公司,膜聯(lián)蛋白V-異硫氰酸熒光素(Annexin V-FITC)/PI凋亡檢測試劑盒購自北京寶賽生物技術有限公司。

        1.2細胞培養(yǎng)常規(guī)方法復蘇于液氮中保存的BGC-823、SGC-7901細胞,培養(yǎng)于含10%滅活胎牛血清、100 U/ml青霉素和100 μg/ml 鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)液中,將CO2細胞培養(yǎng)箱的溫度設置為37℃、CO2體積分數(shù)設置為5%,每2~3天換液一次,待培養(yǎng)至對數(shù)生長期時,收集細胞進行實驗。

        1.3MTT法檢測細胞增殖情況采用0.25%胰蛋白酶消化對數(shù)生長期BGC-823、SGC-7901細胞后加入新鮮RPMI-1640培養(yǎng)基配制單細胞懸液,以每孔1×104個細胞接種于96孔板中,每孔體積200 μl,常規(guī)條件培養(yǎng)24 h后按照MLN2238終濃度0、25、50、75、100 nmol/L分為5組,每組設 3個復孔,處理24、48、72 h后向每孔加入MTT溶液,避光反應4 h后,采用150 μl DMSO溶液替換MTT溶液,在490 nm波長下檢測各孔吸光值(A490)并計算存活率以評價MLN2238對胃癌細胞的增殖抑制作用。存活率(%)=(加藥組A490/對照組A490)×100%。實驗重復3次。

        1.4細胞凋亡率及細胞周期檢測將密度為3×106/ml的細胞懸液接種于6孔板中,按照MLN2238終濃度0、25、50、75、100 nmol/L分為5組,每組設 3個復孔,常規(guī)培養(yǎng)48 h后收集細胞并等分為兩部分:(1)經(jīng)磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗及Binding Buffer懸浮后,加入10 μl Annexin V-FITC和5 μl PI,避光反應15 min后上流式細胞儀測定檢測細胞凋亡率;(2)加入PI上流式細胞儀測定檢測細胞周期。以上操作均嚴格依據(jù)凋亡檢測試劑盒說明書。實驗重復3次。

        1.5統(tǒng)計學處理采用SPSS19.0軟件進行t檢驗、單因素方差分析、LSD-t檢驗。

        2結果

        2.1MLN2238處理對胃癌細胞增殖的影響相同作用時間(24、48或72 h)下,隨著MLN2238濃度的增加,MLN2238處理后BGC-823、SGC-7901細胞的存活率降低(P<0.05);相同MLN2238濃度(25、50、75或100 nmol/L)情況下,除100 nmol/L MLN2238作用24 h和48 h的BGC-823細胞存活率間無統(tǒng)計學差異外(P>0.05),隨MLN2238作用時間的延長,MLN2238對BGC-823、SGC-7901細胞的增殖抑制作用也基本呈遞增趨勢(P<0.05)。見表1。

        2.2MLN2238處理對胃癌細胞凋亡的影響MLN2238處理BGC-823、SGC-7901細胞48 h后,隨著MLN2238濃度的增加,BGC-823、SGC-7901細胞的凋亡率均升高,且MLN2238的促凋亡效應呈濃度依賴性(P<0.05)。見表2。

        2.3MLN2238處理對胃癌細胞周期的影響MLN2238處理BGC-823、SGC-7901細胞48 h后,除75、100 nmol/L MLN2238作用BGC-823細胞各周期細胞比例的差異無統(tǒng)計學意義外(P>0.05),隨MLN2238作用濃度的升高,BGC-823、MLN2238作用后的G0/G1期細胞比例升高,S、G2/M期細胞比例降低,MLN2238對BGC-823、SGC-7901細胞周期G0/G1阻滯作用基本上呈遞增趨勢(P<0.05)。見表3。

        表1 MLN2238處理后BGC-823、SGC-7901細胞的存活率變化

        與0 nmol/L比較:1)P<0.05;與25 nmol/L比較:2)P<0.05;與50 nmol/L比較:3)P<0.05;與75 nmol/L比較:4)P<0.05;下表同

        表2 不同濃度MLN2238處理胃癌細胞48 h后的凋亡率

        表3 MLN2238處理BGC-823、SGC-7901細胞48 h后細胞周期分布情況

        3討論

        蛋白酶體抑制劑硼替佐米和卡非佐米在臨床試驗的成功運用,表明蛋白酶體抑制劑在抗腫瘤治療中的重要作用〔5〕。此外,包括Marizomib(又名NPI-0052)、雷公藤紅素和EGCG等天然產(chǎn)物在內的多種蛋白酶體抑制劑已進行了臨床或臨床前階段〔6〕。MLN2238目前已進入了臨床I期試驗,研究表明MLN2238具有較強的抗腫瘤效果,可增強第一代蛋白酶體抑制劑或其他化療藥物的抗腫瘤效果〔3,4〕,同時對利妥昔單抗化療耐藥的B細胞淋巴瘤也有較好的殺滅效果〔7〕。本研究發(fā)現(xiàn)MLN2238可抑制胃癌BGC-823、SGC-7901細胞的增殖,且該抑制作用呈濃度和時間依賴性,與Wei等〔4〕在前列腺癌細胞中報道的結果一致,表明抑制蛋白酶體活性可能成為多種惡性腫瘤的治療策略。

        蛋白酶體底物在細胞凋亡和細胞周期進程中起重要作用,而阻斷蛋白酶體活性可導致蛋白酶體底物的積累,繼而影響細胞凋亡和細胞周期進程〔8,9〕。本研究發(fā)現(xiàn)MLN2238可升高胃癌BGC-823、SGC-7901細胞的凋亡率,通過直接證據(jù)表明MLN2238可誘導胃癌細胞凋亡。有研究表明MLN2238可調控促凋亡蛋白p53 或NOXA的表達,繼而誘導多種惡性腫瘤的凋亡〔7〕。因此本研究推測MLN2238可能也通過誘導p53 或NOXA表達來促進胃癌細胞的凋亡。此外,細胞周期調控紊亂是胃癌惡性的主要表現(xiàn)之一〔10,11〕。本研究進一步表明MLN2238可抑制胃癌細胞周期的進程,將細胞阻滯在G0/G1期。但目前MLN2238影響胃癌細胞周期的機制尚不清楚,推測可能與調控G1向S期轉化的細胞周期蛋白表達有關。

        4參考文獻

        1韓玉杰,趙松,楊洋,等.蛋白酶體抑制劑MG132聯(lián)合順鉑誘導肺癌A549細胞凋亡的機制〔J〕.中國老年學雜志,2014;34(9):2496-8.

        2Guo N,Peng Z.MG132,a proteasome inhibitor,induces apoptosis in tumor cells〔J〕.Asia Pac J Clin Oncol,2013;9(1):6-11.

        3Engür S,Dikmen M,?ztürk Y.Comparison of antiproliferative and apoptotic effects of a novel proteasome inhibitor MLN2238 with bortezomib on K562 chronic myeloid leukemia cells〔J〕.Immunopharmacol Immunotoxicol,2015;15:1-11.

        4Wei X,Zhou P,Lin X,etal.MLN2238 synergizes BH3 mimetic ABT-263 in castration-resistant prostate cancer cells by induction of NOXA〔J〕.Tumour Biol,2014;35(10):10213-21.

        5周亮華,王明元,王星,等.Carfilzomib聯(lián)合CP T-11對胃癌SGC-7901細胞增殖、凋亡及NF-κB的影響〔J〕.臨床腫瘤學雜志,2014,19(12):1069-74.

        6Ma L,Diao A.Marizomib,a potent second generation proteasome inhibitor from natural origin〔J〕.Anticancer Agents Med Chem,2015;15(3):298-306.

        7Gu JJ,Hernandez-Ilizaliturri FJ,Mavis C,etal.MLN2238,a proteasome inhibitor,induces caspase-dependent cell death,cell cycle arrest,and potentiates the cytotoxic activity of chemotherapy agents in rituximab-chemotherapy-sensitive or rituximab-chemotherapy-resistant B-cell lymphoma preclinical models〔J〕.Anticancer Drugs,2013;24(10):1030-8.

        8劉勇,龍捷,莫祥蘭,等.蛋白酶體抑制劑MG132對Raji細胞凋亡、細胞周期及UBE1基因表達的影響〔J〕.中山大學學報(醫(yī)學科學版),2011;32(3):321-6.

        9Gu JJ,Hernandez-Ilizaliturri FJ,Kaufman GP,etal.The novel proteasome inhibitor carfilzomib induces cell cycle arrest,apoptosis and potentiates the anti-tumour activity of chemotherapy in rituximab-resistant lymphoma〔J〕.Br J Haematol,2013;162(5):657-69.

        10He J,Zhu G,Gao L,etal.Fra-1 is upregulated in gastric cancer tissues and affects the PI3K/Akt and p53 signaling pathway in gastric cancer〔J〕.Int J Oncol,2015;47(5):1725-34.

        11Yao Y,F(xiàn)eng S,Xiao M,etal.MTA1 promotes proliferation and invasion in human gastric cancer cells〔J〕.Oncol Targets Ther,2015;8:1785-94.

        〔2015-08-10修回〕

        (編輯滕欣航)

        〔中圖分類號〕R73

        〔文獻標識碼〕A

        〔文章編號〕1005-9202(2016)11-2621-03;

        doi:10.3969/j.issn.1005-9202.2016.11.024

        第一作者:郭錳(1981-),男,副主任醫(yī)師,碩士,主要從事惡性腫瘤的介入治療研究。

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