孫　勝

(新疆兵團(tuán)農(nóng)十師北屯醫(yī)院普外科，新疆　阿勒泰　836000)

重癥急性胰腺炎大鼠血清白細(xì)胞介素-2、-8及-10的表達(dá)及臨床意義

孫勝

(新疆兵團(tuán)農(nóng)十師北屯醫(yī)院普外科，新疆阿勒泰836000)

〔摘要〕目的探討重癥急性胰腺炎(SAP)大鼠血清中白細(xì)胞介素(IL)-2、-8、-10的表達(dá)及臨床意義。方法45只SD雄性大鼠，按照隨機(jī)數(shù)字表法分為對照組、假手術(shù)組、SAP組各15只，SAP組切開大鼠腹部暴露胰腺，按照大鼠體重1 ml/kg劑量膽總管注入50 g/L牛磺膽酸鈉制備SAP模型，假手術(shù)組手術(shù)相同但不注射藥物，對照組正常飼養(yǎng)，光鏡觀察大鼠胰腺組織改變，酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法在大鼠建模成功后12 h測定IL-2、IL-8及IL-10表達(dá)。結(jié)果光鏡下觀察SAP組胰腺組織嚴(yán)重水腫，細(xì)胞壞死，具有片狀血斑或者胰腺出現(xiàn)局部皂化斑，其中SAP組胰腺組織病理為(9.45±1.45)分，SAP組評分明顯高于對照組和假手術(shù)組(P<0.05)。大鼠建模成功后及對照組12 h后三組IL-2、IL-8及IL-10表達(dá)水平差異顯著(P<0.05)，其中SAP組IL-2、IL-8水平高于假手術(shù)組和對照組，IL-10水平低于假手術(shù)組和對照組(P<0.05)。SAP組血清IL-2、IL-8水平與胰腺組織病理學(xué)評分呈明顯正相關(guān)(r=0.567，0.675；P=0.012，0.004)，與IL-10呈負(fù)相關(guān)(r=-0.896，P=0.000)。結(jié)論IL-2、IL-8及IL-10等在SAP早期診斷中起著重要作用，并且可以作為疾病嚴(yán)重程度和治療效果評價(jià)指標(biāo)。

〔關(guān)鍵詞〕重癥急性胰腺炎；IL-2；IL-8；IL-10

重癥急性胰腺炎(SAP)大部分由膽道疾病、酗酒以及暴飲暴食引起〔1〕，發(fā)病機(jī)制主要是胰腺自身消化和炎癥細(xì)胞因子激活〔2〕，尤其是炎癥因子相互作用和累計(jì)作用，這些炎癥因子血管滲漏可能最終導(dǎo)致系統(tǒng)器官功能衰竭等。白細(xì)胞介素(IL)是由多種細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子，參與機(jī)體多種生理和病理反應(yīng)〔3〕。本文旨在探討IL-2、IL-8及IL-10在SAP大鼠血清中的表達(dá)和臨床意義。

1資料與方法

1.1動(dòng)物分組及試劑健康SD雄性大鼠45只，體重220～300 g，實(shí)驗(yàn)室按照正常溫度(22℃～26℃)、正常濕度喂食、自由飲水飼養(yǎng)1 w，待大鼠適應(yīng)后備用。將大鼠編號，按照隨機(jī)數(shù)字表法分為對照組、假手術(shù)組、SAP組，各15只，對照組正常飼養(yǎng)，假手術(shù)組和SAP組均麻醉開腹暴露胰腺，SAP組注入?；悄懰徕c，假手術(shù)組除不注入藥物外其余與SAP組相同。試劑：大鼠IL-2、IL-8、IL-10檢測試劑盒均購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司。?；悄懰徕c購自武漢佰興生物科技有限公司、戊巴比妥鈉溶液購自上海西塘生物科技有限公司

1.2研究方法

1.2.1SAP模型制備建模前大鼠禁食12 h，自由飲水，按照3 ml/kg給予大鼠腹腔注射10 g/L戊巴比妥鈉溶液，麻醉大鼠，然后將大鼠按照仰臥勢固定在手術(shù)臺(tái)上，大鼠腹壁消毒后，沿著腹壁正中線行切口打開腹腔，暴露胰腺，識(shí)別膽總管和十二指腸，觀察胰管和膽管方向，夾閉膽總管膽汁流向十二指腸方向夾閉，阻礙膽汁流出，然后在相反方向穿刺膽總管，按照大鼠體重1 ml/kg劑量注入50 g/L?；悄懰徕c，注射完畢后，縫合穿刺孔，等待60 s左右，取代血管夾，然后逐層關(guān)閉腹部，整個(gè)過程均為無菌操作，術(shù)后大鼠禁食，可適量飲水，12 h左右建模成功；假手術(shù)組除了未注入?；悄懰徕c外，其他手術(shù)方式同SAP組，對照組正常飼養(yǎng)。

1.2.2血清中IL-2、IL-8及IL-10檢測大鼠均在建模成功后12 h，對照組經(jīng)過相同時(shí)間，按照3 ml/kg大鼠腹腔注射10 g/L戊巴比妥鈉溶液進(jìn)行麻醉，開腹，抽取大鼠腹腔靜脈血4 ml置于離心管中，3 000 r/min離心5 min，收取血清，-20℃保存?zhèn)溆?，?yīng)用酶鏈免疫吸附法(ELISA)測定大鼠建模成功后12 h IL-2、IL-8及IL-10表達(dá)，嚴(yán)格按照試劑盒要求步驟進(jìn)行檢測。

1.2.3胰腺標(biāo)本制定大鼠開腹后，取適量胰腺組織，按照正常甲醛固定，石蠟包埋，切片，蘇木精-伊紅(HE)染色，光鏡下觀察組織水腫情況，并且進(jìn)行胰腺組織病理評分，每個(gè)切片隨機(jī)選擇5個(gè)高倍視野(200倍)，觀察胰腺組織變化，從炎癥細(xì)胞浸潤、出血、水腫、壞死及4個(gè)方面評分，分值越高胰腺組織變化越大。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS13.0軟件因素行方差分析、LSD-t檢驗(yàn)、Pearson相關(guān)或者Spearman相關(guān)分析。

2結(jié)果

2.1病理觀察和評分光鏡下觀察大鼠胰腺組織，對照組胰腺細(xì)胞分布正常，核圓形、胞質(zhì)豐富、結(jié)構(gòu)清楚、無水腫或者壞死情況；假手術(shù)組胰腺組織恢復(fù)正常，或者輕微水腫，無明顯異?，F(xiàn)象；SAP組胰腺組織嚴(yán)重水腫，細(xì)胞壞死，具有片狀血斑或者胰腺出現(xiàn)局部皂化斑。

通過胰腺組織病理評分顯示對照組為(1.32±0.37)分，假手術(shù)組為(1.54±0.37)分，SAP組為(9.45±1.45)分，差異顯著(F=6.231，P=0.008)，其中SAP組評分明顯高于對照組和假手術(shù)組(t=5.324、6.124，P=0.012、0.024)，對照組與假手術(shù)組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.563，P=0.231)。

2.2三組血清IL-2、IL-8及IL-10表達(dá)比較大鼠建模成功后及對照組12 h后三組IL-2、IL-8及IL-10表達(dá)水平差異顯著(P<0.05)，其中SAP組IL-2、IL-8水平高于假手術(shù)組和對照組，IL-10低于假手術(shù)組和對照組(P<0.05)，假手術(shù)組表達(dá)水平高于對照組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

與SAP組比較：1)P<0.05

2.3血清IL-2、IL-8及IL-10表達(dá)與病理評分相關(guān)性分析SAP組血清IL-2、IL-8水平與胰腺組織病理學(xué)評分呈明顯正相關(guān)(r=0.567，0.675，P=0.012，0.004)，與IL-10呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.896，P=0.000)。

3討論

胰腺炎是臨床常見疾病，主要表現(xiàn)為胰腺有水腫、充血，或出血、壞死，臨床上出現(xiàn)腹痛、腹脹、惡心、嘔吐、發(fā)熱等癥狀〔4〕，其中AP為胰酶消化胰腺及其周圍組織所引起的急性炎癥，主要表現(xiàn)為胰腺呈水腫、出血及壞死〔5〕，根據(jù)流行病學(xué)研究顯示〔6〕其中AP發(fā)病率呈明顯上升趨勢，AP是常見急腹癥，大部分患者病情較輕，大約10%患者發(fā)展為SAP〔7〕。

功能復(fù)雜，成網(wǎng)絡(luò)，復(fù)雜重疊，在免疫細(xì)胞的成熟、活化、增殖和免疫調(diào)節(jié)等一系列過程中均發(fā)揮重要作用。此外，還參與機(jī)體的多種生理及病理反應(yīng)等，其中IL-2分子量為15 kD，是含有113個(gè)氨基酸殘基的糖蛋白，具有活化T細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞因子產(chǎn)生，刺激自然殺傷(NK)細(xì)胞增殖，增強(qiáng)NK殺傷活性及產(chǎn)生細(xì)胞因子等，IL-8分子量為8 kD，活性形式為72個(gè)氨基酸，主要的生物學(xué)活性是吸引和激活中性粒細(xì)胞，其與IL-8接觸后發(fā)生形態(tài)變化，釋放一系列活性產(chǎn)物，誘發(fā)炎癥反應(yīng)等。IL-10分子量為35～40 kD，主要由Th2細(xì)胞產(chǎn)生，能夠抑制前炎癥細(xì)胞因子產(chǎn)生等〔8,9〕。

本文研究提示IL-2、IL-8隨著炎癥嚴(yán)重表達(dá)量逐漸升高，這可能與炎癥發(fā)展程度密切相關(guān)。當(dāng)炎癥程度重時(shí)，抗感染因子和炎癥因子均會(huì)不同程度增加或者減少。本研究還說明臨床上可以通過檢測IL-2、IL-8表達(dá)量衡量疾病嚴(yán)重程度，且IL-10表達(dá)量說明抗感染治療的效果。

4參考文獻(xiàn)

1金牡丹,周智林,傅志泉,等.重癥急性胰腺炎大鼠IL-8、IL-10及NF-κB的表達(dá)〔J〕.浙江臨床醫(yī)學(xué),2008;10(6):724-5.

2Han T,Li X,Cai D,etal.Effect of glutamine on apoptosis of intestinal epithelial cells of severe acute pancreatitis rats receiving nutritional support in different ways〔J〕.Int J Clin Exp Pathol,2013;6(3):503-9.

3杜章,吳昊,吳偉林,等.不同嚴(yán)重程度急性胰腺炎大鼠IL-17、IL-23的表達(dá)及其相關(guān)性〔J〕.肝膽胰外科雜志,2010;22(5):395-7,401.

4袁建國,周明明,蔣正英,等.IL-10聯(lián)合生長抑素對大鼠重癥急性胰腺炎炎癥相關(guān)細(xì)胞因子的抑制作用〔J〕.醫(yī)學(xué)綜述,2014;20(23):4360-1.

5朱敏,袁昌瓊,楊慧英,等.尿淀粉酶檢測對急性胰腺炎臨床診斷的意義〔J〕.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2014;14(10):1904-6.

6夏芹,張恒超,李渲,等.急性胰腺炎大鼠血清IL-32變化及意義〔J〕.同濟(jì)大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2011;32(1):14-7.

7Gorsky VA,Agapov MA,Khoreva MV,etal.The effect of lornoxicam on TLR2 and TLR4 messenger RNA expression and tumor necrosis factor-α,interleukin-6,and interleukin-8 secretion in patients with systemic complications of acute pancreatitis〔J〕.Pancreas,2015;44(5):824-30.

8Vasseur P,Devaure I,Sellier J,etal.High plasma levels of the pro-inflammatory cytokine IL-22 and the anti-inflammatory cytokines IL-10 and IL-1ra in acute pancreatitis〔J〕.Pancreatology,2014;14(6):465-9.

9Zhang J,Niu J,Yang J.Interleukin-6,interleukin-8 and interleukin-10 in estimating the severity of acute pancreatitis:an updated meta-analysis〔J〕.Hepatogastroenterology,2014;61(129):215-20.

〔2015-07-19修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)

〔中圖分類號〕R57

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)10-2352-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.10.017

第一作者：孫勝(1961-)，男，副主任醫(yī)師，主要從事臨床醫(yī)學(xué)研究。