馬 威

STAGO STA-R全自動血凝儀性能驗證

馬 威

目的 驗證STAGO STA-R全自動血凝儀（簡稱STA-R血凝儀）的系統(tǒng)性能，確定該檢測系統(tǒng)是否穩(wěn)定、準(zhǔn)確、可靠。方法 參照美國臨床和實(shí)驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會（CLSI）相關(guān)文件，選擇凝血酶原時間（PT），活化部分凝血酶時間(APTT)，纖維蛋白原(FIB)，凝血酶時間(TT)對STAGO STA-R檢測系統(tǒng)的不精密度、正確度、攜帶污染率、線性范圍、參考區(qū)間等性能指標(biāo)進(jìn)行驗證。結(jié)果 批內(nèi)和批間不精密度（CV）小于4%；各檢測項目正確度相對偏倚（SE%）小于1%；攜帶污染率小于5.9%；纖維蛋白原（Fib）檢測線性良好，相關(guān)系數(shù)為0.9976；可報告范圍（0.6～10.7）g/L；以上該檢測系統(tǒng)結(jié)果均至少有95%數(shù)據(jù)分布在現(xiàn)行生物參考區(qū)間內(nèi)。結(jié)論 STAGO STA-R凝血儀性能優(yōu)良，可以為臨床疾病的診斷、治療和預(yù)后觀察提供準(zhǔn)確可靠的檢驗結(jié)果。

STAGO STA-R全自動血凝儀；性能；驗證

為滿足臨床日益發(fā)展的需求，沈陽市兒童醫(yī)院檢驗科最近購置第二臺STAGO STA-R全自動血凝儀（鑒與以前同型號血凝儀相區(qū)別，以下簡稱2 STA-R），該儀器是專門用于臨床血液凝固狀態(tài)分析及抗凝劑監(jiān)測的設(shè)備，對血漿標(biāo)本采用凝固法、發(fā)色底物法及發(fā)光免疫法進(jìn)行測定。根據(jù)美國臨床實(shí)驗室改進(jìn)修正法案（CLIA′88）對臨床實(shí)驗室質(zhì)量管理和實(shí)驗室認(rèn)可的要求，實(shí)驗室必須對所使用的檢測系統(tǒng)進(jìn)行性能驗證[1]。參照美國臨床和實(shí)驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（CLSI）的要求并結(jié)合本室具體情況，對該分析系統(tǒng)進(jìn)行了不精密度、正確度、攜帶污染率、線性范圍、參考區(qū)間等性能指標(biāo)進(jìn)行了驗證。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑 法國Stago公司生產(chǎn)的STA-R全自動血凝儀及配套試劑：特殊清洗液，批號111549；清洗液，批號201034；PT試劑，批號110261；氯化鈣試劑，批號111526；APTT試劑，批號110733；FIB試劑，批號111085；FIB稀釋液，批號110791；TT試劑，批號109728。

PT，APTT，F(xiàn)IB質(zhì)控品為BIO-RAD公司生產(chǎn)的凝血正常、異常兩個水平質(zhì)控品：批號分別為78271、78273。

1.2 標(biāo)本 標(biāo)本采自本院就診的患者及健康體檢者，用3.2%枸櫞酸鈉（109 mmol/L）真空抗凝管，按1︰9的比例采集全血1.8 mL，3000 r/min離心10 min分離血漿標(biāo)本。

1.3 方法

1.3.1 質(zhì)量控制 為保證實(shí)驗質(zhì)量，測試前對儀器進(jìn)行凈化：通針，清洗沖洗槽，清洗標(biāo)本抽屜，試劑抽屜及測試平臺等相關(guān)維護(hù)保養(yǎng)。用相應(yīng)校準(zhǔn)品對FIB進(jìn)行校準(zhǔn)；用BIO-RAD公司血凝質(zhì)控品對PT、APTT、TT和FIB進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控。

1.3.2 不精密度驗證 按照EP 15-A 2[2]文件要求，使用BIO-RAD凝血正常、異常兩個水平質(zhì)控血漿，連續(xù)測定20次，計算批內(nèi)不精密度的均值（）、標(biāo)準(zhǔn)差（s）、變異系數(shù)（cv);取正常、異常兩個水平質(zhì)控血漿，每天分別測定兩次，間隔時間大于2 h，連續(xù)檢測10 d，共收集20個數(shù)據(jù)，計算批間不精密度的均值（）、標(biāo)準(zhǔn)差（s）、變異系數(shù)（CV)。結(jié)果應(yīng)符合下列要求。見表1。

表1 廠家聲明的批內(nèi)和批間不精密度

1.3.3 正確度驗證 由于血液實(shí)驗室第一臺STA-R(以下簡稱1 STA-R)通過了衛(wèi)生部的室間質(zhì)評活動--相對偏倚（SE%）在衛(wèi)生部室間質(zhì)評規(guī)定范圍（15%）的1/2內(nèi)為可接受，其檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性可以進(jìn)行傳遞，因此以1 STA-R為基準(zhǔn)儀器，將血液室的2 STA-R為比對儀器與之進(jìn)行比對。比對20個標(biāo)本，同一樣本在兩檢測系統(tǒng)之間的檢測時間之差不超過4小時。本實(shí)驗室規(guī)定允許差值為小于≤1/2 CLIA′88最大允許總誤差。規(guī)定的允許誤差：PT 7.5%、APTT 7.5%、FIB 10%。

1.3.4 線性范圍驗證 驗證項目：由于PT、APTT、TT的檢測結(jié)果為儀器直接讀取的凝固時間，因此不適合做線性分析；FIB的檢測根據(jù)檢測時間換算出濃度，因此只驗證FIB的線性。實(shí)驗方法：選取一份接近預(yù)期上限的高值全血樣本（H），一份接近預(yù)期下限的低值全血樣本（L），將H和L樣品按：5 L、4 L+1 H、3 L+2 H、2 L+3 H、1 L+4 H、5 H關(guān)系各自配制混合，形成系列評價樣品。每個樣品重復(fù)測定2次，計算均值。將實(shí)測值與理論值作比較（偏離應(yīng)小于10%），計算y=ax+b，驗證線性范圍。要求：a值在（1±0.05）范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)r≥0.975。

表3 批間不精密度實(shí)驗結(jié)果（n=20）

1.3.5 攜帶污染率驗證 取高濃度血液樣本，混合均勻后連續(xù)測定3次，測定值分別為H 1、H 2、H 3；再取低濃度血液樣本，連續(xù)測定3次，測定值分別為L 1、L 2、L 3。按公式計算攜帶污染率（%）=（L 1-L 3）/(H 3-H 1)×100%，其中L 1和L 3分別為低值樣本在第一次和第三次測定結(jié)果。

1.3.6 生物參考區(qū)間驗證 選擇年齡、性別等均勻分布，符合建立生物參考區(qū)間的健康體檢者血漿標(biāo)本20份分別檢測各項目，計算結(jié)果落在正常生物參考區(qū)間的例數(shù)。計算x、s、比率［R（%）]及95%分位數(shù)；R(%)＝參考個體落在引用區(qū)間的個數(shù)／參考個體總數(shù)×100%，R(%)≥90%判為驗證結(jié)果適用[3-4]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 本文將所分析的相關(guān)數(shù)據(jù)錄入SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析與處理，計量資料采用“s”表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料用例數(shù)（n）表示，計數(shù)資料組間率（%）的比較采用χ2檢驗；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不精密度實(shí)驗 PT、APTT、FIB批內(nèi)及批間不精密度結(jié)果見表2、表3。在正常及異常兩水平，批內(nèi)及批間CV值均低于廠家規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)，可繼續(xù)進(jìn)行測定。

2.2 正確度實(shí)驗 各項目檢測結(jié)果(x2)與1 STA-R(x1)相比，SE%均小于3%，符合要求。見表4。

表2 批內(nèi)不精密度實(shí)驗結(jié)果（n=20）

表4 正確度實(shí)驗結(jié)果（n=20）

2.3 線性范圍實(shí)驗 FIB呈良好線性相關(guān)性。見表5、圖1。

表5 FIB線性檢測結(jié)果

圖1 實(shí)測值與理論值比較圖

2.4 攜帶污染率實(shí)驗 PT、APTT和FIB攜帶污染率分別為5.88%、0.48%、0.10%，均小于廠家規(guī)定的≤10%的標(biāo)準(zhǔn)。見表6。

表6 攜帶污染率實(shí)驗結(jié)果

2.5 生物參考區(qū)間實(shí)驗 各項目驗證結(jié)果R（%)值均大于90%，統(tǒng)計的參考區(qū)間均在引用的參考區(qū)間范圍內(nèi)。見表7。

表7 參考區(qū)間實(shí)驗結(jié)果（n=20）

3 討論

隨著本院規(guī)模不斷擴(kuò)大，一臺全自動血凝儀遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足門急診要求，因此本科室新購置了法國Stago公司生產(chǎn)的STA-R型全自動血凝儀。此型號儀器檢測速度達(dá)每小時400個，具有自動稀釋、自動再檢、自動連鎖篩選和全自動濃度稀釋分析功能，可同時提供止凝血試驗的直接結(jié)果與計算參數(shù)結(jié)果。在投入臨床應(yīng)用前應(yīng)進(jìn)行性能驗證，以確保結(jié)果的及時可信性。由于磁珠凝固法不使用光源系統(tǒng)，就方法學(xué)而言不受標(biāo)本中干擾物質(zhì)（如黃疸、乳糜、溶血）及試劑本身濃度的干擾，抗干擾能力較強(qiáng)，因此本報告未進(jìn)行抗干擾驗證［5］。

本研究中，精密度高、重復(fù)性好，在精密度驗證試驗血凝三項的CV批內(nèi)和CV批間均在廠家標(biāo)稱范圍內(nèi)，顯示精密度良好，符合要求；正確度實(shí)驗，以通過衛(wèi)生部室間質(zhì)評的1 STAGO STA-R檢測結(jié)果為基準(zhǔn)儀器，本檢測系統(tǒng)與基準(zhǔn)儀器相對偏倚在1/2 CLIA′88要求的允許范圍內(nèi)的標(biāo)本≥80%，驗證通過；攜帶污染率?。焊黜棓y帶污染率均小于10%，符合儀器的性能要求；FIB的線性實(shí)驗結(jié)果表明，a值在（1±0.05）范圍內(nèi)，r＞0.975，各檢測系統(tǒng)具有良好的線性；該檢測系統(tǒng)結(jié)果均至少有95%數(shù)據(jù)分布在現(xiàn)行生物參考區(qū)間內(nèi)，驗證合格。

綜上所述，2 STAGO STA-R全自動凝血儀性能優(yōu)良，可以保證該檢驗系統(tǒng)為臨床疾病的診斷、治療和預(yù)后觀察提供準(zhǔn)確可靠的檢驗結(jié)果。

[1] 叢玉隆，鄧新立．實(shí)驗室ISO 15189 認(rèn)可對學(xué)科建設(shè)的幾點(diǎn)啟［J］．中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2007，30(2):128-131．

[2] Clinical and Laboratory Standards Institute.EP 15-A 2 User verification of performance for precision and trueness;approved guideline-second edition[S].Wayne，PA,UAS:CLSI,2005.

[3] NCCLS.C 28-A 2 How to define and determine reference intervals in the clinical laboratory:approved guideline[S].Wayne,PA,USA:NCCLS,2000.

[4] 畢波，呂元．定量檢測系統(tǒng)的方法學(xué)性能驗證實(shí)驗結(jié)果的評價［J］．中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2007，30(12):1332-1335．

[5] 郝建華，呂斌斌，高旭紅，等．Stago Compact型血液凝固分析儀的抗干擾功能[J]．國外醫(yī)學(xué)：臨床生物化學(xué)與檢驗學(xué)分冊，2002，23(3):185-186.

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.5.099

遼寧 110000 沈陽市兒童醫(yī)院檢驗科 （馬威）