馬 威

STAGO STA-R全自動(dòng)血凝儀性能驗(yàn)證

馬 威

目的 驗(yàn)證STAGO STA-R全自動(dòng)血凝儀（簡(jiǎn)稱(chēng)STA-R血凝儀）的系統(tǒng)性能，確定該檢測(cè)系統(tǒng)是否穩(wěn)定、準(zhǔn)確、可靠。方法 參照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（CLSI）相關(guān)文件，選擇凝血酶原時(shí)間（PT），活化部分凝血酶時(shí)間(APTT)，纖維蛋白原(FIB)，凝血酶時(shí)間(TT)對(duì)STAGO STA-R檢測(cè)系統(tǒng)的不精密度、正確度、攜帶污染率、線(xiàn)性范圍、參考區(qū)間等性能指標(biāo)進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果 批內(nèi)和批間不精密度（CV）小于4%；各檢測(cè)項(xiàng)目正確度相對(duì)偏倚（SE%）小于1%；攜帶污染率小于5.9%；纖維蛋白原（Fib）檢測(cè)線(xiàn)性良好，相關(guān)系數(shù)為0.9976；可報(bào)告范圍（0.6～10.7）g/L；以上該檢測(cè)系統(tǒng)結(jié)果均至少有95%數(shù)據(jù)分布在現(xiàn)行生物參考區(qū)間內(nèi)。結(jié)論 STAGO STA-R凝血儀性能優(yōu)良，可以為臨床疾病的診斷、治療和預(yù)后觀(guān)察提供準(zhǔn)確可靠的檢驗(yàn)結(jié)果。

STAGO STA-R全自動(dòng)血凝儀；性能；驗(yàn)證

為滿(mǎn)足臨床日益發(fā)展的需求，沈陽(yáng)市兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科最近購(gòu)置第二臺(tái)STAGO STA-R全自動(dòng)血凝儀（鑒與以前同型號(hào)血凝儀相區(qū)別，以下簡(jiǎn)稱(chēng)2 STA-R），該儀器是專(zhuān)門(mén)用于臨床血液凝固狀態(tài)分析及抗凝劑監(jiān)測(cè)的設(shè)備，對(duì)血漿標(biāo)本采用凝固法、發(fā)色底物法及發(fā)光免疫法進(jìn)行測(cè)定。根據(jù)美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)修正法案（CLIA′88）對(duì)臨床實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理和實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的要求，實(shí)驗(yàn)室必須對(duì)所使用的檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行性能驗(yàn)證[1]。參照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)（CLSI）的要求并結(jié)合本室具體情況，對(duì)該分析系統(tǒng)進(jìn)行了不精密度、正確度、攜帶污染率、線(xiàn)性范圍、參考區(qū)間等性能指標(biāo)進(jìn)行了驗(yàn)證。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑 法國(guó)Stago公司生產(chǎn)的STA-R全自動(dòng)血凝儀及配套試劑：特殊清洗液，批號(hào)111549；清洗液，批號(hào)201034；PT試劑，批號(hào)110261；氯化鈣試劑，批號(hào)111526；APTT試劑，批號(hào)110733；FIB試劑，批號(hào)111085；FIB稀釋液，批號(hào)110791；TT試劑，批號(hào)109728。

PT，APTT，F(xiàn)IB質(zhì)控品為BIO-RAD公司生產(chǎn)的凝血正常、異常兩個(gè)水平質(zhì)控品：批號(hào)分別為78271、78273。

1.2 標(biāo)本 標(biāo)本采自本院就診的患者及健康體檢者，用3.2%枸櫞酸鈉（109 mmol/L）真空抗凝管，按1︰9的比例采集全血1.8 mL，3000 r/min離心10 min分離血漿標(biāo)本。

1.3 方法

1.3.1 質(zhì)量控制 為保證實(shí)驗(yàn)質(zhì)量，測(cè)試前對(duì)儀器進(jìn)行凈化：通針，清洗沖洗槽，清洗標(biāo)本抽屜，試劑抽屜及測(cè)試平臺(tái)等相關(guān)維護(hù)保養(yǎng)。用相應(yīng)校準(zhǔn)品對(duì)FIB進(jìn)行校準(zhǔn)；用BIO-RAD公司血凝質(zhì)控品對(duì)PT、APTT、TT和FIB進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控。

1.3.2 不精密度驗(yàn)證 按照EP 15-A 2[2]文件要求，使用BIO-RAD凝血正常、異常兩個(gè)水平質(zhì)控血漿，連續(xù)測(cè)定20次，計(jì)算批內(nèi)不精密度的均值（）、標(biāo)準(zhǔn)差（s）、變異系數(shù)（cv);取正常、異常兩個(gè)水平質(zhì)控血漿，每天分別測(cè)定兩次，間隔時(shí)間大于2 h，連續(xù)檢測(cè)10 d，共收集20個(gè)數(shù)據(jù)，計(jì)算批間不精密度的均值（）、標(biāo)準(zhǔn)差（s）、變異系數(shù)（CV)。結(jié)果應(yīng)符合下列要求。見(jiàn)表1。

表1 廠(chǎng)家聲明的批內(nèi)和批間不精密度

1.3.3 正確度驗(yàn)證 由于血液實(shí)驗(yàn)室第一臺(tái)STA-R(以下簡(jiǎn)稱(chēng)1 STA-R)通過(guò)了衛(wèi)生部的室間質(zhì)評(píng)活動(dòng)--相對(duì)偏倚（SE%）在衛(wèi)生部室間質(zhì)評(píng)規(guī)定范圍（15%）的1/2內(nèi)為可接受，其檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性可以進(jìn)行傳遞，因此以1 STA-R為基準(zhǔn)儀器，將血液室的2 STA-R為比對(duì)儀器與之進(jìn)行比對(duì)。比對(duì)20個(gè)標(biāo)本，同一樣本在兩檢測(cè)系統(tǒng)之間的檢測(cè)時(shí)間之差不超過(guò)4小時(shí)。本實(shí)驗(yàn)室規(guī)定允許差值為小于≤1/2 CLIA′88最大允許總誤差。規(guī)定的允許誤差：PT 7.5%、APTT 7.5%、FIB 10%。

1.3.4 線(xiàn)性范圍驗(yàn)證 驗(yàn)證項(xiàng)目：由于PT、APTT、TT的檢測(cè)結(jié)果為儀器直接讀取的凝固時(shí)間，因此不適合做線(xiàn)性分析；FIB的檢測(cè)根據(jù)檢測(cè)時(shí)間換算出濃度，因此只驗(yàn)證FIB的線(xiàn)性。實(shí)驗(yàn)方法：選取一份接近預(yù)期上限的高值全血樣本（H），一份接近預(yù)期下限的低值全血樣本（L），將H和L樣品按：5 L、4 L+1 H、3 L+2 H、2 L+3 H、1 L+4 H、5 H關(guān)系各自配制混合，形成系列評(píng)價(jià)樣品。每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定2次，計(jì)算均值。將實(shí)測(cè)值與理論值作比較（偏離應(yīng)小于10%），計(jì)算y=ax+b，驗(yàn)證線(xiàn)性范圍。要求：a值在（1±0.05）范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)r≥0.975。

表3 批間不精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=20）

1.3.5 攜帶污染率驗(yàn)證 取高濃度血液樣本，混合均勻后連續(xù)測(cè)定3次，測(cè)定值分別為H 1、H 2、H 3；再取低濃度血液樣本，連續(xù)測(cè)定3次，測(cè)定值分別為L(zhǎng) 1、L 2、L 3。按公式計(jì)算攜帶污染率（%）=（L 1-L 3）/(H 3-H 1)×100%，其中L 1和L 3分別為低值樣本在第一次和第三次測(cè)定結(jié)果。

1.3.6 生物參考區(qū)間驗(yàn)證 選擇年齡、性別等均勻分布，符合建立生物參考區(qū)間的健康體檢者血漿標(biāo)本20份分別檢測(cè)各項(xiàng)目，計(jì)算結(jié)果落在正常生物參考區(qū)間的例數(shù)。計(jì)算x、s、比率［R（%）]及95%分位數(shù)；R(%)＝參考個(gè)體落在引用區(qū)間的個(gè)數(shù)／參考個(gè)體總數(shù)×100%，R(%)≥90%判為驗(yàn)證結(jié)果適用[3-4]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本文將所分析的相關(guān)數(shù)據(jù)錄入SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析與處理，計(jì)量資料采用“s”表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用例數(shù)（n）表示，計(jì)數(shù)資料組間率（%）的比較采用χ2檢驗(yàn)；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不精密度實(shí)驗(yàn) PT、APTT、FIB批內(nèi)及批間不精密度結(jié)果見(jiàn)表2、表3。在正常及異常兩水平，批內(nèi)及批間CV值均低于廠(chǎng)家規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)，可繼續(xù)進(jìn)行測(cè)定。

2.2 正確度實(shí)驗(yàn) 各項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果(x2)與1 STA-R(x1)相比，SE%均小于3%，符合要求。見(jiàn)表4。

表2 批內(nèi)不精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=20）

表4 正確度實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=20）

2.3 線(xiàn)性范圍實(shí)驗(yàn) FIB呈良好線(xiàn)性相關(guān)性。見(jiàn)表5、圖1。

表5 FIB線(xiàn)性檢測(cè)結(jié)果

圖1 實(shí)測(cè)值與理論值比較圖

2.4 攜帶污染率實(shí)驗(yàn) PT、APTT和FIB攜帶污染率分別為5.88%、0.48%、0.10%，均小于廠(chǎng)家規(guī)定的≤10%的標(biāo)準(zhǔn)。見(jiàn)表6。

表6 攜帶污染率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.5 生物參考區(qū)間實(shí)驗(yàn) 各項(xiàng)目驗(yàn)證結(jié)果R（%)值均大于90%，統(tǒng)計(jì)的參考區(qū)間均在引用的參考區(qū)間范圍內(nèi)。見(jiàn)表7。

表7 參考區(qū)間實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=20）

3 討論

隨著本院規(guī)模不斷擴(kuò)大，一臺(tái)全自動(dòng)血凝儀遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿(mǎn)足門(mén)急診要求，因此本科室新購(gòu)置了法國(guó)Stago公司生產(chǎn)的STA-R型全自動(dòng)血凝儀。此型號(hào)儀器檢測(cè)速度達(dá)每小時(shí)400個(gè)，具有自動(dòng)稀釋、自動(dòng)再檢、自動(dòng)連鎖篩選和全自動(dòng)濃度稀釋分析功能，可同時(shí)提供止凝血試驗(yàn)的直接結(jié)果與計(jì)算參數(shù)結(jié)果。在投入臨床應(yīng)用前應(yīng)進(jìn)行性能驗(yàn)證，以確保結(jié)果的及時(shí)可信性。由于磁珠凝固法不使用光源系統(tǒng)，就方法學(xué)而言不受標(biāo)本中干擾物質(zhì)（如黃疸、乳糜、溶血）及試劑本身濃度的干擾，抗干擾能力較強(qiáng)，因此本報(bào)告未進(jìn)行抗干擾驗(yàn)證［5］。

本研究中，精密度高、重復(fù)性好，在精密度驗(yàn)證試驗(yàn)血凝三項(xiàng)的CV批內(nèi)和CV批間均在廠(chǎng)家標(biāo)稱(chēng)范圍內(nèi)，顯示精密度良好，符合要求；正確度實(shí)驗(yàn)，以通過(guò)衛(wèi)生部室間質(zhì)評(píng)的1 STAGO STA-R檢測(cè)結(jié)果為基準(zhǔn)儀器，本檢測(cè)系統(tǒng)與基準(zhǔn)儀器相對(duì)偏倚在1/2 CLIA′88要求的允許范圍內(nèi)的標(biāo)本≥80%，驗(yàn)證通過(guò)；攜帶污染率?。焊黜?xiàng)攜帶污染率均小于10%，符合儀器的性能要求；FIB的線(xiàn)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，a值在（1±0.05）范圍內(nèi)，r＞0.975，各檢測(cè)系統(tǒng)具有良好的線(xiàn)性；該檢測(cè)系統(tǒng)結(jié)果均至少有95%數(shù)據(jù)分布在現(xiàn)行生物參考區(qū)間內(nèi)，驗(yàn)證合格。

綜上所述，2 STAGO STA-R全自動(dòng)凝血儀性能優(yōu)良，可以保證該檢驗(yàn)系統(tǒng)為臨床疾病的診斷、治療和預(yù)后觀(guān)察提供準(zhǔn)確可靠的檢驗(yàn)結(jié)果。

[1] 叢玉隆，鄧新立．實(shí)驗(yàn)室ISO 15189 認(rèn)可對(duì)學(xué)科建設(shè)的幾點(diǎn)啟［J］．中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2007，30(2):128-131．

[2] Clinical and Laboratory Standards Institute.EP 15-A 2 User verification of performance for precision and trueness;approved guideline-second edition[S].Wayne，PA,UAS:CLSI,2005.

[3] NCCLS.C 28-A 2 How to define and determine reference intervals in the clinical laboratory:approved guideline[S].Wayne,PA,USA:NCCLS,2000.

[4] 畢波，呂元．定量檢測(cè)系統(tǒng)的方法學(xué)性能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的評(píng)價(jià)［J］．中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2007，30(12):1332-1335．

[5] 郝建華，呂斌斌，高旭紅，等．Stago Compact型血液凝固分析儀的抗干擾功能[J]．國(guó)外醫(yī)學(xué)：臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè)，2002，23(3):185-186.

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.5.099

遼寧 110000 沈陽(yáng)市兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科 （馬威）