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        熒光原位雜交法應(yīng)用于胃癌Her-2基因檢測及其臨床意義

        2016-06-15 14:51:48吳穎虹王仁杰柳萬江賈志紅張玨
        當(dāng)代醫(yī)學(xué) 2016年22期
        關(guān)鍵詞:原位雜交符合率標(biāo)本

        吳穎虹 王仁杰 柳萬江 賈志紅 張玨

        熒光原位雜交法應(yīng)用于胃癌Her-2基因檢測及其臨床意義

        吳穎虹 王仁杰 柳萬江 賈志紅 張玨

        目的 探討熒光原位雜交法(FISH)應(yīng)用于胃癌Her-2基因檢測及其臨床意義。方法 選取54例胃癌組織標(biāo)本,采用免疫組化法(IHC)及FISH對標(biāo)本中胃癌Her-2蛋白表達與基因擴增情況進行測定,并比較測定結(jié)果。結(jié)果 (1)FISH測定結(jié)果:14例表現(xiàn)為標(biāo)本擴增,40例表現(xiàn)為標(biāo)本無擴增,Her-2基因擴增率為25.93%;(2)IHC測定結(jié)果:10例Her-2表達為+++,8例Her-2表達為++,16例Her-2表達為+,20例Her-2表達為0,Her-2蛋白表達率為18.52%;(3)擴增符合率:Her-2蛋白表達為0時,Her-2擴增符合率為5.00%;Her-2蛋白表達為+時,Her-2擴增符合率為6.67%;Her-2蛋白表達為++時,Her-2擴增符合率為37.50%;Her-2蛋白表達為+++時,Her-2擴增符合率為90.00%;總符合率為25.93%,且呈現(xiàn)為正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論 在胃癌篩查中,可將IHC作為初步篩查手段,而針對晚期胃癌患者則建議行FISH檢測,以便進一步了解Her-2基因狀態(tài),為臨床靶向治療提供明確信息。

        胃癌;Her-2基因;熒光原位雜交法;免疫組化法

        胃癌是近幾年來發(fā)病率較高的一種腫瘤疾病,并以每年新發(fā)

        100余萬的速度遞增,而在新發(fā)病例中超過42%的病例為中國病例,加之其較高的死亡率,如今,我國已成為了胃癌發(fā)病率和死亡率均較高的國家[1]。隨著對胃癌發(fā)病原因、機制等研究的深入,人類表皮生長因子受體2(Her-2)隨之成為了胃癌靶向治療的新焦點,Her-2是位于人類染色體17q12-21.3上的原癌基因,是表皮生長因子受體(EGFR)家族中非常重要的成員之一,其在細胞分化、生長以及增殖中均有參與,為此,Her-2基因表達有無表達,直接關(guān)系著胃癌靶向治療藥物的選擇,特別是靶向性基因治療。故對胃癌Her-2基因進行測定,了解其表達情況,對臨床治療、預(yù)后判斷有著重要意義。鑒于此,本科室在課題研究中,采用免疫組化法(IHC)及熒光原位雜交法(FISH)對胃癌Her-2基因進行測定,并分析其臨床意義。現(xiàn)將有關(guān)情況報道如下。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料 本研究胃癌組織標(biāo)本均來自江西省景德鎮(zhèn)市第二人民醫(yī)院2013年1月~2015年12月接診的54例胃癌手術(shù)患者,其中女21例,男33例,患者年齡55~73歲,平均年齡(65.23±2.15)歲。所有患者術(shù)前均未行放化療治療。

        1.2 方法

        1.2.1 FISH 取17號染色體著絲粒(CEP17),可將其標(biāo)記為綠色,并將Her-2基因標(biāo)記為紅色。具體操作步驟為:取組織切片,依次對其進行脫蠟,無水酒精中室溫10min去除二甲苯,梯度酒精脫水后,純化水煮沸處理20min,室溫晾干,在37℃條件下,行200mg/L胃蛋白酶反應(yīng),持續(xù)消化進行5~15min,多次SSC洗滌,再依次梯度酒精脫水,向其中加入探針混合液

        10μL,85℃雜交儀行5min變性處理,37℃環(huán)境下行過夜雜交處理。采用0.3%NP-40/0.4×SSC66℃處理1min,采用

        0.11 %NP-40/2×SSC室溫環(huán)境下行1min處理,采用乙醇進行3min洗片處理,對其進行干燥處理,放置到10μLDAPI復(fù)染劑中進行復(fù)染處理,封片,靜置于避光處,20min后取出,放置于熒光顯微鏡下觀察。

        1.2.2 IHC 取胃癌病理組織標(biāo)本,采用中性甲醛固定,行常規(guī)石蠟包埋處理,切片,厚度4μm,運用IHCEliVision Plus二步法行染色處理,放置于高倍顯微鏡下觀察10個視野,并將Her-2蛋白表達定位在細胞膜,陽性反應(yīng)物呈現(xiàn)為棕黃色顆粒狀。

        1.3 評價標(biāo)準

        1.3.1 FISH評價標(biāo)準 經(jīng)熒光顯微鏡下對60個細胞進行計數(shù),并對Ratio值進行統(tǒng)計,若Ratio值低于1.8即可視為陰性,這表明該樣本并不存在Her-2基因擴增;若Ratio值控制在1.8~2.2范圍內(nèi),則將細胞計數(shù)增加到100個或者再次進行FISH實驗,并根據(jù)結(jié)果進行判定;若Ratio值超過2.2即可視為陽性,這表明該樣本中存在Her-2基因擴增;若觀察發(fā)現(xiàn),紅色信號點呈現(xiàn)為成簇擴增,同樣也表明該樣本為Her-2基因擴增陽性。

        1.3.2 IHC評價標(biāo)準 (1)0/陰性:細胞膜均未染色或者<10%腫瘤細胞膜染色;(2)+/陰性:腫瘤細胞超過10%,細胞膜表現(xiàn)不完整,且呈現(xiàn)為弱染色;(3)++/不確定:腫瘤細胞超過10%,細胞膜表現(xiàn)輕度到中度完整;(4)+++/陽性:腫瘤細胞超過10%,細胞膜表現(xiàn)非常完整,且呈現(xiàn)為強染色。

        1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 本研究數(shù)據(jù)均以統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS15.0進行分析處理,運用Kendall行相關(guān)性分析,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 FISH檢測結(jié)果 54例胃癌患者胃癌組織中,14例表現(xiàn)為標(biāo)本擴增,40例表現(xiàn)為標(biāo)本無擴增,Her-2基因擴增率為25.93%(14/54)。

        2.2 IHC檢測結(jié)果 54例胃癌患者胃癌組織中,10例標(biāo)本測定結(jié)果Her-2表達為+++,8例標(biāo)本測定結(jié)果Her-2表達為++,16例標(biāo)本測定結(jié)果Her-2表達為+,20例標(biāo)本測定結(jié)果Her-2表達為0,Her-2蛋白表達率為18.52%(10/54)。

        2.3 FISH與IHC測定結(jié)果比較 Her-2蛋白表達為0時,Her-2擴增符合率為5.00%(1/20);Her-2蛋白表達為+時,Her-2擴增符合率為6.67%(1/15);Her-2蛋白表達為++時,Her-2擴增符合率為37.50%;Her-2蛋白表達為+++時,Her-2擴增符合率為90.00%。兩種方法檢測結(jié)果總符合率為25.93%(14/54),且呈現(xiàn)為正相關(guān)(r=0.761,P<0.05)。見表1。

        表1 FISH基因擴增與IHC蛋白表達擴增結(jié)果比較(n)

        3 討論

        隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展,分子生物學(xué)技術(shù)也日漸成熟,并在生命科學(xué)領(lǐng)域得到了廣泛運用,在幫助人類進一步了解細胞生活活動中發(fā)揮了重要作用[2]。隨著對細胞生長、分化、增殖以及癌變等認識的逐漸深入,關(guān)于參與其變化的調(diào)節(jié)分子機制的研究也隨之增多,這使得本研究從更新的角度和層面了解胃癌的病變和發(fā)展過程,同時也將分子生物學(xué)技術(shù)逐漸發(fā)展到了腫瘤臨床診斷、預(yù)后判斷等方面[3]。

        自1987年首次報到Her-2過表達的預(yù)后意義以來,Her-2基因成為了臨床應(yīng)用較為廣泛的腫瘤標(biāo)記物[4]。當(dāng)人體Her-2基因呈現(xiàn)為大量擴增時,必然會導(dǎo)致蛋白產(chǎn)物P185呈現(xiàn)為過表達,從而致使Her-2受體異源二聚體形成數(shù)量快速增多,致使細胞內(nèi)酪氨酸激酶的活性呈現(xiàn)為快速增多,并致使酪氨酸自身磷酸化,致使多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑快速激活,出現(xiàn)細胞大量增殖的情況,引起癌變反應(yīng)[5]。在卵巢癌、肺腺癌以及乳腺癌等惡性腫瘤疾病中,Her-2蛋白或者基因擴增均呈現(xiàn)為過表達。有文獻報道表示[6],在胃癌中,Her-2基因擴增陽性率為7.1%~42.6%,而過表達率為6.8%~34%。而Her-2基因非常容易接近抗體,故將其作為腫瘤免疫治療靶位是目前學(xué)界公認觀點。

        目前,在Her-2檢測中,主要采用FISH與IHC兩種方法,其中IHC由于其操作簡單方便,且成本低廉,同時通過顯微鏡能夠觀察到腫瘤組織中Her-2陽性變化,故被視為Her-2檢測的首選方法。但IHC在檢測中極易受到各方面因素的干擾,并且方法相對較為間接,故其準確性和穩(wěn)定性有待進一步考察[7]。FISH是一種分子遺傳學(xué)檢測技術(shù),作為分子生物學(xué)技術(shù)中逐漸成熟起來的新技術(shù),F(xiàn)ISH是一種用于胃癌診斷的分子水平分析技術(shù),其主要通過細胞表型、組織病理學(xué)和基因型三方面的結(jié)合,來實現(xiàn)對腫瘤疾病的診斷,具有較高靈敏度、準確性和穩(wěn)定性,其測定結(jié)果更為客觀[8]。根據(jù)本研究結(jié)果顯示,F(xiàn)ISH檢測Her-2基因擴增率為25.93%,該結(jié)果表明,F(xiàn)ISH在Her-2基因擴增陽性率明顯更高,且呈現(xiàn)為正相關(guān)。

        綜上所述,在胃癌Her-2狀態(tài)篩查中,F(xiàn)ISH與IHC均具有一定的臨床應(yīng)用價值,能夠客觀、準確地反應(yīng)出Her-2狀態(tài),但實際運用中,建議將IHC作為初步篩選方法,針對晚期胃癌患者則建議采用FISH作進一步檢查。

        [1] 陽帥,張小麗,李亞菲,等.胃癌中HER2蛋白表達及基因擴增的臨床意義[J].慢性病學(xué)雜志,2015,16(3):277-280.

        [2] 王鳳華,李玉軍.熒光原位雜交檢測胃癌HER2基因擴增應(yīng)用價值探討[J].社區(qū)醫(yī)學(xué)雜志,2013,10(8):51-52.

        [3] 趙亞娟,劉海芳,朱獻斐,等.胃腺癌組織HER-2/neu基因表達及其臨床意義[J].中華腫瘤防治雜志,2010,16(5):357-359.

        [4] 李明新,于忠和,范晉楠.實時熒光PCR檢測胃癌石蠟組織中Her-2表達的研究[J].醫(yī)學(xué)綜述,2012,18(9):1418-1420.

        [5] 鐘山,余英豪,黃紅浪,等.熒光原位雜交法對胃癌組織HER-2基因狀態(tài)的檢測[J].世界華人消化雜志,2011,18(2):132-137.

        [6] 蘇靜,楊郁,馬曉龍,等.熒光原位雜交檢測乳腺癌人表皮生長因子受體2基因擴增及與臨床病理特征的關(guān)系[J].北京大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2011,52(2):199-203.

        [7] 眭維國,歐明林,陳潔晶,等.熒光原位雜交法與免疫組織化學(xué)法檢測乳腺癌HER-2基因擴增及蛋白表達的對比研究[J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué),2010,27(1):16-18,46.

        [8] 何中元,王桂芝,秦文華.胃癌組織HER-2基因的檢測用于靶向治療[J].醫(yī)藥論壇雜志,2014,34(9):36-37.

        10.3969/j.issn.1009-4393.2016.22.011

        景德鎮(zhèn)市級科技計劃項目(20152SFZC050)

        江西 333000 江西省景德鎮(zhèn)市第二人民醫(yī)院病理科 (吳穎虹王仁杰 柳萬江 賈志紅 張玨)

        王仁杰 E-mail:wlj3526@126.com

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