華金仁 曾丹

HMGB1及MMP9在Ⅰ型及Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌中的表達及臨床意義

華金仁 曾丹

目的 探討高遷移率族蛋白B1(HMGB1)及基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP9）在Ⅰ型及Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌中的表達及臨床意義。方法 選擇兩種子宮內(nèi)膜癌標(biāo)本存檔蠟塊100例作為研究對象，將其按照病理分型分成Ⅰ型組和Ⅱ型組，而后采用免疫組織化學(xué)法展開HMGB1及MMP9水平檢測，并對檢測結(jié)果進行統(tǒng)計分析。結(jié)果 Ⅰ型組中HMGB1陽性者46例，MMP9陽性者47例，Ⅱ型組HMGB1陽性者49例，MMP9陽性者49例。顯然HMGB1及MMP9在Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌組織中呈現(xiàn)高表達；HMGB1及MMP9在Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌組織中表達水平高于Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌組（P＜0.05）。結(jié)論 HMGB1及MMP9在子宮內(nèi)膜癌的形成中表達存在一定異常。在今后的臨床工作中，應(yīng)對其給予足夠的重視。

子宮內(nèi)膜癌；高遷移率族蛋白B1；基質(zhì)金屬蛋白酶；免疫組織化學(xué)

子宮內(nèi)膜癌在臨床上被分成兩大類：一類是雌激素依賴型（Ⅰ型）：該類癌癥疾病的發(fā)生與內(nèi)源性或外源性雌激素的分泌量明顯增高具有一定的關(guān)系，80%以上的子宮內(nèi)膜癌疾病患者屬于該種類型；癌的組織學(xué)結(jié)構(gòu)與處于增生期階段的子宮內(nèi)膜腺體較為類似，成為子宮內(nèi)膜樣腺癌。另一類是非激素依賴型（Ⅱ型）：占子宮內(nèi)膜癌的10%～15%。其發(fā)病與雌激素?zé)o明確關(guān)系，可能與癌基因或抑癌基因突變有關(guān)，據(jù)研究，P53抑癌基因的突變是其最重要的特征之一[1]。本研究對兩種子宮內(nèi)膜癌標(biāo)本存檔蠟塊展開了高遷移率族蛋白B1(HMGB1)及基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP9）表達水平檢測，分析HMGB1及MMP9在Ⅰ型及Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌中的表達及臨床意義，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年6～8月江西省婦幼保健院兩種子宮內(nèi)膜癌標(biāo)本存檔蠟塊100例作為研究對象，按照臨床分型分成Ⅰ型組和Ⅱ型組，每組50例。臨床資料和病理資料均完整，術(shù)前均未進行化療、放療及生物治療。子宮內(nèi)膜癌按FIGO2009年分期標(biāo)準(zhǔn)[2]。

1.2 方法 從資料庫中，選取合適的病例，登記每例病例所有病理號。根據(jù)病理號從玻片庫中，找到每例病例的所有玻片，在顯微鏡下篩選出最適合做免疫組織化學(xué)的玻片，并登記所選玻片號。根據(jù)所登記的玻片號，從蠟塊庫中，找到相應(yīng)的蠟塊，用于制作組織切片。

采用免疫組織化學(xué)方法（EnVision二步法）檢測HMGB1及MMP9的表達，用購買試劑公司所提供的已知HMGB1及

MMP9陽性切片作為本研究的陽性對照標(biāo)本，采用磷酸鹽緩沖液PBS代替一抗作為本次研究的陰性對照標(biāo)本。實驗的主要操作步驟包括以下幾個方面：(1)首先將石蠟標(biāo)本切成厚度為

4μm左右的切片；(2)將切好的切片進行常規(guī)二甲苯脫蠟處理，實施梯度酒精脫水，自來水沖洗，蒸餾水沖洗；(3)再將切片置于濃度水平為10 mmol/L的檸檬酸緩沖液中，并在醫(yī)用微波爐中煮20 min左右,然后在室溫狀態(tài)下進行冷卻處理20 min左右；(4)蒸餾水沖洗后PBS緩沖液沖洗3次，每次3 min；(5)每張切片應(yīng)該加一滴濃度為3%的雙氧水,在室溫狀態(tài)下孵育10 min左右,以達到使內(nèi)源性的過氧化物酶的生物活性消除的目的；(6)PBS液沖洗3次,每次間隔3 min；(7)除去PBS液，每張切片加一抗50μL，室溫下孵育3 h；(8)PBS液沖洗3次,每次間隔

3 min；（9)除去PBS液，每張切片加二抗100μL，室溫下孵育

20 min；(10)PBS液沖洗3次,每次間隔3 min；(11)除去PBS液，每張切片加三抗100μL，室溫下孵育30 min；(12)PBS液沖洗3次,每次間隔3 min；(13)甩去PBS液，每張切片上應(yīng)該加

100μL左右新鮮配制的DAB溶液進行顯色，在室溫條件下等待5 min左右，在顯微鏡下觀察染色反應(yīng),顯色適度時終止反應(yīng)；(14)PBS液沖洗，自來水沖洗，蘇木精復(fù)染核3 min，自來水沖洗，PBS液返藍；(15)切片經(jīng)梯度乙醇脫水干燥，中性樹膠封固。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)[3]HMGB1主要是在細胞核中進行表達,當(dāng)染色呈現(xiàn)出黃色或棕黃色的時候，可以判定為陽性細胞。每張切片均采用隨機方式選取10個400倍的視野,當(dāng)陽性細胞的出現(xiàn)率達到30%以上的時候，可以判定為陽性表達,當(dāng)陽性細胞的出現(xiàn)率達30%～50%時，判定為+,當(dāng)陽性細胞的出現(xiàn)率達到50%～70%時，判定為++,當(dāng)陽性細胞的出現(xiàn)率達到70%以上時，判定為+++。MMP-9陽性染色為在細胞質(zhì)和/或細胞膜有棕黃色的顆粒狀物質(zhì)出現(xiàn)。根據(jù)陽性細胞數(shù)所占的具體比例及染色的實際強度可以分為：無陽性染色細胞可以判定為--,陽性染色細胞數(shù)保持在20%以下,染色呈現(xiàn)淡黃色,個別可以表現(xiàn)為黃至棕黃色，判定為+；陽性細胞數(shù)保持在20%～50%,染色呈現(xiàn)黃色，判定為++；陽性細胞數(shù)保持在50%以上,染色呈現(xiàn)強度黃至棕黃色,只有少數(shù)顯示為淡黃色，判定為+++。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進行處理。各組間樣本率差異的比較采用Fisher確切概率法,P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。HMGB1及MMP9表達相關(guān)性采用Spearman等級相關(guān)分析。患者生存率分析采用生存曲線評估。

2 結(jié)果

在Ⅱ型組中HMGB1、MMP-9陽性率顯著高于Ⅰ型組（P＜0.05），HMGB1及MMP9在Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌組織中呈現(xiàn)高表達。見表1。

表1 2組檢測結(jié)果比較（n）

3 討論

研究顯示[4]，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生多在絕經(jīng)后婦女。調(diào)查顯示，人口老齡化的日益嚴(yán)峻，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率也在逐年升高。在歐美等一些發(fā)達國家，子宮內(nèi)膜癌疾病的發(fā)生率，在所有女性生殖道惡性腫瘤類疾病中高居首位，而目前在我國，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生率位居女性生殖道惡性腫瘤的第3位[5]。

HMGB1是在核內(nèi)非組蛋白染色質(zhì)內(nèi)廣泛分布的一種結(jié)合蛋白類物質(zhì)，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)HMGB1與其相應(yīng)的受體，晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(RAGE)在多種惡性腫瘤中呈現(xiàn)出高表達。研究顯示[6]，HMGB1的過度表達會直接導(dǎo)致一些基因表達功能失調(diào)，腫瘤的產(chǎn)生、浸潤、轉(zhuǎn)移等病理學(xué)發(fā)展過程產(chǎn)生積極的促進作用。有學(xué)者研究指出，HMGB1可以與甾體類激素受體之間產(chǎn)生相互作用，特別是在與雌激素水平密切相關(guān)的乳腺癌細胞中[7]。HMGB1在多種惡性腫瘤中都會以高表達狀態(tài)存在，譬如宮頸鱗狀細胞癌、乳腺癌、前列腺癌、胃癌、子宮內(nèi)膜癌等[8]。

本研究結(jié)果顯示，HMGB1及MMP9在Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌組織中呈現(xiàn)高表達；HMGB1及MMP9在Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌組織中表達水平高于Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌組。由此可知，HMGB1及MMP9在子宮內(nèi)膜癌的形成中可能具有相關(guān)促進作用，即呈正相關(guān)。在今后的臨床工作中，應(yīng)對其給予足夠的重視。

[1] 劉晶晶,顧振鵬,姚麗娟,等.RECK與MMP-9基因在子宮內(nèi)膜癌中的表達及臨床意義[J].國際婦產(chǎn)科學(xué)雜志,2012,39(1):95-97.

[2] 馮力元,吳佳捷.小干擾RNA抑制HMGB1表達對子宮內(nèi)膜癌細胞侵襲與遷移的影響[J].中南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2014,39(1):36-42.

[3] 賀小燕,王海琳,陳曉紅,等.HMGB1在卵巢癌中的表達及臨床意義[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展,2011,11(4):695-697.

[4] 肖建彪,陳龍華,陳斌.HMGB1在多種人體惡性腫瘤組織、癌旁組織中的表達及意義[J].山東醫(yī)藥,2013,53(12):1-3.

[5] 殷旭光,劉紫燕,王楚平.HMGB1和VEGF在妊娠期高血壓疾病中的作用及其相關(guān)性研究[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志,2015,23(3):18-19.

[6] 林麗,趙福杰,劉旭.基質(zhì)金屬蛋白酶抑制基因RECK在子宮內(nèi)膜癌中的表達及意義[J].山西醫(yī)藥雜志(下半月刊),2013,42(2):135-137.

[7] 呂穎慧，龔玉華，刁勇，等．高遷移率族蛋白A2在腫瘤發(fā)生和血管形成中的雙重作用[J].中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué),2011,16:975-980．

[8] 楊國良,薄雋杰.高遷移率族蛋白A2與腫瘤[J].中國癌癥雜志,2010, 20:156-160．

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.30.017

江西 330006 江西省婦幼保健院（華金仁 曾丹）