劉建化，　金浩生，　田紅霞，　張緒超，　馬　冬△

(廣東省人民醫(yī)院/廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院 1胃腸腫瘤內(nèi)科， 2肝膽外科， 3肺癌研究所，廣東 廣州 510180)

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HBsAg陽性肝癌患者預(yù)后及病理因素與ALK基因表達(dá)的相關(guān)性研究*

劉建化1，金浩生2，田紅霞3，張緒超3，馬冬1△

(廣東省人民醫(yī)院/廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院1胃腸腫瘤內(nèi)科，2肝膽外科，3肺癌研究所，廣東 廣州 510180)

[摘要]目的： 檢測ALK基因在HBsAg陽性肝細(xì)胞癌患者中的表達(dá)，并分析其與臨床特征及預(yù)后的相關(guān)性。方法: 收集我院2005～2010年261例術(shù)后經(jīng)病理確診的HBsAg陽性肝癌患者腫瘤組織及癌旁組織標(biāo)本，采用免疫組織化學(xué)法和FISH法對標(biāo)本石蠟切片進(jìn)行分析，檢測ALK表達(dá)情況，并探討其對HBsAg陽性肝癌患者臨床病理因素和預(yù)后的影響。結(jié)果: 在腫瘤組織中，免疫組織化學(xué)法和FISH法分別檢測到ALK陽性表達(dá)率為44.8%和32.6%。免疫組化結(jié)果進(jìn)一步顯示ALK蛋白表達(dá)與患者性別、腫瘤數(shù)目和微轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P<0.05)，而與患者的年齡、AFP水平、腫瘤大小、臨床分期等無關(guān)；ALK陽性患者總生存期和無進(jìn)展生存期均明顯低于陰性患者(P<0.01)；多因素分析顯示，ALK表達(dá)和微轉(zhuǎn)移是對患者無進(jìn)展生存期具有統(tǒng)計學(xué)顯著性的預(yù)后因素。結(jié)論: ALK在HBsAg陽性肝癌組織表達(dá)狀態(tài)與肝癌的生長和轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，可以作為反映肝癌生物學(xué)行為和判斷預(yù)后的有效指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞]ALK基因； HBsAg； 肝細(xì)胞癌

原發(fā)性肝細(xì)胞癌(以下簡稱肝癌)是最常見的惡性腫瘤之一，全世界每年新發(fā)病例約為78.2萬，其中男性肝癌發(fā)病率位居第5位而女性居第9位[1]。我國屬于肝癌高發(fā)國家，年發(fā)病及死亡病例數(shù)均占到全球50%，嚴(yán)重危及人民健康，而慢性乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染所致的慢性肝炎和肝硬化則是最主要致病因素[2]。肝癌預(yù)后差，其傳統(tǒng)治療方法包括介入、化療、放療等，效果均不理想，近年來隨著對腫瘤發(fā)病機制及其生物學(xué)行為研究的不斷深入，特異性高且不良反應(yīng)輕的分子靶向藥物日益成為研究焦點。索拉非尼是一種口服的多靶點、多激酶抑制劑，美國食品藥品監(jiān)督管理局于2007年批準(zhǔn)用于晚期肝癌的一線治療，可延長晚期肝癌患者生存時間，具有良好的臨床療效和安全性；但近年來索拉非尼導(dǎo)致的原發(fā)或繼發(fā)耐藥逐漸增多，生存期延長有限，尋找肝癌新的治療靶點顯得尤為重要。

間變性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase，ALK)屬于胰島素受體超家族，編碼一個跨膜受體酪氨酸激酶；它的激活影響腫瘤細(xì)胞的增殖分化與凋亡，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用[3]。ALK基因異常通常包括基因易位、擴增、點突變以及過表達(dá)，其中染色體易位形成的ALK融合基因是惡性腫瘤中最常見的ALK畸變。目前研究已證實[4]ALK可與ATIC、TFG、CLTC、EML4、NPM等多種基因發(fā)生融合，ALK融合基因觸發(fā)ALK激酶持續(xù)活性，成為癌基因依賴途徑。針對ALK融合基因的小分子抑制劑克唑替尼(crizotinib)已經(jīng)作為ALK陽性非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)一線治療首選，其較高的客觀有效率更是開創(chuàng)了靶向治療里程碑。迄今為止，ALK基因異常在多種實體瘤中已有報導(dǎo)，比如乳腺癌[5]、結(jié)腸癌[6]等，同時證實ALK基因異常與惡性腫瘤發(fā)展有相關(guān)性。但目前鮮有研究探索肝癌中ALK基因的表達(dá)情況及臨床意義。

本文基于免疫組化和FISH方法，以確診為HBsAg陽性肝癌患者的石蠟包埋組織切片為研究對象，檢測肝癌中ALK基因的表達(dá)，并評價其臨床病理特征，探討其能否作為判斷預(yù)后及指導(dǎo)靶向藥物治療的一項輔助檢測手段。

材料和方法

1材料

收集2005年6月～2010年10月廣東省人民醫(yī)院共261例經(jīng)病理學(xué)證實的HBsAg陽性肝癌組織標(biāo)本和距離病灶邊緣2 cm的癌旁組織標(biāo)本，所有患者術(shù)前均未接受化療和放療；所有病理標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，有明確的起始時間(手術(shù)時期)、終點時間及終點狀態(tài)(生存、死亡)，死亡患者有明確的死亡時間、死因記錄。研究對象納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)血清學(xué)檢查HBsAg陽性，病理學(xué)診斷為肝細(xì)胞癌；(2)有充足的病理學(xué)標(biāo)本，臨床資料齊備；(3)每個患者均已簽知情同意書,其中男性225例(86.2%)，女性36例(13.8%)，年齡21～82歲，平均52歲。存活組81例，中位生存期45.0月；死亡組180例，中位生存期35.0月。總生存期(overall survival，OS)和無進(jìn)展生存期(progression-free survival，PFS)分別定義為隨機分組開始至死亡/隨訪結(jié)束以及局部復(fù)發(fā)/遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移/隨訪結(jié)束。肝癌微轉(zhuǎn)移是指腫瘤進(jìn)程中播散并存活于血循環(huán)、骨髓等組織器官的微小腫瘤細(xì)胞灶，本研究根據(jù)病理科采用PCR技術(shù)對肝癌、癌旁組織和患者外周血檢測的AFP mRNA結(jié)果判定：AFP的mRNA可作為肝細(xì)胞癌標(biāo)記基因，即檢測到AFP的mRNA說明腫瘤細(xì)胞存在，患者出現(xiàn)微轉(zhuǎn)移。腫瘤的臨床病理分期依據(jù)2002年國際抗癌聯(lián)盟所定的肝癌TNM分期法。

2試劑

兔抗人ALK單克隆抗體購自CST；Ⅱ抗SP免疫組化試劑盒購自北京中杉公司；LSI ALK雙色分離探針購自Vysis；胃蛋白酶反應(yīng)液購自Sigma。

3實驗方法

3.1免疫組化每個蠟塊取4 μm厚連續(xù)切片，將切片放于二甲苯中脫蠟，乙醇梯度水化處理，3%的過氧化氫去離子水消除內(nèi)源性過氧化物酶，EDTA(pH 8.0)修復(fù)液常規(guī)修復(fù)以充分暴露抗原位點。待其自然冷卻后，加封閉液室溫封閉15 min，兔抗人ALK(1∶50)4 ℃孵育過夜，磷酸鹽緩沖液(PBS)漂洗3次，每次5 min，后加 II 抗室溫孵育15 min，PBS 漂洗3次，每次5 min，加鏈霉卵白素室溫孵育15 min，磷酸鹽緩沖液(PBS)漂洗3次，每次5 min，DAB顯色10 min，終止顯色，蘇木素復(fù)染，鹽酸乙醇固定，中性樹膠封片，觀察。實驗結(jié)果由2位病理科醫(yī)生在雙盲情況下觀察組織標(biāo)本的著色程度所得，ALK蛋白陽性表現(xiàn)為細(xì)胞漿內(nèi)呈現(xiàn)棕褐色染色，高倍鏡下(×200)隨機取4個不同視野，評分如下：≥10%腫瘤細(xì)胞中無染色為(-)，微弱的胞漿染色為(+)，中度光滑的胞漿染色為(++),重度顆粒狀胞漿染色為(+++)。

3.2FISH作為診斷ALK基因狀態(tài)的金標(biāo)準(zhǔn)，我們對261例病理切片標(biāo)本進(jìn)行FISH檢測。具體實驗步驟按照說明書進(jìn)行：切片脫蠟、脫水，腫瘤區(qū)域滴加4 g/L胃蛋白酶反應(yīng)液(1∶10 000)，消化15 min；再脫水，室溫晾干；隨后切片加入5 μL稀釋的ALK探針，變性，放入預(yù)熱的雜交盒中過夜；次日清洗、干燥，滴加適量DAPI復(fù)染劑到雜交區(qū)域，觀察結(jié)果。ALK易位陽性定義為：計數(shù)100個完整細(xì)胞，其中≥15%細(xì)胞紅綠信號分離或者出現(xiàn)單紅信號。然而目前ALK拷貝數(shù)增加尚無明確定義，本文參考了Pietrantonio等[7]在結(jié)腸癌研究中的結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：計數(shù)細(xì)胞中≥10%的細(xì)胞里出現(xiàn)3～5 ALK拷貝數(shù)稱為ALK拷貝數(shù)增加，出現(xiàn)≥6 ALK拷貝數(shù)稱為ALK基因擴增。

4統(tǒng)計學(xué)處理

魚類的性成熟受遺傳和環(huán)境的雙重影響，對某一物種來說，既具備相對的穩(wěn)定性，又表現(xiàn)出一定的可塑性［20］。從云南鰍的基礎(chǔ)生物學(xué)特征研究中得出，草海云南鰍最小性成熟的年齡為1＋齡，雄魚最小體長為 1.22 cm，體重 0.21 g；雌魚最小體長 3.01 cm，體重0.41 g。在未達(dá)到性成熟之前，雄魚和雌魚在外部形態(tài)上無顯著差異，較難區(qū)分，性成熟后可以根據(jù)成熟的雌魚腹部膨大突出，能夠看到卵巢鼓起的輪廓，個體比雄魚小，生殖孔出現(xiàn)淡淡的紅色等特征可以區(qū)分雌雄。

應(yīng)用SPSS 10.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。ALK蛋白表達(dá)情況與其臨床病例關(guān)系的比較采用2檢驗，生存率采用Kaplan-Meier法計算，生存期差別的比較采用Log-Rank時序檢驗。Cox比例風(fēng)險模型評估影響患者生存的各變量，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

1免疫組織化學(xué)檢測到ALK蛋白在HBsAg陽性肝癌組織中的表達(dá)

在261例HBsAg陽性肝癌組織標(biāo)本中檢測出117例呈ALK蛋白陽性，表現(xiàn)為不同程度的棕色胞漿染色，其陽性率為44.8%，而癌旁組織中未檢測到ALK表達(dá)或僅有微弱表達(dá)，見圖1。

2FISH檢測ALK狀態(tài)

在所有261例HBsAg陽性肝癌和癌旁標(biāo)本中，均未檢測到ALK易位或擴增，然而有85例肝癌標(biāo)本檢測出ALK基因拷貝數(shù)增加(這里稱之為FISH陽性)，陽性率為32.6%，而癌旁組織標(biāo)本呈陰性。在85例FISH陽性的肝癌標(biāo)本中，82例的IHC檢測也為陽性，見圖1。

Figure 1.Anaplastic lymphoma kinase (ALK) expression in HBsAg-positive hepatocellular carcinoma samples (×200). A: negative ALK staining in para-carcinoma cells detected by immunohistochemistry (IHC); B: cytoplasmic staining in the tumor cells detected by IHC; C: negativeALKgene copy number gain in para-carcinoma tissue detected by fluorescenceinsituhybri-dization (FISH) analysis; D: positiveALKgene copy number gain in tumor detected by FISH.

圖1IHC和FISH檢測ALK在HBsAg陽性肝癌患者中的狀態(tài)

3ALK蛋白表達(dá)與臨床病理關(guān)系

本研究探討了ALK表達(dá)與HBsAg陽性肝癌患者的臨床病理聯(lián)系，相對于DNA和RNA，蛋白表達(dá)更穩(wěn)定，其結(jié)果更有可比性，所以我們的數(shù)據(jù)分析均基于IHC檢測結(jié)果，見表1。Crosstabs分析及Chi-Square Tests分析可見ALK蛋白表達(dá)與患者性別、腫瘤數(shù)目和微轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P<0.05)；即男性、多發(fā)腫瘤(腫瘤數(shù)目≥2個)、有微轉(zhuǎn)移患者的ALK陽性表達(dá)率明顯高于女性、單發(fā)腫瘤、無微轉(zhuǎn)移患者。而與患者的年齡、AFP水平、腫瘤大小、臨床分期等無關(guān)。

表1ALK與HBsAg陽性肝癌患者的臨床病理關(guān)系

Table 1.Correlation between HBsAg-positive patients’ clinicopathological features and the protein expression of anaplastic lymphoma kinase (ALK)

CharacteristicsnALKproteinNegativePositivePAge(year)atdiagnosis <60207117(56.5%)90(43.5%)0.391 ≥605427(50.0%)27(50.0%)Gender Male225117(52.0%)108(48.0%)0.010 Female3627(75.0%)9(25.0%)AFP(μg/L) <2011463(55.3%)51(44.7%)0.979 ≥2014781(55.1%)66(44.9%)Cirrhosis Absent8954(60.7%)35(39.3%)0.199 Present17290(52.3%)82(47.7%)Tumorsize(cm) <514481(56.3%)63(43.7%)0.698 ≥511763(53.8%)54(46.2%)Tumormultiplicity Single216126(58.3%)90(41.7%)0.024 Multiple4518(40.0%)27(60.0%)Clinicalstage I～I(xiàn)I13883(60.1%)55(39.9%)0.087 III～I(xiàn)V12361(49.6%)62(50.4%)Vascularinvasion No15690(57.7%)66(42.3%)0.318 Yes10554(51.4%)51(48.6%)Micro-metastases No193116(60.1%)77(39.9%)0.007 Yes6828(41.2%)40(58.8%)

AFP: alpha-fetoprotein.

截止到2013年6月1日隨訪結(jié)束，69.0%(180/261)的HBsAg陽性肝癌患者死亡，均死于腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，中位隨訪時間36.0月(0.6～78月)，11例(4.2%)患者失訪。本研究進(jìn)一步評估了ALK基因?qū)BsAg陽性肝癌患者預(yù)后生存的影響。結(jié)果顯示ALK陰性患者的OS和PFS均明顯高于ALK陽性患者(P<0.05),見圖2。

5影響HCC預(yù)后的Cox分析

利用Cox比例風(fēng)險模型對可能影響HBsAg陽性肝癌預(yù)后的多因素進(jìn)行分析, 包括年齡、性別、AFP水平、肝硬化、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目、臨床分期、血管侵犯、微轉(zhuǎn)移、ALK蛋白表達(dá)，結(jié)果見表2。單因素和多因素分析結(jié)果表明，ALK蛋白表達(dá)是HBsAg陽性肝癌患者PFS的獨立預(yù)后因子(P<0.05)，然而對患者的OS無顯著影響。

討論

肝癌是一種臨床和病理都異質(zhì)性極高的惡性腫瘤，其發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移與多種基因突變、細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路和新生血管增生異常等密切相關(guān)，盡管目前的臨床研究已經(jīng)取得很大進(jìn)展，但其發(fā)病機理尚不完全清楚，總生存率提高甚微。因此加強肝癌病因?qū)W研究，找出其發(fā)生發(fā)展過程中起關(guān)鍵作用的相關(guān)基因，探索分子靶向治療的潛在靶點至關(guān)重要。目前研究中較為肯定的可以作為肝癌分子靶點相關(guān)基因包括EGFR、TGF-β、c-MET等[8]。近年來，ALK基因已經(jīng)引起廣泛關(guān)注，其異常與人類腫瘤的惡性轉(zhuǎn)化密切相關(guān)，特別是ALK抑制劑治療EML4-ALK陽性NSCLC的高有效率更成為腫瘤治療上一個里程碑，大量研究對多種實體瘤中ALK基因狀態(tài)進(jìn)行探討。我們希望在此基礎(chǔ)上，通過進(jìn)一步檢測ALK基因與肝癌發(fā)生發(fā)展和預(yù)后關(guān)系，根據(jù)其在肝癌中的作用，找出新的分子診斷、靶向治療和預(yù)后判定新方法，從而在基因水平實現(xiàn)肝癌個體化治療。

Figure 2. Kaplan-Meier survival curves of HBsAg-positive hepatocellular carcinoma samples.

圖2HBsAg陽性肝癌患者的OS和PFS生存曲線

表2261例HBsAg陽性肝癌患者PFS的Cox分析

Table 2. Univariate and multivariate analysis of progression-free-survival (PFS) in 261 HBsAg-positive hepatocellular carcinoma patients

CovariateUnivariateanalysisMultivariateanalysisHR(95%CI)PHR(95%CI)PAge(year)atdiagnosis <60vs≥601.097(0.771-1.562)0.606Gender Malevsfemale0.950(0.607-1.485)0.820AFP(μg/L) <20vs≥200.979(0.728-1.317)0.889Cirrhosis Absentvspresent1.067(0.775-1.469)0.693Tumorsize(cm) <5vs≥51.087(0.810-1.459)0.577Tumormultiplicity Singlevsmultiple1.002(0.682-1.470)0.993Clinicalstage I～I(xiàn)IvsIII～I(xiàn)V1.477(1.095-1.992)0.011Vascularinvasion Novsyes1.113(0.854-1.450)0.430Micro-metastases Novsyes2.179(1.584-2.997)<0.0012.007(1.336-3.014)0.001ALKprotein Positivevsnegative1.432(1.064-1.926)0.0181.369(1.006-1.865)0.046

ALK: anaplastic lymphoma kinase; AFP: alpha-fetoprotein; HR: hazard ratios; 95% CI: 95% confidential interval.

本研究對261例HBsAg陽性肝癌患者組織標(biāo)本的ALK基因狀態(tài)進(jìn)行檢測，旨在觀察肝癌中是否普遍存在ALK表達(dá)或者基因變異(包括易位、擴增、突變)，并探討其與臨床病理及預(yù)后之間的關(guān)系。IHC和FISH檢測分別顯示ALK蛋白高表達(dá)(44.8%)，ALK基因拷貝數(shù)增加(32.6%)，并且2種檢測結(jié)果具有一致性；85例FISH陽性標(biāo)本中，82例IHC檢測也為陽性，而FISH檢測特異性更高(97.9%)，這與Wu等[9]的研究結(jié)果相似。然而值得注意的是，ALK蛋白高表達(dá)或者ALK基因拷貝數(shù)增加并不意味著存在ALK基因易位。有研究發(fā)現(xiàn)[10]，在NSCLC患者中，ALK基因拷貝數(shù)增加或擴增比較普遍，但是ALK基因易位卻罕見，僅占全部患者的3%～5%；類似的結(jié)果在鼻咽癌中也得到證實[11]。最近，一項回顧性研究[12]也觀察到ALK基因拷貝數(shù)增加在肝癌患者中比較常見(陽性率13.15%)，但是不存在ALK基因變異。這里，我們的實驗均未檢測到ALK基因位點易位、擴增、突變，與上述研究結(jié)果一致，同樣也提示ALK基因在HBsAg陽性肝癌中上調(diào)，是肝癌一個新的分子標(biāo)志物。

本研究進(jìn)一步探討了ALK蛋白與HBsAg陽性肝癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系，結(jié)果表明ALK蛋白表達(dá)與患者性別、腫瘤數(shù)目和微轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，也就是說，ALK在男性、多發(fā)腫瘤、存在微轉(zhuǎn)移的患者中明顯高于女性、單發(fā)腫瘤、無微轉(zhuǎn)移者，提示ALK在肝癌發(fā)生、發(fā)展、浸潤、轉(zhuǎn)移過程中起到重要作用，ALK陽性的肝癌有可能具有更強的侵襲性。過去幾年，大量的實驗?zāi)Ｐ拖到y(tǒng)已經(jīng)充分證實ALK基因過表達(dá)與腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因相互作用，在轉(zhuǎn)錄或翻譯水平調(diào)控腫瘤的侵襲，最終導(dǎo)致器官浸潤、腫瘤擴散[13]。此外，邵春奎等[14]也曾報道ALK蛋白在肝癌過表達(dá)，并與腫瘤發(fā)展相關(guān)，但是該研究涉及病例數(shù)僅有2例，未做進(jìn)一步統(tǒng)計分析。我們的實驗數(shù)據(jù)表明ALK過表達(dá)在HBsAg陽性肝癌發(fā)展、轉(zhuǎn)移中起著至關(guān)重要的作用。

眾所周知，原癌基因激活和腫瘤抑制子失活是惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展基礎(chǔ)，確切地說，ALK癌基因由它內(nèi)源性配體肝素結(jié)合細(xì)胞因子(midkine，MK)和多效生長因子(pleiotrophin，PTN)激活，這兩個配體在腫瘤細(xì)胞中促進(jìn)有絲分裂和血管生成。激活的ALK基因高表達(dá)于肝癌細(xì)胞中，觸發(fā)一個下游信號級聯(lián)復(fù)雜系統(tǒng)，包括PI3K/AKT和MAPK旁路，引起一系列細(xì)胞生物學(xué)變化，介導(dǎo)調(diào)控細(xì)胞增殖、運動和凋亡。因此，ALK基因在驅(qū)動體內(nèi)、外腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中具有重要作用[7, 13]。最近Hasan等[13]研究闡明成神經(jīng)細(xì)胞瘤里，作用于腫瘤進(jìn)程中關(guān)鍵性增殖通路的MYC蛋白同時調(diào)控ALK基因，使遺傳穩(wěn)定性發(fā)生改變，干擾細(xì)胞正常活動而發(fā)生腫瘤，這在另一方面證實ALK基因等致癌作用。有趣的是，Di Paolo等[15]也觀察到在成神經(jīng)細(xì)胞瘤中，使用RNA干擾敲除ALK，不論是否存在基因融合，都會導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞增殖下調(diào)、凋亡上調(diào)，最終抑制患者腫瘤生長，延長生存。綜上所述，ALK基因參與了HBsAg陽性肝癌的發(fā)展、轉(zhuǎn)移過程，可作為臨床監(jiān)測病情的一個重要指標(biāo)。

近年來，研究已證實[15]，多種人類惡性腫瘤中ALK基因過表達(dá)常預(yù)示預(yù)后不良，如乳腺癌、基底細(xì)胞癌、成纖維細(xì)胞瘤等。同樣，本研究發(fā)現(xiàn)在HBsAg陽性肝癌中，ALK蛋白陽性組的OS和PFS明顯低于陰性組，且COX分析也表明ALK蛋白表達(dá)是影響患者PFS的不良預(yù)后因素。但是Jia等[12]關(guān)于肝癌的研究中，所得結(jié)果卻與我們相反，其數(shù)據(jù)顯示ALK基因拷貝數(shù)增加可以預(yù)測HBsAg陰性肝癌患者預(yù)后生存，然而對HBsAg陽性患者無影響。這種差異可能原因是入組患者遺傳背景不同以及研究方法有異?？傊?，ALK蛋白表達(dá)上調(diào)是HBsAg陽性肝癌患者預(yù)后不良的標(biāo)志。

由于本研究屬于回顧性分析，研究過程中部分患者臨床資料失訪，特別是肝癌術(shù)后未再入院治療的病人，不可避免引起潛在偏差。因此，我們需要進(jìn)行更多的體內(nèi)外試驗證實上述結(jié)果。此外，是否ALK抑制劑能夠有效治療ALK蛋白過表達(dá)的HBsAg陽性肝癌患者尚未明確，有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，ALK基因有可能成為HBsAg陽性肝癌患者轉(zhuǎn)移和預(yù)后不良的一個新的預(yù)測因子，影像學(xué)診斷聯(lián)合ALK基因檢測有助于判斷新發(fā)肝癌病例預(yù)后，ALK有可能成為肝癌治療中新的分子靶點。

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(責(zé)任編輯： 林白霜， 羅森)

Status and clinical significance ofALKgene expression in HBsAg-positive hepatocellular carcinoma patients

LIU Jian-hua1, JIN Hao-sheng2, TIAN Hong-xia3, ZHANG Xu-chao3, MA Dong1

(1Department of Gastrointestinal Oncology, Cancer Center,2Department of Hepatobiliary Surgery,3Medical Research Center, Lung Cancer Institute, Guangdong General Hospital, Guangdong Academy of Medical Sciences, Guangzhou 510180, China. E-mail: madong8005@126.com)

[ABSTRACT]AIM: To detect the status of anaplastic lymphoma kinase (ALK) in the HBsAg-positive hepatocellular carcinoma (HCC) patients, and to investigate the relationship between ALK gene expression or clinical features or prognosis.METHODS: The surgical patients with HBsAg-positive HCC (n=261) were followed up for at least 2 years. The expression of ALK was examined by the methods of immunohistochemistry (IHC) and fluorescence in situ hybridization (FISH) in their archival paraffin embedded tissue specimens, and it was statistically analyzed whether ALK gene abnormalities were associated with patients’ clinical features. RESULTS: Over-expression of ALK protein and ALK gene copy number gain were 44.8% observed by IHC and 32.6% by FISH. The expression of ALK was highly correlated with gender, tumor multiplicity and micrometastasis (P<0.05), but not with age, AFP, tumor size, clinical stage, etc. The survival rate in the patients with positive ALK expression was much lower than that in the patients with negative ALK expression (P<0.01). Multivariate analysis indicated that ALK expression and micrometastasis were both significant prognostic factors of HCC. CONCLUSION: Over-expression of ALK in HBsAg-positive HCC tissues increases the possibilities of growth and metastasis, and ALK may serve as fairly a good indicator for biologic behavior and prognosis of HCC.

[KEY WORDS]ALK gene; HBsAg; Hepatocellular carcinoma

[文章編號]1000- 4718(2016)05- 0841- 06

[收稿日期]2016- 01- 26[修回日期] 2016- 03- 21

*[基金項目]廣州市科技攻關(guān)基金資助項目(No. 2011B031800285)

通訊作者△Tel： 020-81884713-80521； E-mail: madong8005@126.com

[中圖分類號]R363； R730.23

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

doi:10.3969/j.issn.1000- 4718.2016.05.012

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