吳鳳芝， 唐　祺， 吳　妍， 鄧曉媚， 劉　圣*

（1.安徽省立醫(yī)院，安徽合肥230001；2.安徽中醫(yī)藥大學(xué)，安徽合肥230031）

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注射用丹參（凍干）調(diào)配技術(shù)正交優(yōu)化及其成品輸液質(zhì)量穩(wěn)定性

吳鳳芝1， 唐祺2， 吳妍1， 鄧曉媚1， 劉圣1*

（1.安徽省立醫(yī)院，安徽合肥230001；2.安徽中醫(yī)藥大學(xué)，安徽合肥230031）

摘要：目的 優(yōu)化注射用丹參（凍干）調(diào)配技術(shù)，并考察其不同溶媒成品輸液的質(zhì)量及穩(wěn)定性。方法 采用L9（34）正交試驗(yàn)法優(yōu)化注射用丹參（凍干）的溶解方法，溶解液分別用5％、10％葡萄糖、0.9％氯化鈉、葡萄糖氯化鈉、復(fù)方氯化鈉以及乳酸鈉林格注射液稀釋為成品輸液，于室溫（25℃）自然光線下，考察0～8 h內(nèi)各成品輸液的性狀、pH、不溶性微粒、主要成分丹參素鈉與原兒茶醛含有量變化。結(jié)果 注射用丹參（凍干）溶解完全，不溶性微粒數(shù)目較少，符合2010年版《中國藥典》規(guī)定。在室溫自然光線下，8 h內(nèi)各成品輸液性狀、pH無顯著變化。用5％、10％葡萄糖、0.9％氯化鈉、葡萄糖氯化鈉注射液稀釋后的成品輸液的不溶性微粒數(shù)目符合規(guī)定，而且在6 h內(nèi)穩(wěn)定，但用復(fù)方氯化鈉以及乳酸鈉林格注射液稀釋者均不符合規(guī)定。用乳酸鈉林格注射液稀釋的成品輸液中丹參素鈉相對(duì)含有量在4 h內(nèi)下降程度超過10％，而其他5種在6 h內(nèi)穩(wěn)定；各成品輸液中原兒茶醛相對(duì)含有量均在8 h內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)論注射用丹參（凍干）先用6 mL滅菌注射用水溶解，強(qiáng)烈振蕩1.5 min后，溶解液稀釋于500 mL 5％、10％葡萄糖、0.9％氯化鈉或葡萄糖氯化鈉注射液中，其成品輸液于室溫自然光線下6 h內(nèi)性質(zhì)穩(wěn)定。

關(guān)鍵詞：注射用丹參（凍干）；調(diào)配技術(shù)；成品輸液；質(zhì)量穩(wěn)定性；正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

注射用丹參（凍干）是由丹參經(jīng)過適宜加工所制成的凍干粉制劑，其規(guī)定用量為一次400 mg，臨用前先用滅菌注射用水、0.9％氯化鈉或5％葡萄糖注射液充分溶解，再稀釋于500 mL 0.9％氯化鈉或5％葡萄糖注射液后靜脈滴注。但在臨床實(shí)際應(yīng)用中，存在以10％葡萄糖、葡萄糖氯化鈉注射液等為稀釋溶媒的現(xiàn)象，與藥品說明書規(guī)定不符，而且其成品輸液的質(zhì)量及穩(wěn)定性鮮有報(bào)道。由于注射用丹參（凍干）不良反應(yīng)或事件的報(bào)告越來越多［1］，為保證其臨床應(yīng)用的安全性及有效性，本實(shí)驗(yàn)擬采用L9（34）正交試驗(yàn)，以注射用丹參（凍干）溶解溶劑種類、溶劑體積、振蕩時(shí)間及振蕩強(qiáng)度為影響因素，以溶解液中不溶性微粒總數(shù)為考察指標(biāo)，優(yōu)化溶解方式，然后將溶解液分別稀釋于500 mL 5％、10％葡萄糖、0.9％氯化鈉、葡萄糖氯化鈉、復(fù)方氯化鈉及乳酸鈉林格注射液中，于室溫（25℃）自然光條件下，考察0～8 h內(nèi)各成品輸液的質(zhì)量及其穩(wěn)定性，旨在為臨床靜脈調(diào)配注射用丹參（凍干）提供科學(xué)合理的數(shù)據(jù)支持。

1 儀器和試藥

LC-2010AHT HPLC色譜儀，包括紫外檢測(cè)器、四元低壓泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、LabSolutions Version 5.51色譜工作站（日本島津公司）；GWF-5JS微粒分析儀（天河醫(yī)療儀器有限公司）；PHS-3C電子PH計(jì)（上海雷磁儀器廠）；FA2004B電子天平（上海精科天美科學(xué)儀器有限公司）；KJ-202振蕩器（江蘇康健醫(yī)療用品有限公司）；KQ2200E數(shù)據(jù)超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。丹參素鈉（批號(hào)110855-201412，含有量99.5％）、原兒茶醛（批號(hào)110810-201007，含有量98.2％）對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院）；注射用丹參（凍干）（哈藥集團(tuán)中藥二廠，批號(hào)1410713，400 mg）；5％葡萄糖（批號(hào)14080293，500 mL）、10％葡萄糖（批號(hào)13091692，500 mL）、0.9％氯化鈉（批號(hào)14072891，500 mL）、葡萄糖氯化鈉（批號(hào)14061994，500 mL）、復(fù)方氯化鈉（批號(hào)14081255，500 mL）注射液（安徽豐原藥業(yè)股份有限公司）；乳酸鈉林格注射液（中國大冢制藥有限公司，批號(hào)4G70G5，500 mL）。甲醇為色譜純；磷酸為分析純；水為滅菌注射用水。

2 方法與結(jié)果

2.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 采用L9（34）正交設(shè)計(jì)，以溶劑種類（A）、溶劑體積（B）、振蕩時(shí)間（C）、振蕩強(qiáng)度（D）為考察因素，以溶解液中不溶性微粒總數(shù)為評(píng)價(jià)指標(biāo)。因素水平見表1，結(jié)果見表2，方差分析見表3。

表1　因素水平

表2　正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

表3　方差分析

由表2和表3可知，以不溶性微粒（≥10 μm）總數(shù)為評(píng)價(jià)指標(biāo)時(shí)，注射用丹參（凍干）的最佳調(diào)配方法為A1B3C2D3，最主要的影響因素為A，其次為C、D、B，即溶劑種類具有顯著性影響（p<0.05）；以不溶性微粒（≥25 μm）總數(shù)為評(píng)價(jià)指標(biāo)時(shí)，亦得到同樣結(jié)果。綜上所述，確定注射用丹參（凍干）的最佳調(diào)配方法為A1B3C2D3，即采用注射用水6 mL，強(qiáng)烈振蕩1.5 min。

2.2 最佳調(diào)配方法驗(yàn)證 按“2.1”項(xiàng)下方法，取注射用丹參（凍干）400 mg，注入滅菌注射用水6 mL，強(qiáng)烈振蕩1.5 min，靜置后置于取樣器上，測(cè)定溶解液所不溶性微?？倲?shù)，平行3次，結(jié)果見表4。

表4　驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

《中國藥典》2010年版一部附錄“不溶性微粒檢查法”規(guī)定，標(biāo)示量為100 mL以下的注射用濃溶液的每個(gè)供試品容器中，10 μm及以上的微粒不得超過6 000粒，25 μm及以上的微粒不得超過600粒［2］。驗(yàn)證結(jié)果表明，該調(diào)配方法較好。

2.3 成品輸液的性狀、pH及不溶性微?？疾?/p>

2.3.1 溶液制備

2.3.1.1 對(duì)照品溶液 精密稱取丹參素鈉1.0 mg，置于10 m L量瓶中，蒸餾水定容，制成100 μg/mL貯備液，再依次稀釋成10、20、40、60、80、100 μg/mL對(duì)照品溶液；精密稱取原兒茶醛1.0 mg，置于10 mL量瓶中，蒸餾水定容，稀釋10倍，制成10 μg/mL貯備液，再依次稀釋成1、2、4、6、8、10 μg/mL對(duì)照品溶液。

2.3.1.2 成品輸液 按“2.1”項(xiàng)下方法，取注射用丹參（凍干）6支（400 mg/支），注入滅菌注射用水6 mL，強(qiáng)烈振蕩1.5 min后，分別用5％、10％葡萄糖、0.9％氯化鈉、葡萄糖氯化鈉、復(fù)方氯化鈉及乳酸鈉林格注射液500 mL稀釋成成品輸液，置室溫下8 h，備用。

2.3.2 成品輸液性狀 觀察室溫（25℃）條件下0、2、4、6、8 h各成品輸液的色澤和澄明度，發(fā)現(xiàn)均為褐色澄明液體，而且在8 h內(nèi)無明顯變化。

2.3.3 成品輸液pH 按2010年版《中國藥典》一部附錄“pH值測(cè)定法”，測(cè)定室溫（25℃）條件下0、2、4、6、8 h各成品輸液的pH值，結(jié)果見表5，可知同一種成品輸液在8 h內(nèi)的pH值無明顯變化。

2.3.4 成品輸液不溶性微粒 按《中國藥典》2010年版一部附錄“不溶性微粒檢查法”，測(cè)定室溫（25℃）條件下0、2、4、6、8 h各成品輸液的不溶性微粒數(shù)［2］。結(jié)果，用5％、10％葡萄糖、0.9％氯化鈉、葡萄糖氯化鈉注射液稀釋后的成品輸液中，每1 m L含10 μm及以上的不溶性微粒不超過25粒，25 μm及以上的微粒不超過3粒，符合規(guī)定，而且在6 h內(nèi)穩(wěn)定。然而，用復(fù)方氯化鈉及乳酸鈉林格注射液稀釋者均不符合規(guī)定，具體見表6。

表5　各成品輸液pH值

表6　成品輸液不溶性微粒變化（粒）

2.4 HPLC法測(cè)定丹參素鈉和原兒茶醛的含有量

2.4.1 色譜條件和系統(tǒng)適應(yīng)性［3-4］Intersil ODS-SP色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動(dòng)相為甲醇-5％磷酸（18∶82）；檢測(cè)波長為281 nm；體積流量為1.0 mL/min；柱溫為30℃；進(jìn)樣量為10 μL。取丹參素鈉、原兒茶醛、6種空白和6種成品輸液分別進(jìn)樣，發(fā)現(xiàn)丹參素鈉出峰時(shí)間約為4.1 min，而原兒茶醛約為6.8 min，并且空白輸液對(duì)照無干擾。具體見圖1。

2.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 取“2.3.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，在“2.4.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣，以色譜峰面積（Y）對(duì)溶液質(zhì)量濃度（X）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程分別為丹參素鈉Y=60 740.3 X-42 289（r=0.999 9），在10～100 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；原兒茶醛Y=64 210.2X-34 721（r= 0.999 8），在1～10 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4.3 精密度試驗(yàn) 取“2.3.1”項(xiàng)下丹參素鈉（20、60、100 μg/mL）及原兒茶醛（2、6、10 μg/mL）對(duì)照品溶液，在“2.4.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣3次，測(cè)得丹參素鈉峰面積RSD分別為0.29％、1.01％與1.17％，而原兒茶醛分別為0.17％，0.92％，0.87％，表明儀器精密度良好。

2.4.4 回收率試驗(yàn) 精密吸取“2.3.1”項(xiàng)下100 μg/mL丹參素鈉、10 μg/mL原兒茶醛對(duì)照品貯備液各5 mL，分別用5％、10％葡萄糖、0.9％氯化鈉、葡萄糖氯化鈉、復(fù)方氯化鈉及乳酸鈉林格注射液5 mL稀釋，得到50 μg/mL丹參素鈉及5 μg/mL原兒茶醛溶液，在“2.4.1”項(xiàng)色譜條件下各測(cè)定6次。結(jié)果，丹參素鈉平均回收率分別為102.2％、100.4％、101.3％、98.7％、102.5％、99.7％，RSD分別為0.31％、1.10％、0.83％、1.03％、0.83％、1.03％；原兒茶醛平均回收率分別為104.1％、98.6％、99.7％、105.0％、103.1％、102.3％，RSD分別為0.89％、1.12％、1.02％、0.35％、0.86％、0.23％。

2.4.5 各成品輸液中有效成分的測(cè)定 取“2.3.1”項(xiàng)下成品輸液，在“2.4.1”項(xiàng)色譜條件下于0、2、4、6、8 h進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果，在用5％、10％葡萄糖、0.9％氯化鈉、葡萄糖氯化鈉、復(fù)方氯化鈉注射液稀釋的成品輸液中，丹參素鈉相對(duì)含有量在6 h內(nèi)，原兒茶醛相對(duì)含有量在8 h內(nèi)的下降程度均不超過10％；用乳酸鈉林格注射液稀釋的成品輸液中，丹參素鈉相對(duì)含有量的下降程度較快，而原兒茶醛較穩(wěn)定。具體見表7和表8。

表7　成品輸液中丹參素鈉相對(duì)含有量變化

表8　成品輸液中原兒茶醛相對(duì)含有量變化

注：1～6分別為5％、10％葡萄糖、0.9％氯化鈉、葡萄糖氯化鈉、復(fù)方氯化鈉及乳酸鈉林格注射液圖1　HPLC色譜圖

3 討論

丹參屬于唇形科雙子葉植物，其最主要的用藥部位是干燥的根與莖，具有祛瘀止痛、活血調(diào)經(jīng)、養(yǎng)血安神的功效。注射用丹參（凍干）是將丹參通過現(xiàn)代化中藥提取工藝精細(xì)提純而成，較丹參注射液具有更高的安全性與更好的療效。其藥理作用明確，具有擴(kuò)血管、改善微循環(huán)障礙、改善血流變學(xué)、抗凝血與促纖維蛋白溶解、抗血小板聚集、抑制脂質(zhì)過氧化和清除氧自由基等作用［5］，在臨床上得到普遍認(rèn)可，但相關(guān)不良反應(yīng)或事件的報(bào)道也不斷出現(xiàn)［6-7］。由于成品輸液的質(zhì)量與藥品不良反應(yīng)或事件的發(fā)生密切相關(guān)，故本實(shí)驗(yàn)通過優(yōu)化注射用丹參（凍干）的調(diào)配方式，考察其經(jīng)不同溶劑稀釋后的穩(wěn)定性，對(duì)臨床安全有效應(yīng)用該制劑具有較高的指導(dǎo)意義。

正交試驗(yàn)結(jié)果表明，溶劑種類對(duì)注射用丹參（凍干）調(diào)配質(zhì)量的影響最顯著，其中滅菌注射用水的溶解效果比0.9％氯化鈉和5％葡萄糖更好。綜合考慮溶劑體積、振蕩時(shí)間及振蕩強(qiáng)度，將注射用丹參（凍干）用6 mL注射用水強(qiáng)烈振蕩1.5 min，所得溶解液中含10 μm及以上的不溶性微粒數(shù)約326個(gè)，25 μm及以上的不溶性微粒約10個(gè)，符合2010年版《中國藥典》一部附錄規(guī)定，故該方法可作為臨床溶解注射用丹參（凍干）的最優(yōu)調(diào)配方式。

靜脈輸液中不溶性微粒過多，會(huì)造成局部血管堵塞、供血不足，產(chǎn)生靜脈炎、水腫、肉芽腫、過敏反應(yīng)、熱源樣，甚至形成腫瘤或腫瘤樣反應(yīng)［8-9］。注射用丹參（凍干）采用正交試驗(yàn)法溶解后，再以5％、10％葡萄糖、0.9％氯化鈉、葡萄糖氯化鈉稀釋成成品輸液，每1 mL含10 μm及以上的不溶性微粒不超過25個(gè)，含25 μm及以上的不溶性微粒不超過3個(gè)，符合2010年版《中國藥典》一部附錄規(guī)定，而且在6 h內(nèi)穩(wěn)定。然而，用復(fù)方氯化鈉稀釋的成品輸液中，不溶性微粒數(shù)僅在2 h內(nèi)符合標(biāo)準(zhǔn)要求，而用乳酸鈉林格稀釋者在0 h即超出標(biāo)準(zhǔn)，故兩者不可用于注射用丹參（凍干）溶解液的稀釋。

通常情況下，靜脈注射液中若有10％以上的有效成分被分解，則不宜與輸液配伍。注射用丹參（凍干）經(jīng)正交試驗(yàn)法調(diào)配后，以5％、10％葡萄糖、0.9％氯化鈉、葡萄糖氯化鈉或復(fù)方氯化鈉稀釋成成品輸液，其有效成分丹參素鈉的相對(duì)含有量在6 h內(nèi)穩(wěn)定；以乳酸鈉林格稀釋后，其相對(duì)含有量在4 h時(shí)下降程度即超過10％。而且，另一種有效成分原兒茶醛的相對(duì)含有量在各溶劑中8 h內(nèi)均保持穩(wěn)定。為了保證輸液中丹參素鈉在規(guī)定時(shí)間內(nèi)含有量的穩(wěn)定，故不建議臨床上將注射用丹參（凍干）與含鈣離子輸液配伍使用。

各類丹參制劑中的主要有效成分略有差異，其中注射用丹參（凍干）中以水溶性物質(zhì)為主，并且丹參素鈉與原兒茶醛含有量最高。本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法同時(shí)測(cè)定兩者含有量，該方法簡便，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于注射用丹參（凍干）的質(zhì)量控制。但不足之處在于，該制劑成分復(fù)雜，其藥效是中藥所有成分共同作用的結(jié)果，僅以某個(gè)或某幾個(gè)有效成分為指標(biāo)時(shí)，會(huì)偏離中藥的整體觀，故建議結(jié)合離子色譜法等技術(shù)來進(jìn)一步考察其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。另外，隨著輸液品種的不斷增加，輸液容器及裝置的制作材料也越來越多樣化，除了傳統(tǒng)的玻璃材質(zhì)外，還有聚氯乙烯（PVC）、聚烯烴熱塑彈性體（TPE）、聚乙烯（PE）、聚丙烯（PP）等塑料材質(zhì)，不同材料制成的輸液容器及裝置對(duì)這些成分是否有吸附作用，以及調(diào)配的成品輸液對(duì)聚氯乙烯材料中可致癌增塑劑鄰苯二甲酸二乙基己酯（DEHP）是否具有浸提取作用，將在接下來的研究中作進(jìn)一步探討。

綜上所述，為確保注射用丹參（凍干）經(jīng)調(diào)配后成品輸液的穩(wěn)定，在臨床使用過程中推薦其以6 mL滅菌注射用水溶解，強(qiáng)烈振蕩1.5 min后，稀釋于500 mL 5％、10％葡萄糖、0.9％氯化鈉、葡萄糖氯化鈉中。此時(shí)，成品輸液呈褐色澄明樣，pH為4.59～5.99，于室溫自然光線下6 h內(nèi)使用。

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*通信作者：劉 圣（1964—），男，主任藥師，碩士生導(dǎo)師，從事中藥制劑和臨床藥學(xué)研究。Tel：（0551）62284029，E-mail：lslcclhl @163.com

作者簡介：吳鳳芝（1972—），女，主管護(hù)師，從事靜脈藥物調(diào)配質(zhì)量管理研究。Tel：（0551）62284182，E-mail：anhuishywufzh@ 163.com

基金項(xiàng)目：安徽省衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)中醫(yī)藥科研課題（2014zy20）

收稿日期：2015-09-06

doi：10.3969/j.issn.1001-1528.2016.05.043

中圖分類號(hào)：R927.11

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

文章編號(hào)：1001-1528（2016）05-1159-05