許皖　柳海艷　鐘贛生　于雪　張建美　郭巖松　王思睿　修琳琳

100029　北京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院[許皖(碩士研究生)、張建美(碩士研究生)、郭巖松(碩士研究生)、修琳琳(博士研究生)、王思睿(碩士研究生)]，基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院方藥系(鐘贛生、柳海艷)，科研實(shí)驗(yàn)中心(于雪)

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甘遂半夏湯加減甘遂及不同品種甘草對(duì)腹水模型大鼠肝臟CYP450m RNA的影響

許皖柳海艷鐘贛生于雪張建美郭巖松王思睿修琳琳

100029北京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院[許皖(碩士研究生)、張建美(碩士研究生)、郭巖松(碩士研究生)、修琳琳(博士研究生)、王思睿(碩士研究生)]，基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院方藥系(鐘贛生、柳海艷)，科研實(shí)驗(yàn)中心(于雪)

【摘要】目的觀察含不同品種甘草的甘遂半夏湯加減甘遂甘草反藥組合對(duì)腹水模型大鼠肝臟CYP450 mRNA的影響。方法采用Walker-256細(xì)胞制造癌性腹水模型，將Wistar大鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為空白組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、全方炙甘草組、全方炙光果甘草組、全方炙脹果甘草組、去遂炙甘草組、去遂炙光果甘草組、去遂炙脹果甘草組、去炙甘草組、去炙甘草醋甘遂組，共計(jì)11組。空白組和模型組灌胃蒸餾水，其余各給藥組灌胃相應(yīng)藥物。給藥11天后，摘取肝臟，液氮保存，進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)。結(jié)果在CYP2E1 mRNA表達(dá)方面，全方炙甘草組、全方炙脹果甘草表達(dá)下調(diào)，且優(yōu)于全方去掉一味或兩味反藥。三個(gè)甘草品種的甘遂半夏湯的CYP3A1 mRNA、CYP3A2 mRNA表達(dá)上調(diào)，且優(yōu)于全方去掉一味或兩味反藥。結(jié)論(1)全方炙甘草組、全方炙脹果甘草組在CYP450表達(dá)方面表現(xiàn)出一定的藥效作用，其中全方炙甘草組優(yōu)于全方炙脹果甘草，且均優(yōu)于全方去掉一味或兩味反藥組。(2)全方炙光果甘草組則未表現(xiàn)出一定的藥效作用，但也未表現(xiàn)出毒性作用，弱于去掉一味或兩味反藥。

【關(guān)鍵詞】反藥組合；甘遂；炙甘草；炙光果甘草；炙脹果甘草；CYP450 mRNA

“藻戟遂芫俱戰(zhàn)草”屬中藥“十八反”配伍禁忌的范疇，是古人臨床實(shí)踐的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)。一些醫(yī)家認(rèn)為反藥同用相反相激，可以治療沉疾，但另有一些醫(yī)家認(rèn)為反藥同用會(huì)對(duì)人體造成傷害，應(yīng)避免使用。那么，反藥到底能否同用至今尚無(wú)統(tǒng)一的定論，有待于去進(jìn)一步研究。鑒于臨床應(yīng)用中，“相反”藥物配伍多用于特定的病理?xiàng)l件下，因此，本實(shí)驗(yàn)選擇有臨床應(yīng)用基礎(chǔ)的經(jīng)方甘遂半夏湯(含甘遂與甘草反藥組合)，針對(duì)特定的病理?xiàng)l件，即腹水模型進(jìn)行相關(guān)研究。課題前期已經(jīng)對(duì)含甘遂甘草反藥組合對(duì)不同劑量，不同炮制品種，不同配伍比例，不同給藥次數(shù)以及不同入藥方式等方面進(jìn)行了初步的探討。鑒于《中華人民共和國(guó)藥典》中記載甘草為豆科植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch.、脹果甘草GlycyrrhizainflateBat.或光果甘草GlycyrrhizaglabraL.的干燥根和根莖，且甘遂半夏湯原方中未明確標(biāo)明甘草的具體品種。因此，本實(shí)驗(yàn)擬以此為切入點(diǎn)，從甘草不同品種的角度進(jìn)行拆方研究探討反藥能否同用及是否與其品種相關(guān)。本文選取與肝臟藥物代謝密切相關(guān)的CYP2E1、CYP3A1、CYP3A2指標(biāo)進(jìn)行探討，其中藥物會(huì)誘導(dǎo)或抑制肝臟中CYP2E1酶活性的表達(dá),對(duì)藥物的代謝產(chǎn)生影響,可能導(dǎo)致不良反應(yīng)的產(chǎn)生和藥物毒性的加重[1-2]。藥物在聯(lián)合應(yīng)用時(shí)是CYP3A1、CYP3A2代謝酶的誘導(dǎo)劑和抑制劑，可能導(dǎo)致某種藥物的藥效或毒性增強(qiáng)或減弱[3-4]

1材料與方法

1.1材料

1.1.1動(dòng)物Wistar大鼠220只，SPF級(jí)，體質(zhì)量(210～230) g，雄性。由維通利華(北京)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技有限公司提供，許可證號(hào)：SCXK(京)2012-0001。

1.1.2藥物醋甘遂(由安徽豐原銅陵中藥飲片廠提供，批號(hào)120301)為大戟科植物甘遂EuphorbiakansuiT.N.Liou ex T.P.Wang的干燥塊根、炙甘草(由安徽豐原銅陵中藥飲片廠提供，批號(hào)120201)為豆科植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch.的干燥根和根莖；炙光果甘草(由安徽豐原銅陵中藥飲片廠提供，批號(hào)120201)為豆科植物甘草GlycyrrhizaglabraL.的干燥根和根莖；炙脹果甘草(由安徽豐原銅陵中藥飲片廠提供，批號(hào)120201)為豆科植物甘草GlycyrrhizainflateBat.的干燥根和根莖；法半夏(由安徽豐原銅陵中藥飲片廠提供，批號(hào)100701)為天南星科植物半夏Pinellia ternate(Thunb) Breit.的塊莖，經(jīng)甘草和石灰炮制的炮制品；白芍(安徽豐原銅陵中藥飲片廠提供)為毛莨科植物芍藥PaeonialactifloraPall.的根；呋塞米片(江蘇亞邦愛(ài)普森藥業(yè)有限公司，批號(hào)H32021428)。

1.1.3試劑與儀器Trizol RNA提取試劑(美國(guó)Invitrogen公司，批號(hào)66014)；RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司，批號(hào)00169216)；蛋白酶抑制劑混合物(北京康為世紀(jì)生物科技有限公司，批號(hào)2614H)；OligdT(生工生物工程(上海)股份有限公司，批號(hào)109302I)；Light Cycler2.0實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(德國(guó)Roche診斷公司)；image system凝膠成像系統(tǒng)(美國(guó)Alpha Inn tech 公司)；Implen超微量分光光度計(jì)(德國(guó)IMPLEN公司)。

1.2模型復(fù)制

將凍存于-70℃冰箱中的Walker-256癌性細(xì)胞于37℃水浴復(fù)蘇，分為0.6、0.8、1.0 mL劑量注入大鼠體內(nèi)，長(zhǎng)出腹水后再以每只1 mL的劑量注入大鼠體內(nèi)進(jìn)行2次傳代，2次傳代的大鼠長(zhǎng)出腹水后，選取淡黃色的腹水進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，以1.68×109/L注入正式實(shí)驗(yàn)的大鼠體內(nèi)，每只注射1 mL。

1.3分組及給藥

將Wistar大鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為空白組、模型組、陽(yáng)性藥組(呋塞米)、甘遂半夏湯全方炙甘草組(簡(jiǎn)稱全方炙甘草組)、甘遂半夏湯全方炙甘草湯去醋甘遂組(簡(jiǎn)稱全方炙甘草去遂組)、甘遂半夏湯全方炙光果甘草組(簡(jiǎn)稱全方炙光果甘草組)、甘遂半夏湯全方炙光果甘草湯去醋甘遂組(簡(jiǎn)稱全方炙光果甘草去遂組)、甘遂半夏湯全方炙脹果甘草組(簡(jiǎn)稱全方炙脹果甘草組)、甘遂半夏湯全方炙脹果甘草湯去醋甘遂組(簡(jiǎn)稱全方炙脹果甘草去遂組)、甘遂半夏湯全方去甘草組(簡(jiǎn)稱全方去草組)、甘遂半夏湯全方去炙甘草醋甘遂組(簡(jiǎn)稱全方去草遂組)，共11組，每組20只。正常喂養(yǎng)，每天上午除空白組外，模型組灌胃蒸餾水，各給藥組的給藥劑量分別為陽(yáng)性藥組(呋塞米4.2 g/kg)，甘遂半夏湯全方組(5.68 g/kg)，全方去醋甘遂組(5.57 g/kg)，全方去炙甘草組(4.01 g/kg)，全方去草遂組(3.9 g/kg)，均灌胃給藥。

1.4藥物制備方法

課題組前期已經(jīng)對(duì)含甘遂與甘草反藥組合以1∶15配比的高、中、低劑量的甘遂半夏湯全方進(jìn)行了探討，結(jié)果表明低劑量組有效且未顯示出明顯毒性，較適合配伍應(yīng)用[5]。因此本實(shí)驗(yàn)所擬定的甘遂半夏湯處方即為低劑量條件下的：醋甘遂0.11 g(研末)、法半夏0.9 g、白芍1.5 g、炙甘草1.67 g、蜂蜜1.5 g。

甘遂半夏湯藥液的制備：將法半夏、白芍、炙甘草加10倍量水浸泡1小時(shí)，煮沸后小火繼續(xù)煎煮1小時(shí)，第2次加8倍量水煎煮，沸騰后小火繼續(xù)煎煮1小時(shí)，將兩次煎煮的藥液合并，加入蜂蜜，放至水浴鍋上濃縮至1.14 g/mL，臨用時(shí)按比例加入醋甘遂粉末，加入適量水至0.568 g/mL。

甘遂半夏湯去醋甘遂藥液的制備：同甘遂半夏湯藥液的制備，臨用時(shí)不加入醋甘遂，加水稀釋至0.557 g/mL。

甘遂半夏湯去炙甘草藥液的制備：將法半夏、白芍加10倍量水浸泡1小時(shí)，煮沸后小火繼續(xù)煎煮1小時(shí)，第2次加8倍量水煎煮，沸騰后小火繼續(xù)煎煮1小時(shí)，將兩次煎煮的藥液合并，加入蜂蜜，放至水浴鍋上濃縮至0.78 g/mL，臨用時(shí)按比例加入適量醋甘遂，加水稀釋至0.401 g/mL。

甘遂半夏湯去炙甘草醋甘遂藥液的制備：同甘遂半夏湯去炙甘草藥液的制備，臨用時(shí)不加入醋甘遂，加水稀釋至0.39 g/mL。

1.5樣本采集及指標(biāo)檢測(cè)

腹主動(dòng)脈取血后，迅速剖開(kāi)腹腔取出肝臟，在同一部位選取約黃豆大小一塊肝組織，置于凍存管中，液氮凍存。

1.5.1提取肝組織RNA(1)剪取50～100 mg組織，放入已加入1 mL預(yù)冷Trizol的研磨器中勻漿；(2)加0.2 mL(1/5體積)氯仿，先混勻后劇烈振蕩15秒，室溫放置5～10分鐘；(3)4℃離心，15000 rpm，15分鐘；(4)吸取約400 μL液體加等體積異丙醇，顛倒混勻，放置10分鐘。(5)4℃離心，15000 rpm，15分鐘；(6)加1 mL 75%乙醇重懸，4℃離心，12000 rpm，8分鐘。(7)棄上清，超凈臺(tái)內(nèi)室溫干燥5～10分鐘。(8)加200 μL DEPC水溶解RNA樣品。

1.5.2超微量分光光度法檢測(cè)RNA樣品的濃度并計(jì)算純度加1 μL去離子水在檢測(cè)窗口上調(diào)零。擦拭蓋子，加入1 μLRNA樣品，蓋上蓋子開(kāi)始檢測(cè)，并讀取260 nm、280 nm處OD比值及RNA濃度值。

1.5.3結(jié)果分析用記錄的樣品RNA濃度計(jì)算RNA體積，計(jì)算公式為：RNA體積(μL)=3 g×1000/RNA濃度值

1.5.4mRNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA5×逆轉(zhuǎn)錄酶緩沖液：4 μL；dNTP Mixture：2 μL；Oligo(DT)：2 μL；RNA酶抑制劑1 μL；MLV逆轉(zhuǎn)錄酶1 μL；RNA樣品3 μg；TotalRNA Add to 20 μL，按以下條件進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)：37℃ 60分鐘。

1.5.5PCR引物合成引物由生工生物工程(上海)股份有限公司提供，具體堿基序列如表1所示。

1.5.6cDNA擴(kuò)增方法取各組RT反應(yīng)產(chǎn)物按表2、3、4所示配制PCR擴(kuò)增反應(yīng)液。

1.5.7cDNA擴(kuò)增反應(yīng)條件(1)2E1 Stage 1：預(yù)變性，循環(huán)1次，94℃3分鐘；Stage 2：PCR反應(yīng)循環(huán)33次，94℃30秒，55℃30秒，72℃1分鐘，72℃延伸8分鐘。(2)3A1 Stage 1：預(yù)變性，循環(huán)1次，94℃3分鐘；Stage 2：PCR反應(yīng)循環(huán)34次，94℃30秒，55℃40秒，72℃1分鐘，72℃延伸8分鐘。(3)3A2 Stage 1：預(yù)變性，循環(huán)1次，94℃3分鐘；Stage 2：PCR反應(yīng)循環(huán)32次，94℃30秒，55℃30秒，72℃1分鐘，72℃延伸8分鐘。

1.5.8數(shù)據(jù)采集取PCR反應(yīng)液5 μL進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳(CYP2E1為1.2%的膠，CYP3A1和CYP3A2為2%的膠)，取RNA樣品各5 μL，加入6×Lording buffer 1 μL，混勻，將所有液體加入凝膠加樣孔中。以600 bp DNA Ladder marker作為參照，120 V電壓下電泳25分鐘。跑膠結(jié)束后應(yīng)用BIO IMAGING SYSTEM (Gene Snap)照像，AlphViea SA收集數(shù)據(jù)，以GAPDH或β-actin作為內(nèi)標(biāo)，計(jì)算公式：RNA含量=目的基因/GAPDH或β-actin。

表1　PCR引物信息

表2　CYP2E1反應(yīng)體系

表3　CYP3A1反應(yīng)體系

表4　CYP3A2反應(yīng)體系

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2結(jié)果

2.1各組大鼠肝臟CYP2E1 mRNA比較

與空白組比較，全方炙甘草組的大鼠肝臟CYP2E1 mRNA表達(dá)下調(diào)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；全方炙光果甘草組、全方炙脹果甘草組呈現(xiàn)出表達(dá)下調(diào)的趨勢(shì)。

與模型組比較，全方炙甘草組、全方炙脹果甘草組的大鼠肝CYP2E1 mRNA表達(dá)下調(diào)，但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；全方炙光果甘草組及其余給藥組的大鼠肝臟CYP2E1 mRNA表達(dá)上調(diào)，但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

與全方炙甘草組比較，全方炙光果甘草組、全方脹果炙甘草組的大鼠肝臟CYP2E1 mRNA表達(dá)上調(diào)，但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。去遂(剩炙甘草)組、去遂(剩炙光果甘草)組、去草組、去草遂組較相應(yīng)的全方組在大鼠肝臟CYP2E1 mRNA表達(dá)上調(diào)，但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。見(jiàn)表5和圖1。

2.2各組大鼠肝臟CYP3A1 mRNA比較

與空白組比較，模型組、陽(yáng)性藥組、全方炙光果甘草組、全方炙脹果甘草組、去遂炙甘草組大鼠肝臟CYP3A1 mRNA表達(dá)下調(diào)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05或P<0.01)。其余各給藥組的大鼠肝臟CYP3A1 mRNA表達(dá)上調(diào)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

與模型組比較，各給藥組的大鼠肝臟CYP3A1 mRNA表達(dá)上調(diào)，其中全方炙甘草組、全方炙脹果甘草組、遂炙光果甘草組、去遂炙脹果甘草組、去草組、去草遂組的上調(diào)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05或P<0.01)。

圖1　各組大鼠CYP2E1 mRNA電泳結(jié)果

圖2　各組大鼠CYP3A1 mRNA電泳結(jié)果

圖3　各組大鼠CYP3A2 mRNA電泳結(jié)果

分組CYP2E1CYP3A1CYP3A2空白組0.916±0.0430.817±0.0881.098±0.034模型組0.862±0.0580.649±0.015a1.339±0.075a陽(yáng)性藥組0.929±0.0670.676±0.057ac1.077±0.090b全方炙甘草組0.804±0.063a0.884±0.035b1.083±0.033b去遂炙甘草組0.954±0.063c0.706±0.067ac1.328±0.183去草組0.971±0.025bc0.851±0.088b1.218±0.094去草遂組1.015±0.065bc0.764±0.066bc1.283±0.058ac全方炙光果甘草組0.896±0.0540.637±0.040a1.219±0.028a去遂炙光果甘草組0.950±0.0800.833±0.093bd1.210±0.063a全方炙脹果甘草組0.839±0.0760.732±0.093ab0.978±0.063ab去遂炙脹果甘草組0.980±0.030be0.788±0.080b1.173±0.062be

注： 與空白組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05；與全方炙甘草組比較，cP<0.05；與全方炙光果甘草組比較，dP<0.05；與全方炙脹果甘草組比較，eP<0.05；

與全方炙甘草組比較，全方炙光果甘草、全方脹果炙甘草組大鼠肝臟CYP3A1 mRNA表達(dá)下調(diào)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05或P<0.01)。其中全方脹果炙甘草組的的大鼠肝臟CYP3A1 mRNA表達(dá)較全方炙光果甘草組有上調(diào)的趨勢(shì)(P<0.05)。去遂炙光果甘草組、去遂炙脹果甘草組、去草組、去草遂組較相應(yīng)的全方在CYP3A1 mRNA表達(dá)方面呈現(xiàn)上調(diào)的趨勢(shì)(P<0.05)。見(jiàn)表5和圖2。

2.3各組大鼠肝臟CYP3A2 mRNA比較

與空白組比較，全方炙脹果甘草組的大鼠肝CYP3A2 mRNA表達(dá)下調(diào)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，其余各給藥組顯現(xiàn)出上調(diào)的趨勢(shì)，其中模型組、全方炙光果甘草組、去遂(剩炙光果甘草)組、去草遂組的上調(diào)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。

與模型組比較，陽(yáng)性藥組、全方炙甘草組、全方炙脹果甘草組、去遂(剩炙脹果甘草)組的大鼠肝CYP3A2 mRNA表達(dá)下調(diào)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)的差異(P<0.01)。其余給藥組顯現(xiàn)出上調(diào)的趨勢(shì)，但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

與全方炙甘草組比較，全方炙光果甘草組的大鼠肝臟CYP3A2 mRNA表達(dá)上調(diào)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。全方脹果炙甘草組較全方炙光果甘草的大鼠肝臟CYP3A2 mRNA表達(dá)下調(diào)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。去遂(剩炙甘草)組、去遂(剩炙脹果甘草)組、去草組、去草遂組較相應(yīng)的全方組的大鼠肝臟CYP3A2 mRNA表達(dá)略有上調(diào)，但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。見(jiàn)表5和圖3。

3討論

現(xiàn)有的研究發(fā)現(xiàn)，單味中藥甘遂或甘草以及兩藥組合均可誘導(dǎo)CYP2E1活性的增強(qiáng)，進(jìn)而促使甘遂中的前致癌物質(zhì)和毒物轉(zhuǎn)化為致癌物和毒物，其中甘草對(duì)CYP2E1活性的誘導(dǎo)作用強(qiáng)于甘遂，而兩藥組合的誘導(dǎo)作用強(qiáng)于單味藥。在對(duì)CYP3A2的研究中，甘遂對(duì)CYP3A2活性的誘導(dǎo)作用最強(qiáng)，甘草可以抑制CYP3A2的活性從而減慢甘遂中毒性成分的代謝速度[6]。以上研究說(shuō)明甘遂與甘草反藥組合存在基于藥物代謝的相互作用。現(xiàn)有的實(shí)驗(yàn)研究表明，甘遂甘草反藥組合的使用并不是完全禁忌的，而是受不同條件限制的，與肝藥酶存在密切聯(lián)系[7]。

從肝臟CYP2E1 mRNA表達(dá)方面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，含炙甘草醋甘遂反藥組合的甘遂半夏湯全方在降低CYP2E1 mRNA表達(dá)方面均優(yōu)于全方去掉其中一味或兩味反藥。同樣，含炙脹果甘草醋甘遂反藥組合的甘遂半夏湯全方在降低CYP2E1 mRNA表達(dá)方面優(yōu)于全方去掉其中一味或兩味反藥。由此說(shuō)明，這兩個(gè)全方組具有一定的降低惡性腹水大鼠肝臟CYP2E1 mRNA表達(dá)，這可能是其降低惡性腹水模型大鼠進(jìn)一步增多惡化的途徑之一,從而表現(xiàn)出一定的藥效作用。而含炙光果甘草醋甘遂反藥組合的甘遂半夏湯全方在降低CYP2E1 mRNA表達(dá)方面均弱于全方去掉其中一味或兩味反藥，未表現(xiàn)出一定的藥效作用，也未表現(xiàn)出毒性。

在肝臟CYP3A1 mRNA表達(dá)方面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，與模型組比較，全方炙甘草組、全方炙光果甘草組、全方炙脹果甘草組對(duì)大鼠肝臟CYP3A1 mRNA表達(dá)有所上調(diào)，說(shuō)明三個(gè)全方組對(duì)中藥中有毒物質(zhì)的代謝有一定的促進(jìn)作用。其中全方炙甘草組在促進(jìn)毒性物質(zhì)代謝方面優(yōu)于全方炙光果甘草組及全方炙脹果甘草組。從甘草不同品種的拆方實(shí)驗(yàn)來(lái)看，含炙甘草醋甘遂反藥組合的甘遂半夏湯全方在升高CYP3A1 mRNA及CYP3A2 mRNA表達(dá)方面均優(yōu)于全方去掉其中一味或兩味反藥。同樣，含炙脹果甘草醋甘遂反藥組合的甘遂半夏湯全方在升高CYP3A1 mRNA及CYP3A2 mRNA表達(dá)方面均優(yōu)于全方去掉其中一味或兩味反藥。由此說(shuō)明，兩個(gè)全方均表現(xiàn)出一定的藥效作用。而含炙光果甘草醋甘遂反藥組合的甘遂半夏湯全方在升高CYP2E1 mRNA表達(dá)方面弱于全方去掉其中一味或兩味反藥，即未表現(xiàn)出一定的藥效作用，也未表現(xiàn)出毒性。

綜上所述，在全方條件下，全方炙甘草組、全方炙脹果甘草組在CYP450表達(dá)方面表現(xiàn)出一定的藥效作用，可能表現(xiàn)出一定的肝保護(hù)作用，且全方炙甘草組優(yōu)于全方炙脹果甘草。而全方炙光果甘草組則未表現(xiàn)出一定的藥效作用，但也未表現(xiàn)出毒性作用。在拆方條件下，全方炙甘草組、全方炙脹果甘草組在CYP450表達(dá)方面均優(yōu)于去掉一味或兩味反藥，而全方炙光果甘草組弱于去掉一味或兩味反藥，未表現(xiàn)出一定的藥效。

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(本文編輯： 董歷華)

Comparing the effect ofGansuiBanxiadecoction plus or reduce kansui and varieties of glycyrrhiza on the CYP450 mRNA of liver of ascites model rats

XUWan，LIUHai-yan，ZHONGGan-sheng，etal.

SchoolofBasicMedicalSciences，BeijingUniversityofChineseMedicine，Beijing100029，China

【Abstract】ObjectiveTo observe the effect of different varieties of glycyrrhiza and kansui incompatible herbs in Gansui Banxia decoction on liver CYP450 mRNA ascites model rat. MethodsThe Walker-256 cell was used to manufacture carcinomatous ascites model. The Wistar rats were randomly divided into blank group, model group, positive control group, complete formula with Glycyrrhiza uralensis Fisch. group, complete formula with Glycyrrhiza glabra L.group, complete formula with Glycyrrhiza inflata Bat. group, the Glycyrrhiza uralensis Fisch. Without kansui group , the Glycyrrhiza glabra L.without kansui group, the Glycyrrhiza inflata Bat. without kansui group, prescription without glycyrrhiza group, prescription without glycyrrhiza and kansui group, a total of 11 group. The blank control group and model group were given distilled water, the rest of the drug group were given corresponding drugs. After 11 days of treatment, the liver was removed and stored in liquid nitrogen and saved for PCR experiment. ResultsThe expression of CYP2E1 mRNA in complete formula with Glycyrrhiza uralensis Fisch. group and complete formula with Glycyrrhiza glabra L. Group were down-regulation and superior to add and subtract the prescription. CYP3A1 and CYP3A2 mRNA expression in the three complete formula groups with three species of glycyrrhiza were up-regulated, and better than add and subtract the prescription. Conclusion(1) CYP450 expression in complete formula with Glycyrrhiza uralensis Fisch. group and complete formula Glycyrrhiza inflata Bat. group showed certain effect, which Glycyrrhiza uralensis Fisch. group is better than the roast Glycyrrhiza inflata Bat., and was better than the group which was added and subtracted the prescription. (2) The complete formula with Glycyrrhiza glabra L.group did not show a certain effect, but also did not show toxic effects, the effect was weak than the group which was added and subtracted the prescription.

【Keywords】Incompatible herbs；Kansui；Glycyrrhiza uralensis Fisch.；Glycyrrhiza glabra L.；Glycyrrhiza inflate Bat.；CYP450 mRNA

(收稿日期：2016-01-05)

Corresponding author：ZHONG Gan-sheng， E-mail： zhonggansheng@sohu.com

【中圖分類號(hào)】R285.5

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

doi：10.3969/j.issn.1674-1749.2016.05.002

作者簡(jiǎn)介：許皖(1990- )，女，2013級(jí)在讀碩士研究生。研究方向：中藥藥性理論研究。E-mail：1043855021@qq.com通訊作者： 鐘贛生(1961- )，碩士，教授，博士生導(dǎo)師。研究方向：中藥藥性理論研究。E-mail：zhonggansheng@sohu.com

基金項(xiàng)目：國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(973計(jì)劃)(2011CB505306); 北京中醫(yī)藥大學(xué)2016年度基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)項(xiàng)目(中青年教師類)(2016-JYB-JSMS-005)

·甘遂甘草反藥研究專題·