張姍姍，孫立立，石典花，張 敏，虞慧娟，孫付軍

（1.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟(jì)南 250014；2.山東省中醫(yī)藥研究院，山東 濟(jì)南 250014）

甘遂為大戟科植物甘遂Euphorbia kansui T.N.Liou ex T.P.Wang的干燥塊根，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，因其性苦寒，藥性峻烈列為下品。甘遂具有瀉水逐飲，消腫散結(jié)的功效，用于水腫脹滿(mǎn)，胸腹積水，痰飲積聚，氣逆喘咳，二便不利，風(fēng)痰癲癇，癰腫瘡毒等癥［1］?，F(xiàn)代研究表明，甘遂具有抗腫瘤、抗生育、抗病毒、調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)等活性［2］，臨床常用于治療晚期食道癌、乳腺癌等惡性腫瘤以及慢性支氣管炎哮喘等癥［3］。甘遂有生用或炙用之分，因其有毒，臨床上多用其醋炙品，以降低毒性，緩和藥性。目前對(duì)甘遂醋炙的研究主要集中在醋炙前后化學(xué)成分變化［4-8］、毒性［9-11］、瀉下作用［10-11］變化等方面。對(duì)甘遂醋炙減毒的影響因素的研究尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)甘遂及不同炮制方法制備的炮制品進(jìn)行急性毒性研究，以期明確甘遂醋炙減毒的影響因素，并在此基礎(chǔ)上比較甘遂、醋甘遂對(duì)小鼠各臟器組織的影響，研究結(jié)果為揭示甘遂醋炙減毒機(jī)理提供理論依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 索氏提取器；HH—4型數(shù)顯恒溫水浴鍋 (金壇市晶玻試驗(yàn)儀器廠(chǎng))；RE—2000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 (上海亞榮生化儀器廠(chǎng))；DFZ—6050型真空干燥箱 (上海精宏試驗(yàn)設(shè)備有限公司)；B3200S—T超聲機(jī) (上海必能信超聲有限公司)。

1.2 試藥 石油醚 (天津市化學(xué)試劑一廠(chǎng)，批號(hào):100523)；乙酸乙酯 (天津市化學(xué)試劑一廠(chǎng)，批號(hào):100531)；丙酮 (天津市富宇精細(xì)化工有限公司，批號(hào):100627)；甲醇 (天津市化學(xué)試劑一廠(chǎng)，批號(hào):100531)為分析純；蒸餾水。

龍門(mén)米醋 (北京王致和味滋康食品有限公司，生產(chǎn)日期:20100127)。

甘遂藥材由由安徽亳州滬譙中藥飲片廠(chǎng)提供，產(chǎn)地為陜西，由山東省中醫(yī)藥研究院林慧彬研究員鑒定為大戟科大戟屬植物甘遂Euphorbia kansui T.N.Liou ex T.P.Wang的干燥塊根。

醋炙甘遂、清炒甘遂、清炒拌醋甘遂、生品拌醋甘遂均為實(shí)驗(yàn)室自制。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及條件 昆明種SPF級(jí)小鼠 (20±2)g，雌雄各半，均由山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心供應(yīng)，許可證號(hào):SCXK(魯)20090001。按本實(shí)驗(yàn)室SOP進(jìn)行飼養(yǎng)管理。飼養(yǎng)室溫度19～24℃，相對(duì)濕度40%～65%。山東省中醫(yī)藥研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào):SYXK(魯)20050052，SPF級(jí)。全價(jià)營(yíng)養(yǎng)顆粒飼料，山東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào):SCXK(魯)20040014，自由攝食。

2 實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果

2.1 供試飲片的制備

2.1.1 醋炙甘遂 取凈甘遂適量，加入30%的米醋，潤(rùn)透，置預(yù)熱至230℃的鐵鍋內(nèi)，不斷翻炒30 min，取出，晾涼，即得。

2.1.2 清炒甘遂 取凈甘遂適量，加入30%的蒸餾水，潤(rùn)透，置預(yù)熱至230℃的鐵鍋內(nèi)，不斷翻炒30 min，取出，晾涼，即得。

2.1.3 清炒拌醋甘遂 取凈甘遂適量，加入30%的蒸餾水，潤(rùn)透，置預(yù)熱至230℃的鐵鍋內(nèi)，不斷翻炒30 min，取出，晾涼，再加入30%的米醋，晾干，即得。

2.1.4 生拌醋甘遂 取凈甘遂適量，加入30%的米醋，潤(rùn)透，晾干，即得。

2.2 供試樣品的制備 取甘遂生品和各炮制品粉末各250 g(過(guò)40目篩)，裝入濾紙筒中，置于索氏提取器中，依次用750 mL石油醚、乙酸乙酯、丙酮、甲醇提取，直至無(wú)色，減壓回收溶劑，得各極性部位浸膏備用。

2.3 甘遂生品和不同炮制品各極性部位急性毒性的研究［12］

2.3.1 有毒部位篩選 取甘遂生品和醋炙品的各極性部位浸膏適量，配成最大濃度，進(jìn)行急性毒性實(shí)驗(yàn)，只有石油醚部位出現(xiàn)小鼠死亡，其他部位均無(wú)死亡。篩選出甘遂的有毒部位為石油醚部位。

2.3.2 實(shí)驗(yàn)濃度預(yù)實(shí)驗(yàn) 以最大濃度為初始給藥濃度，按比例稀釋?zhuān)Y選出甘遂生品和各炮制品0～100%致死量范圍。

取小鼠250只，隨機(jī)分為5組，每組10只，根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)篩選出的實(shí)驗(yàn)濃度，設(shè)立由高到低5個(gè)實(shí)驗(yàn)濃度組，相鄰組間的濃度稀釋倍數(shù)為0.6，實(shí)驗(yàn)前小鼠禁食不禁水16 h，實(shí)驗(yàn)從低濃度開(kāi)始，按20 mL/kg的劑量灌胃給藥。給藥后觀察7 d，記錄各實(shí)驗(yàn)組小鼠中毒反應(yīng)、死亡數(shù)和死亡狀態(tài)。給藥0.5 h后，部分動(dòng)物出現(xiàn)呼吸急促、蜷縮、抱團(tuán)、全身抖動(dòng)、豎毛等中毒癥狀；給藥1 h后，甘遂生品高濃度組出現(xiàn)動(dòng)物死亡，對(duì)死亡動(dòng)物立即進(jìn)行解剖，發(fā)現(xiàn)小鼠出現(xiàn)腸系膜充血，腸水腫等現(xiàn)象，未死亡小鼠出現(xiàn)瀉稀黃黏稠便的現(xiàn)象，其余組也有小鼠出現(xiàn)瀉稀黃黏稠便的現(xiàn)象；給藥4 h內(nèi)，甘遂各炮制品的高濃度組均有小鼠出現(xiàn)死亡，死亡狀態(tài)與甘遂生品高濃度組死亡小鼠狀態(tài)相似；給藥24 h之內(nèi)，甘遂生品及其炮制品的其他濃度組也有小鼠出現(xiàn)死亡；給藥36 h后，各組小鼠均無(wú)繼續(xù)死亡。根據(jù)最終死亡數(shù)，計(jì)算各組死亡率，按照改良寇氏法公式計(jì)算半數(shù)致死量LD50和95%可信限范圍，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 甘遂生品及其各炮制品 (等生藥量)石油醚部位LD50Tab.1 LD50of petroleum extract of Kansai Radix and different processed products(equivalent of the amont of crude drug)

由表1可以看出，甘遂生品毒性最大，醋炙品毒性最小，生拌醋品、清炒品、清炒拌醋品毒性居中，且依次減小。

2.4 甘遂生品及醋炙品對(duì)小鼠各臟器病理組織學(xué)影響的研究 取昆明種小鼠30只，雌雄各半，分為3組，即甘遂生品石油醚組 (1.296 g/mL)、醋品石油醚組 (1.296 g/mL)和空白對(duì)照組，每組10只，以20 mL/kg的劑量灌胃給藥，給藥后24 h，脫頸椎處死，立即取出小鼠的心臟、肝臟、脾、肺臟、腎臟和小腸組織作病理組織切片，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 甘遂生品及醋炙品對(duì)小鼠各臟器病理組織學(xué)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.2 Results of impact on histopathological of various organs of mice by Kansui Radix and stir-baked Kansui Radix with vinegar

3 小結(jié)與討論

3.1 根據(jù)急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)甘遂生品的毒性最大，醋炙品的毒性最小，生拌醋品、清炒品和清炒拌醋品的毒性居中，且依次減小；甘遂醋炙品采用先加醋后加熱的炮制方法，清炒品采用單純加熱的炮制方法，清炒拌醋采用先加熱后加醋的炮制方法，生拌醋采用單純加醋的炮制方法，由此可見(jiàn)，加熱是使甘遂毒性降低的主要因素，加醋是次要因素，兩者合用更利于毒性的降低，且加熱和加醋的順序?qū)Ω仕於拘缘慕档鸵灿幸欢ǖ挠绊?，先加醋再加熱更利于毒性的降低，進(jìn)一步驗(yàn)證了甘遂傳統(tǒng)的炮制方法是科學(xué)、合理的。

3.2 為進(jìn)一步比較和驗(yàn)證醋炙對(duì)甘遂的毒性影響，分別對(duì)生甘遂和醋甘遂對(duì)小鼠各臟器組織的影響進(jìn)行病理組織學(xué)顯微觀察，結(jié)果空白對(duì)照組各臟器組織切片顯微觀察正常，生甘遂組和醋甘遂組均具有一定的腸毒性、肝毒性和脾毒性，且生品的毒性要明顯強(qiáng)于醋炙品的毒性，此外，生甘遂還具有一定的腎毒性和肺毒性。該研究結(jié)果進(jìn)一步詮釋了甘遂醋炙確能降低毒性的炮制理論。

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