于振海 朱永安 孟慶磊 朱樹(shù)人 王錫榮

摘 要：采用半靜態(tài)試驗(yàn)方法研究了在水溫（28.3±1.5）℃、pH（8.01±0.12）、溶氧（4.6±0.5）mg/L條件下，敵百蟲(chóng)、高錳酸鉀、硫酸銅、甲醛4種魚藥對(duì)烏鱧魚苗的急性毒性試驗(yàn)。結(jié)果顯示：4種藥物96 h半致死濃度以硫酸銅的最低，為1.586 mg/L；甲醛的最高，為115.159 mg/L；4種藥物毒性大小依次為硫酸銅>敵百蟲(chóng)>高錳酸鉀>甲醛；4種藥物的安全濃度大小依次為甲醛（35.529 mg/L）>敵百蟲(chóng)（1.450 mg/L）>高錳酸鉀（1.277 mg/L）>硫酸銅（0.882 mg/L）， 其中，敵百蟲(chóng)、甲醛和硫酸銅的安全濃度要高于常規(guī)用量，按照常規(guī)用量進(jìn)行病害防治是安全的。高錳酸鉀的安全濃度在常規(guī)用量范圍內(nèi)，生產(chǎn)中可按照烏鱧對(duì)藥物的安全濃度進(jìn)行病害防治。

關(guān)鍵詞：烏鱧；急性毒性；半致死濃度；安全濃度

中圖分類號(hào)：S948文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A文章編號(hào)：1001-4942（2016）05-0120-04

Abstract The acute toxicity of four kinds of drugs， dipterex， potassium permanganate， copper sulphate and formaldehyde， to larva of black-spot hybrid snakehead Channa argus were tested with the semi hydrostatic test method at the water temperature of （28.3±1.5）℃， pH of （8.01±0.12） and dissolved oxygen of （4.6±0.5） mg/L. The results showed that the median-lethal concentration （LC50） of copper sulphate for 96 hours was minimum of 1.586 mg/L， while that of formaldehyde was the highest of 115.159 mg/L. The toxicity of four drugs ranked in the order of copper sulphate， dipterex， potassium perman-ganate and formaldehyde. The safe concentration （SC） of four drugs ordered as formaldehyde （35.529 mg/L）， dipterex （1.450 mg/L）， potassium permanganate （1.277 mg/L） and copper sulphate （0.882 mg/L）. The SC of dipterex， formaldehyde and copper sulphate was higher than the conventional dosage， thus they were safe to be used to control corresponding diseases of Channa argus under the conventional dosage. The SC of potassium permanganate was in the conventional dosage range， so it could be used for disease prevention and control in accordance with the SC of Channa argus to drug in production.

Key words Channa argus； Acute toxicity； Median-lethal concentration （LC50）； Safe concentration（SC）

烏鱧（Channa argus）隸屬鱸形目鱧科鱧屬，俗稱有黑魚、孝魚、財(cái)魚、生魚 、蛇頭魚等[1]。烏鱧是一種適應(yīng)性強(qiáng)，對(duì)不良水溫、水質(zhì)及缺氧條件有較強(qiáng)耐受力，兇猛的肉食性名貴經(jīng)濟(jì)魚類，在江河湖塘等自然生態(tài)環(huán)境中很少發(fā)病。隨著烏鱧人工高密度養(yǎng)殖的發(fā)展，烏鱧各種疾病頻頻發(fā)生，主要病害有細(xì)菌性疾病、真菌性疾病和寄生蟲(chóng)性疾病，常見(jiàn)的有腐皮病、腹水病、水霉病、小瓜蟲(chóng)病和車輪蟲(chóng)病，常造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[2，3]。采用藥物進(jìn)行病害防治是最直接、最有效和最經(jīng)濟(jì)的辦法[4]，有關(guān)水產(chǎn)藥物對(duì)魚類急性毒性研究表明，魚的種類不同、規(guī)格不同對(duì)藥物的安全濃度都存在一定差異[5]。用藥過(guò)程中因?qū)λ幬锏亩拘圆幻?、濃度使用不?dāng)而造成魚中毒的情況時(shí)有發(fā)生[6]。

提高自身抵抗力是降低烏鱧發(fā)病的選擇之一，通過(guò)良種繁育獲得的選育群體能夠提高烏鱧對(duì)病害的抵抗力。山東省淡水漁業(yè)研究院以微山湖烏鱧為基礎(chǔ)群進(jìn)行選育繁殖獲得了健康苗種，為研究烏鱧選育群體對(duì)常用水產(chǎn)藥物的耐受性，保證選育群體的病害防治過(guò)程中合理用藥，安全用藥，開(kāi)展了烏鱧選育群體的常用水產(chǎn)藥物的急性毒性試驗(yàn)。試驗(yàn)針對(duì)烏鱧常見(jiàn)病害，如水霉病、小瓜蟲(chóng)病、車輪蟲(chóng)病等，選擇4種常用藥物對(duì)烏鱧選育群體苗種進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)，以獲得4種常用藥物的安全濃度和毒性等級(jí)，從而確定合適的藥物及用藥濃度。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)用魚體長(zhǎng)（5.6±1.1） cm，體重（4.2±0.7） g。身體健康，游泳活潑，無(wú)病、無(wú)傷、無(wú)畸形。在試驗(yàn)條件下暫養(yǎng)3 d，每天投食1次，試驗(yàn)開(kāi)始前24 h停止投食。

試驗(yàn)用藥、藥品規(guī)格及生產(chǎn)廠家等見(jiàn)表1。

1.2 試驗(yàn)條件

試驗(yàn)在規(guī)格60 cm×40 cm×40 cm的白色塑料箱內(nèi)進(jìn)行。時(shí)間為2015年9月7～18日，每個(gè)周期4 d。試驗(yàn)用水為養(yǎng)殖場(chǎng)用深井水，水質(zhì)符合漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)（GB11607-89），水溫（28.3±1.5）℃、pH值（8.01±0.12）、溶氧（4.6±0.5）mg/L。每箱盛水30 L，魚苗8尾，每日測(cè)一次水溫、pH值、溶氧。

1.3 試驗(yàn)操作

采用半靜態(tài)試驗(yàn)，參照盧玲等[7]的方法在室內(nèi)進(jìn)行。試驗(yàn)期間不投餌，甲醛具有揮發(fā)性，為保證藥液質(zhì)量濃度，每隔24 h 更換一次。試驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束時(shí)，測(cè)定試驗(yàn)容器中受試物濃度。

1.3.1 預(yù)試驗(yàn) 用以確定正式試驗(yàn)所需濃度范圍。每個(gè)濃度組放入5條魚，用靜態(tài)方式進(jìn)行，不設(shè)平行組，試驗(yàn)持續(xù)48～96 h。每日至少兩次記錄各容器內(nèi)的死魚數(shù)，并及時(shí)取出死魚。

1.3.2 正式試驗(yàn) 根據(jù)預(yù)試驗(yàn)得出的結(jié)果，在包括使魚全部死亡的最低濃度和96 h魚類全部存活的最高濃度之間至少設(shè)置5個(gè)濃度組，以幾何級(jí)數(shù)排布，濃度間隔系數(shù)為2[8]。根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，得到的4種藥物正式試驗(yàn)濃度（表2）。每個(gè)試驗(yàn)濃度組設(shè)2個(gè)平行，每一系列設(shè)一個(gè)不投放藥物的空白對(duì)照。試驗(yàn)溶液調(diào)節(jié)至相應(yīng)溫度后，從馴養(yǎng)魚群中隨機(jī)取出魚并隨機(jī)迅速放入各試驗(yàn)容器中。同一試驗(yàn)，試驗(yàn)用魚在30 min內(nèi)分組完畢。

在24、48、72、96 h時(shí)檢查受試魚狀況，以試驗(yàn)對(duì)象失去活力、對(duì)外界刺激無(wú)反應(yīng)為死亡標(biāo)準(zhǔn)[9]。應(yīng)在試驗(yàn)開(kāi)始后3 h或6 h觀察各試驗(yàn)組魚苗的狀況，并記錄異常行為。

1.4 數(shù)據(jù)處理

半致死濃度（LC50）、安全濃度（SC）采用寇氏法計(jì)算[10]：

2 結(jié)果與分析

2.1 4種藥物對(duì)烏鱧魚苗的致死率

整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中空白對(duì)照組沒(méi)有出現(xiàn)死魚現(xiàn)象，即致死率為零。敵百蟲(chóng)、高錳酸鉀、硫酸銅、甲醛4種藥物對(duì)烏鱧的毒性試驗(yàn)見(jiàn)表3。

敵百蟲(chóng)、高錳酸鉀、硫酸銅和甲醛的最低濃度組96 h致死率分別為25%、6.25%、0、0。敵百蟲(chóng)和硫酸銅最高濃度組24 h致死率均為18.75%，高錳酸鉀和甲醛最高濃度組24 h致死率均為100%。4種藥物最高濃度組96 h致死率均為100%。高錳酸鉀7.905 mg/L濃度組 和14.057 mg/L濃度組24 h致死率都達(dá)到100%（表3）。

烏鱧在敵百蟲(chóng)藥液中中毒癥狀表現(xiàn)為對(duì)外界刺激反應(yīng)遲緩，上下游竄，逐漸失去平衡，最后死亡沉于箱底。烏鱧在高濃度敵百蟲(chóng)藥液中開(kāi)始時(shí)反應(yīng)并不劇烈，隨著時(shí)間延長(zhǎng)才逐漸出現(xiàn)中毒癥狀，中毒癥狀出現(xiàn)時(shí)間相對(duì)較晚。死亡的烏鱧體色發(fā)白，體表粘液增多。敵百蟲(chóng)濃度為10.000 mg/L時(shí)，烏鱧約6 h出現(xiàn)中毒癥狀，約8 h開(kāi)始死亡，24 h致死率為18.75%，48 h致死率為87.50%，96 h致死率為100%。濃度為1.000 mg/L時(shí)，烏鱧無(wú)明顯中毒癥狀，24 h和48 h致死率均為零，96 h致死率為25.00%（表3）。

烏鱧在高錳酸鉀藥液中的中毒癥狀表現(xiàn)為不安，反應(yīng)比較劇烈，不停游竄，時(shí)而躍出水面，后趨于安靜，逐漸失去平衡，直至最后死亡。死亡后的魚體表皮破損，呈絮狀，顏色為紫黑色。高錳酸鉀濃度為25.000 mg/L時(shí)，魚苗約10 min即出現(xiàn)中毒癥狀，約0.5 h開(kāi)始死亡，24 h致死率為100%。7.905、14.057、25.00 mg/L濃度組的24、48 h及96 h致死率均達(dá)到100%。2.500 mg/L濃度組24 h和48 h的致死率為零，約75 h出現(xiàn)死亡，96 h致死率為6.25%（表3）。

烏鱧在低濃度硫酸銅藥液中開(kāi)始時(shí)無(wú)明顯反應(yīng)，隨著時(shí)間延長(zhǎng)逐漸表現(xiàn)出中毒癥狀，逐漸失去平衡，初期能夠自行恢復(fù)正常姿態(tài)，后期徹底失去平衡，沉于箱底。放入高濃度組中時(shí)，需要較長(zhǎng)時(shí)才出現(xiàn)中毒跡象，反應(yīng)出竄游不安，逐漸對(duì)外界刺激失去反應(yīng)，最后失去平衡，沉于箱底。當(dāng)硫酸銅濃度為5.000 mg/L時(shí)，約5 h出現(xiàn)中毒癥狀，約9 h開(kāi)始死亡，24 h致死率僅為18.75%，48、96 h致死率均為100%。0.500 mg/L濃度組24、48 h和96 h致死率均為零（表3）。

烏鱧在高濃度甲醛藥液中表現(xiàn)為焦躁不安，來(lái)回游竄，出現(xiàn)浮頭現(xiàn)象，初期對(duì)外界刺激能做出反應(yīng)，后期逐漸失去平衡，沉于箱底。死亡后魚體僵硬，鰓蓋擴(kuò)張，口張開(kāi)。低濃度組中烏鱧反應(yīng)較為平靜，高濃度組反應(yīng)劇烈，中毒癥狀很快就表現(xiàn)出來(lái)。試驗(yàn)箱中甲醛濃度為300.000 mg/L時(shí)，約0.2 h開(kāi)始出現(xiàn)中毒癥狀，約0.5 h魚苗開(kāi)始死亡，24 h致死率達(dá)100%。191.683 mg/L濃度組24 h致死率也為100%。濃度為50.000 mg/L時(shí)，24、48 h和96 h致死率均為零（表3）。

2.2 4種藥物的半致死濃度（LC50）和安全濃度

根據(jù)式（1）和式（2）得到4種藥物的半致死濃度和安全濃度（表4）。敵百蟲(chóng)和硫酸銅半致死濃度均為48 h>96 h>24 h，高錳酸鉀和甲醛半致死濃度均為24 h >48 h>96 h。4種藥物半致死濃度大小依次為甲醛>高錳酸鉀>敵百蟲(chóng)>硫酸銅。4種藥物的安全濃度大小依次為甲醛（35.529 mg/L）>敵百蟲(chóng)（1.450 mg/L）>高錳酸鉀（1.277 mg/L）>硫酸銅（0.882 mg/L）。

3 結(jié)論與討論

3.1 4種藥物對(duì)烏鱧的毒性評(píng)價(jià)

半致死濃度（LC50）用來(lái)衡量藥物對(duì)試驗(yàn)魚毒性的大小，其值越小，藥物毒性越大；其值越大，毒性越低[11，12]。以96 h 為魚類急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，分為極高毒（<1 mg/L）、高毒（1～10 mg/L）、中毒（10～100 mg/L）和低毒（>100 mg/L）4個(gè)等級(jí)[8]。本試驗(yàn)中4種藥物對(duì)烏鱧96 h LC50值依次為甲醛>高錳酸鉀>敵百蟲(chóng)>硫酸銅，按照藥物對(duì)烏鱧毒性大小依次為硫酸銅>敵百蟲(chóng)>高錳酸鉀>甲醛。4種藥物中硫酸銅、敵百蟲(chóng)和高錳酸鉀是高毒藥物，甲醛是低毒藥物。

4種藥物24、48 h和96 h致死率與濃度梯度均呈正相關(guān)，說(shuō)明隨藥物濃度增加，藥物對(duì)試驗(yàn)魚的毒性效應(yīng)也相應(yīng)增加。隨著試驗(yàn)進(jìn)行，魚苗24、48、96 h死亡率依次遞增，說(shuō)明隨時(shí)間延長(zhǎng)，4種藥物對(duì)試驗(yàn)魚的毒性效應(yīng)相應(yīng)提高。

3.2 4種藥物對(duì)烏鱧的用藥安全

敵百蟲(chóng)為膽堿酯酶抑制劑，能將膽堿酯酶的活性點(diǎn)磷酸化而抑制其活性，因其在魚體內(nèi)殘留量少、殘留時(shí)間短而被廣泛用于防治體外寄生甲殼類、單殖吸蟲(chóng)及腸內(nèi)寄生的部分蠕蟲(chóng)，常用劑量為0.2 ～0.5 mg/L[13]。試驗(yàn)中敵百蟲(chóng)對(duì)烏鱧的安全濃度為1.450 mg/L，高于常用劑量，但其在毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)中屬高毒，在烏鱧魚苗養(yǎng)殖過(guò)程中可選用該藥物進(jìn)行病害防治，但需精確控制用藥劑量和用藥時(shí)間，注意觀察，謹(jǐn)慎使用。

甲醛具有廣譜性殺滅細(xì)菌、寄生蟲(chóng)、真菌、芽孢和病毒的作用，已被廣泛應(yīng)用于水生動(dòng)物疾病防治，且使用劑量較大，常規(guī)用量為10～30 mg/L[14]。試驗(yàn)中，甲醛的安全濃度為35.529 mg/L，高于常規(guī)用量范圍，其毒性分級(jí)屬低毒，因此可以作為生產(chǎn)中病害防治藥物。甲醛使用成本較高，因此生產(chǎn)中一般用浸泡方式防治病害。

高錳酸鉀是一種常用的外用消毒藥物，具有很強(qiáng)的氧化性，一般作為消毒劑用來(lái)治療細(xì)菌、真菌、寄生蟲(chóng)類等疾病和設(shè)施、工具的消毒，生產(chǎn)上常用遍灑濃度為1～2 mg/L[15] 。試驗(yàn)中，高錳酸鉀對(duì)烏鱧的安全濃度為1.277 mg/L，處于常規(guī)用量范圍內(nèi)，因此高錳酸鉀可以作為烏鱧養(yǎng)殖過(guò)程中病害防治藥物，但試驗(yàn)過(guò)程中烏鱧對(duì)高錳酸鉀反應(yīng)較為劇烈，所以注意控制使用劑量。

硫酸銅在生產(chǎn)中主要用于殺滅鞭毛蟲(chóng)、車輪蟲(chóng)、斜管蟲(chóng)等寄生蟲(chóng)，尤其對(duì)殺滅寄生于魚體體表及魚鰓的車輪蟲(chóng)具有獨(dú)特作用[16]。硫酸銅常用潑灑濃度為0.5～0.7 mg/L[17]。試驗(yàn)中，硫酸銅的安全濃度為0.882 mg/L，稍高于常規(guī)用量，因此硫酸銅可以作為烏鱧養(yǎng)殖過(guò)程中病害防治的藥物，但硫酸銅屬高毒藥物，使用時(shí)需注意觀察，謹(jǐn)慎使用。

4種藥物中敵百蟲(chóng)、甲醛和硫酸銅的安全濃度要高于常規(guī)用量，按照常規(guī)用量進(jìn)行病害防治是安全的，高錳酸鉀在常規(guī)用量范圍內(nèi)，生產(chǎn)中可按照烏鱧對(duì)藥物的安全濃度進(jìn)行病害防治。該結(jié)果與徐德平等[18]研究結(jié)果不一致，分析原因可能是試驗(yàn)條件不同、魚苗體質(zhì)規(guī)格差異、藥物有效成分含量以及試驗(yàn)魚苗本身對(duì)藥物耐受性方面存在差異造成的，其中最主要的原因可能是烏鱧選育群體的魚苗對(duì)藥物有更強(qiáng)的耐受能力。在生產(chǎn)上選用藥物除了從藥物的半致死濃度和安全濃度上考慮之外，還需結(jié)合藥物的常用濃度及用藥時(shí)間綜合考慮。

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