張巧云，彭　華，梁委軍

(廣西醫(yī)科大學第四附屬醫(yī)院暨柳州市工人醫(yī)院醫(yī)學檢驗科，柳州545005)

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全自動血凝分析儀Sysmex CS-5100的性能驗證與評價

張巧云，彭華，梁委軍

(廣西醫(yī)科大學第四附屬醫(yī)院暨柳州市工人醫(yī)院醫(yī)學檢驗科，柳州545005)

【摘要】目的對全自動血凝分析儀Sysmex CS-5100的性能進行驗證與評價。方法用高低濃度混合血漿驗證批內(nèi)精密度，用高低濃度質(zhì)控品驗證日間精密度，用高濃度混合血漿分別按100%、80%、60%、40%、20%、10%、5%的比例稀釋后對儀器進行線性驗證，用接近預期檢測限的低/高濃度血漿樣本來驗證可報告范圍，通過檢測定值質(zhì)控品和儀器比對來驗證正確度，用正常體檢血漿驗證參考區(qū)間，用高低濃度血漿標本驗證攜帶污染率。結(jié)果Sysmex CS-5100檢測PT、APTT、FIB批內(nèi)CV<3.0%；TT、D-二聚體、FDP批內(nèi)CV<4.0%；PT、APTT、FIB日間CV<5.0%；TT、D-二聚體、FDP日間CV<6.0%；FIB、D-二聚體、FDP的可報告范圍分別是：0.21～24.6 g/L，0.06～89.6 mg/L，0.09～2001.28 μg/ml；各項目相對偏差均在10.5%以內(nèi)；95%以上樣本處于引用參考區(qū)間內(nèi)，攜帶污染率均<2.5%。結(jié)論Sysmex CS-5100全自動血凝分析儀性能良好，可用于檢測臨床樣本。

【關鍵詞】Sysmex CS-5100；血凝分析儀；性能驗證

ISO15189醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力的專用要求明確指出必須對儀器進行性能驗證，新引進的儀器須通過性能驗證方可用于臨床檢測。全自動血凝分析儀Sysmex CS-5100是一款新儀器，引進該儀器的醫(yī)學實驗室還不是很多，對其性能驗證的相關資料很少。本文介紹了一種性能驗證方法，對驗證結(jié)果進行闡述，并給出了結(jié)論，以期為其他醫(yī)學實驗室進行該儀器的性能驗證提供參考依據(jù)。

1材料與方法

1.1儀器與試劑日本希森美康公司(Sysmex)生產(chǎn)的CS-5100全自動血凝分析儀。日本Sysmex配套試劑和質(zhì)控品：凝血酶時間(Test Thrombin Reagent，TT)，LOT：504477；活化部分凝血活酶時間(Action-APTT),LOT：547177；凝血酶原時間(Thromborel S，PT),LOT：545578；纖維蛋白原(Thrombin Reagent，F(xiàn)IB)，LOT：538079；D-二聚體(INNOVANCE D-Dimer，D-二聚體):Reagent LOT：560181/Diluent LOT:560280/Buffer LOT：560382/Supplement LOT：560479；CLEAN-Ⅰ,LOT：A4156；CLEAN-Ⅱ,LOT：A4014；質(zhì)控1(Dade ci-Trol 1),LOT：528157；質(zhì)控2(Dade ci-Trol 3),LOT：548438；質(zhì)控3(D-二聚體低濃度質(zhì)控),LOT：560774；質(zhì)控4(D-二聚體高濃度質(zhì)控),LOT：560675；日本積水醫(yī)療株式會社生產(chǎn)的纖維蛋白/纖維蛋白原降解產(chǎn)物試劑(Nanopia P-FDP)和質(zhì)控品：FDP緩沖液，LOT：815RFL；FDP膠乳液，LOT：817RFL；質(zhì)控5(FDP低濃度質(zhì)控),LOT：805RKK；質(zhì)控6(FDP高濃度質(zhì)控),LOT：805RKK。

1.2標本來自本院正常體檢者和患者血漿。空腹抽血1.8 ml，0.109 mol/L枸櫞酸鈉1∶9抗凝。其中用于參考區(qū)間驗證的體檢個體需滿足以下條件：無飲酒、吸煙史，血壓正常，未服用藥物，近期無住院、手術及輸血史，無系統(tǒng)性疾病，女性未在妊娠期或哺乳期，無家族遺傳性疾病。

1.3方法

1.3.1批內(nèi)精密度驗證每個項目取2個濃度水平(包括正常低值、異常高值)的臨床樣本各1支，每支樣本重復檢測11次，計算后10次檢測結(jié)果的算術平均值和標準差，計算變異系數(shù)(CV)。異常樣本的濃度水平要求大于儀器檢測結(jié)果參考區(qū)間中位值的2倍；FIB異常樣本的濃度大于6.0 g/L或小于1.5 g/L。

1.3.2日間精密度按說明書要求復溶質(zhì)控1、質(zhì)控3、D-二聚體質(zhì)控品和FDP質(zhì)控品，并各分裝20支，共20組，-20℃冷凍保存，每次取一組置室溫解凍后上機檢測，每天檢測4次，每次間隔2個小時，共檢測5天，得到20組數(shù)據(jù)，分別計算各項目20次檢測結(jié)果的算術平均值和標準差，計算CV。

1.3.3線性選取一份接近預期上限的高值樣本(H)，分別按100%、80%、60%、40%、20%、10%、5%的比例進行稀釋，每個稀釋度重復測定2次，計算均值。將實測值與理論值作比較，并計算回歸方程 y=bx+a，及相關系數(shù)(R2)。

1.3.4可報告范圍[1]取接近預期檢測限的低/高濃度血漿樣本，分別按照Sysmex CS-5100儀器設置的濃縮/稀釋倍數(shù)進行檢測，每個濃縮/稀釋度連續(xù)檢測2次，計算2次檢測結(jié)果的算術平均值作為實測值，并計算回收率,回收率(%)=實測值/理論值×100%。

1.3.5最小檢測限[1]取接近預期的接近最小檢測限的低濃度血漿樣本，連續(xù)檢測10次，計算10次檢測結(jié)果的算術平均值和標準差，計算CV。

1.3.6準確度使用5份配套質(zhì)控品分別進行單次檢測，計算每份檢測結(jié)果與靶值(廠家參考值)的相對偏差。

1.3.7儀器之間結(jié)果的比對[1]各項目選用患者標本20份，其中包含正常、異常各10份，也覆蓋黃疸、脂血和溶血標本。分別用Sysmex CS5100和Sysmex CA7000對每份標本的相應項目各檢測1次，比較兩組數(shù)據(jù)的相對偏倚(%)，統(tǒng)計相對偏倚符合要求的例數(shù)(PT、APTT:正?！?%，異?！?0%;FIB、TT:正?！?%，異常≤10%;D-二聚體、FDP:正常≤10%，異常≤10%)，計算比對通過率(%)。其中Syemex CA7000定期校準和維護保養(yǎng)，每天監(jiān)測室內(nèi)質(zhì)控，2014全年室間質(zhì)評結(jié)果合格，以此為靶儀器。

1.3.8參考區(qū)間驗證[1]選擇10名正常男性和10名正常女性新鮮血漿標本檢測，統(tǒng)計各參考個體檢測值，與引用的參考區(qū)間比較，處于引用區(qū)間內(nèi)的樣本為有效樣本，并計算有效樣本比率(%)=參考個體落在引用區(qū)間的個數(shù)/總的參考個體數(shù)×100%。

1.3.9攜帶污染率驗證

1.3.9.1高值樣本對低值樣本的污染將低值樣本置樣本架1和3位置，高值樣本置于2位置，每個樣本分別測定3次，記錄結(jié)果：N1、N2、N3、A1、A2、A3、N4、N5、N6。按以下公式計算：k1=[N4-Mean(N1，N2，N3)]/Mean(N1，N2，N3)。

1.3.9.2低值樣本對高值樣本的污染將高值樣本置樣本架1和3位置，低值樣本置于2位置，每個樣本分別測定3次，記錄結(jié)果：A1、A2、A3、N1、N2、N3、A4、A5、A6。按以下公式計算：k2=[A4-Mean(A1，A2，A3)]/Mean(A1，A2，A3)。

2結(jié)果

2.1批內(nèi)精密度經(jīng)實驗驗證批內(nèi)精密度PT、APTT、FIB均滿足CLIA’88的質(zhì)量要求，TT、D-二聚體、FDP均滿足試劑廠家的質(zhì)量要求，驗證結(jié)果見表1。

2.2日間精密度經(jīng)實驗驗證日間精密度PT、APTT、FIB均滿足CLIA’88的質(zhì)量要求，TT、D-二聚體、FDP均滿足試劑廠家的質(zhì)量要求，驗證結(jié)果見表2。

2.3線性運用線性回歸方程對實測值與理論值進行直線擬合，斜率均在(1±0.05)范圍內(nèi)，且各項均滿足R2≥0.95，各項目線性良好,驗證結(jié)果見圖1A～C。

表1　CS-5100批內(nèi)精密度驗證結(jié)果

表2　CS-5100日間精密度驗證結(jié)果

A:FIB線性驗證;B:D-二聚體線性驗證;C:FDP線性驗證。圖1CS-5100線性驗證結(jié)果

2.4可報告范圍試劑說明書及相關資料介紹樣本經(jīng)稀釋后實際檢測值與理論值的偏差應滿足:FIB≤20%，回收率應在80%～120%之間[2]，D-二聚體、FDP≤15%，回收率應在85%～115%之間，據(jù)此驗證FIB、D-二聚體、FDP的最大稀釋倍數(shù)分別是4倍、20倍、16倍，其中FIB的最大濃縮倍數(shù)為2倍。

2.5最小檢測限最小檢測限 D-二聚體、FDP的低值濃度的樣本重復檢測10次，CV≤20.0%，二者最小檢測限分別為：0.06 mg/L FEU，0.09 μg/ml。

2.6準確度各批號質(zhì)控品的實測值和參考靶值的相對偏差(%)滿足PT≤15%，APTT≤15%，F(xiàn)IB≤20%，D-二聚體≤20%，F(xiàn)DP≤20%均滿足我國衛(wèi)生行業(yè)標準要求，驗證結(jié)果見表3。

2.7儀器之間結(jié)果的比對PT、APTT、FIB、TT、D-二聚體、FDP各項目比對通過率分別為：95%、100%、90%、90%、90%、90%，均≥80%,比對通過。

2.8參考區(qū)間驗證PT、APTT、FIB、TT、D-二聚體、FDP各項目有效樣本比率分別是：100%、100%、95%、100%、100%、100%，均大于90%，滿足(NCCLS)C28-A2的要求，當前參考區(qū)間可用。

2.9攜帶污染率驗證PT、APTT、FIB、D-二聚體、FDP高值對低值的攜帶污染率分別為：0.3%、1.64%、1.11%、1.56%、2.38%，低值對高值的攜帶污染率分別為：1.26%、0.95%、1.53%、2.35%、0.6%，均<2.5%，滿足要求，儀器自動清潔效果較好。

表3　CS-5100準確度驗證結(jié)果

3討論

本實驗對Sysmex CS-5100的性能驗證是按照國際血液學標準化委員會(ICSH)制定的評價內(nèi)容，參照我國衛(wèi)生行業(yè)標準和CLIA’88有關凝血項目的質(zhì)量要求，以及有關項目試劑廠家的性能參數(shù)來制定判斷標準和實驗步驟。

PT、APTT、FIB精密度均能滿足CLIA’88的質(zhì)量要求(批內(nèi)精密度<1/4 CLIA’88規(guī)定的最大允許誤差，日間精密<1/3 CLIA’88規(guī)定的最大允許誤差)，TT、D-二聚體、FDP能滿足試劑廠家的質(zhì)量要求，Sysmex CS-5100精密度符合要求。本實驗中FIB的病理濃度只有一個高濃度水平，有報道FIB在低濃度水平CV>5.0%[3]，故后續(xù)應進一步驗證低濃度水平的批內(nèi)精密度。此外，采用凝固法檢測的項目影響因素較多[4]，故實驗過程中質(zhì)控品和血漿的復溶及保存方法應相同，復溶后盡快上機檢測，以減少人為因素造成的結(jié)果偏差。

FIB、D-二聚體、FDP的線性范圍分別是：FIB 0.62～6.15 g/L，D-二聚體 0.22～4.48 mg/L FEU，F(xiàn)DP 6.25～125.08 μg/ml，與試劑說明書基本相符。其中試劑說明書介紹FDP的低值線性范圍可以達到2.5 μg/ml，可考慮分別用濃度接近低值濃度水平和高值濃度水平的血漿配比稀釋以達到線性范圍的濃度。本實驗中FIB、D-二聚體、FDP的臨床可報告范圍(CRR)分別是：0.21～24.6 g/L、0.06～89.6 mg/L、0.09～2001.28 μg/ml，可覆蓋臨床大多數(shù)樣本。其中，F(xiàn)IB的可報告范圍基本全部覆蓋臨床樣本，故未驗證其最小檢測限。在一些動靜脈血栓患者的溶栓治療過程中，溶栓效果好的患者FDP、D-二聚體明顯上升[5]，準確測定FIB、D-二聚體、FDP在溶栓治療過程中可以判斷疾病發(fā)展、預測出血風險，具有重要的監(jiān)測價值[6，7]。故驗證其最大稀釋倍數(shù)，精確檢測高濃度水平樣本，對臨床有重要意義。此外，本實驗由于儀器參數(shù)設置的限制，D-二聚體在20～64倍之間的稀釋倍數(shù)沒有得到驗證，應進一步驗證。

根據(jù)NCCLS頒布的EP15-A,正確度的驗證采用了兩種簡便方案來驗證,即分別用檢測規(guī)定靶值的質(zhì)控品和通過儀器比對來驗證[1]。Sysmex CA-7000和Sysmex CS-5100兩臺儀器檢測原理基本相同，已有報道二者結(jié)果的相關性良好[8，9],本實驗僅從兩臺儀器的結(jié)果偏倚進行分析，以驗證新進儀器結(jié)果的可靠性。同一臨床實驗室應使用檢測原理相同的血凝分析儀，否則極有可能出現(xiàn)檢測結(jié)果一致性不佳，對臨床造成困惑，也不符合《醫(yī)療機構臨床實驗室管理辦法》的要求[10]。

Sysmex CA-7000與Sysmex CS-5100的檢測系統(tǒng)相近，檢驗服務對象相同，且分析前和分析后各因素均一致，故本實驗中參考區(qū)間的驗證屬于具有可比性的分析系統(tǒng)之間參考區(qū)間的轉(zhuǎn)移。按照CLSI EP9-A2文件要求，用20個健康參考個體進行驗證，PT、APTT、FIB、TT、D-二聚體、FDP各項目20個參考值均未超出2例的觀測值在原始的參考區(qū)間外，二者參考區(qū)間可通用[1]。另外，兩臺儀器檢測系統(tǒng)大致相同，且參考區(qū)間一致，結(jié)果可比，故可以用同一個PT的Normal值，在實際工作中可以繼續(xù)跟蹤驗證二者INR有無差異。

攜帶污染率是具體的量化的攜帶污染，其值越小說明儀器檢測過程樣本相互影響越小，本實驗中各項目的攜帶污染率均小于2.5%，證明Sysmex CS-5100有較好的自潔系統(tǒng)，為檢測結(jié)果的準確性提供保障。

本實驗初步確定Sysmex CS-5100全自動血凝分析儀有較好的批內(nèi)精密度和日間精密度，線性良好，準確度和儀器比對合格，參考區(qū)間與Sysmex CA-7000具有通用性，儀器自潔系統(tǒng)較好，故可以用于檢測臨床樣本。此外，本實驗未進行干擾試驗的驗證，需要進一步試驗驗證。

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(編輯：潘明志)

Performance verification and evaluation of Sysmex CS-5100 automatic coagulation analyzer

ZHANGQiaoyun,PENGHua,LIANGWeijun

(DepartmentofClinicalLaboratory,TheFourthAffiliatedHospitalofGuangxiMedicalUniversity—LiuzhouWorker’sHospital,Liuzhou545005,China)

【Abstract】ObjectiveTo verify and evaluate the performance of Sysmex CS-5100 automatic coagulation analyzer.MethodsIn-run precision was verified by high/low concentration mixed blood plasma, between-day precision was verified by high/low concentration quality control sample, high concentrations of mixed plasma was used to verify the linear with the dilution ratio of 100%, 80%, 60%, 40%, 20%, 10% and 5%, respectively. High/low concentration close to expected detection limit was used to verify reportable range, accuracy was verified by detecting fixed value quality control sample and equipment comparison, normal physical examination plasma was carried on to verify reference range, and high/low concentration blood plasma was used to verify contaminative rate. Results The in-run precision of PT, APTT and FIB detection were all less than 3.0%, TT, D-Dimer, FDP detection were all less than 4.0%. The between-day precision of PT, APTT and FIB detection were all less than 5.0%, and TT, D-Dimer, FDP detection were all less than 6.0%. The reportable range of FIB, D-Dimer, FDP were 0.21～24.6 g/L, 0.06～89.6 mg/L and 0.09～2001.28 μg/mL, respectively.The bias of each items were within 10.5%, more than 95% of the sample in quoting reference range, contaminative rate was all<2.5%.ConclusionSysmex CS-5100 show a good performance,and can be used for detection of clinical samples.

【Key words】Sysmex CS-5100 show a good performance, so it can be used for detection of clinical samples

(收稿日期：2015-11-27修回日期：2016-02-26)

中圖分類號：R318.6；TH776

文獻標識碼：A

DOI:10.3969/j.issn.1003-1383.2016.01.021

作者簡介：張巧云，女，初級技師，醫(yī)學學士，主要從事醫(yī)學檢驗研究與工作。E-mail：zhangqiaoyun1984@126.com