周　昱，廉奇鑫，王　新

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤科，黑龍江佳木斯154003)

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CHD5及K－ras蛋白在大腸癌組織中的表達①

周昱，廉奇鑫，王新

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤科，黑龍江佳木斯154003)

摘要:目的:通過研究CHD5和K－ras在結(jié)直腸癌組織中的各自臨床病理學(xué)指標(biāo)的檢測、分析各自不同表達程度探索性討論二者是否具有相關(guān)性。方法:采用免疫組探索CHD5和K－ras在大腸癌組織中的表達。結(jié)果:①所選結(jié)直腸癌組織及其相應(yīng)的癌旁正常組織中，CHD5表達陽性率分別為32.50% (13/40)與72.50% (29/40)，所以在結(jié)直腸癌旁正常組織中CHD5蛋白多為明顯陽性表達。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)系統(tǒng)運算明確發(fā)現(xiàn): CHD5蛋白的表達與所選患者組織分化程度、腫瘤臨床Dukes分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況以及預(yù)后好壞程度有關(guān)(均P＜0.05)，與直腸腫瘤浸潤的深度、患者的年齡、性別、腫瘤大小范圍無關(guān)(P＞0.05)。②所選結(jié)直腸癌組織及其相應(yīng)的癌旁正常組織中，K－ras蛋白表達的陽性率分別為67.5% (27/40)與37.50% (15/40)，并且所選結(jié)直腸癌組織中K－ras蛋白多為陽性表達。經(jīng)系統(tǒng)的統(tǒng)計學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，K－ras蛋白的表達與患者腫瘤的組織分化程度、腫瘤臨床Dukes分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況以及預(yù)后的好壞程度關(guān)系非常密切(P＜0.05)，相反與、結(jié)直腸腫瘤浸潤深度、腫瘤大小范圍及結(jié)直腸癌患者年齡、性別無相關(guān)性(P＞0.05)。結(jié)論:①在結(jié)直腸癌組織中CHD5表達下降與浸潤深度、組織分化程度、患者是否出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TNM分期有關(guān)，②K－ras在胃正常組織中表達不明顯，在胃癌中高表達。且與浸潤深度、組織分化程度、是否出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TNM分期密切相關(guān)。③CHD5與K－ras表達具有負相關(guān)性，提示二者有彼此制約、相互拮抗的作用。

關(guān)鍵詞:結(jié)直腸癌; CHD5; K－ras

結(jié)直腸癌是人類最常見的腸道系統(tǒng)惡性腫瘤之一［1］，位居第三位并且逐年顯著增加的也是本課題所深入研究組織標(biāo)本—結(jié)直腸癌(colorectal cancer，CRC)，因結(jié)直腸癌導(dǎo)致死亡占據(jù)全部癌癥致死比例大約有10%［2］，其發(fā)病比例更是長期占據(jù)發(fā)展中國家成人非良性腫瘤發(fā)生比例的第五席位。結(jié)直腸癌作為成年人消化道常見的惡性腫瘤，令臨床工作者感到困惑的便是其居高不下的發(fā)病率和死亡率，在這方面略低于胃癌及食道癌［3］，本實驗研究在結(jié)腸癌中CHD5和K－ra是否有的表達及兩者之間有無意義，為結(jié)腸癌早期診斷及預(yù)后提供科學(xué)依據(jù)。

1　資料與方法

1.1標(biāo)本來源

選取2012－09～2015－07佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科取外科部分第一次結(jié)直腸癌手術(shù)切除后，均能保證術(shù)后病理學(xué)診斷明確、術(shù)中切除組織邊緣證實陰性、臨床資料信息完整。本實驗反復(fù)對比選擇并且都經(jīng)臨床病理準(zhǔn)確診斷的40例標(biāo)本蠟塊，術(shù)后均由經(jīng)驗豐富的病理科醫(yī)師進行病理學(xué)確認(rèn)，患者實施手術(shù)前都未曾進行腫瘤放射治療、抗腫瘤化學(xué)藥物應(yīng)用及全身抗癌生物學(xué)免疫治療。所選結(jié)直腸癌標(biāo)本中男21例，女19例，標(biāo)本年齡39～74 歲(中位年齡51歲)。采用2010年國際抗癌聯(lián)盟/美國癌癥聯(lián)合委員會Dukes分期標(biāo)準(zhǔn)各期所占比例為: A + B期24(60%)，C + D期16(40%)，結(jié)合術(shù)后病理資料學(xué)及多項影像檢查能夠充分證實高、中分化22例(55%)，低分化18例(45%)存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移20例(50%)，不存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移20例(50%)。詳細采集病史、家族史、腸鏡檢查報告、系統(tǒng)查體情況、腫瘤標(biāo)志物系列檢查結(jié)果，資料比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。

1.2主要試劑

鼠抗CHD5(染色質(zhì)解旋酶DNA結(jié)合蛋白5)抗體購自上海聯(lián)碩生物科技有限公司，鼠抗K－ras(突變型)抗體購自北京博奧森生物科技有限公司。

1.3免疫組化

通過免疫組化方法(Elivision法)探索CHD5和K－ra在為癌及正常癌旁組織中的表達情況。

1.4結(jié)果判定

采用經(jīng)典雙盲法對實驗結(jié)果進行認(rèn)真的觀察比較和仔細記錄。陽性的細胞的判定標(biāo)準(zhǔn)為細胞中有棕黃色顆粒，CHD5蛋白陽性反應(yīng)為棕黃色顆粒在腫瘤細胞的細胞核及細胞質(zhì)中均有分布，但其在結(jié)直腸癌組織中核表達明顯強于胞質(zhì)表達，而K－ras蛋白主要分布于腫瘤細胞的細胞質(zhì)中。根據(jù)在同類細胞中陽性細胞數(shù)所占的比例進行劃分、登記，并采用半定量積分的方式對免疫組織化學(xué)染色的結(jié)果進行分級，即根據(jù)細胞染色強度(A)和染色細胞所占的比例(B)積分之積(A + B)來判定。染色強度A分為4級:無特意染色為0分、輕度染色(淡黃色) 為1分、中度染色(棕黃色)為2分、強染色(深棕黃色)為3分;根據(jù)在同類細胞中，棕色細胞數(shù)所占的百分比，將B(染色細胞所占的比例)分為5級:＜5%的為0分、5%～25%為1分、26%～50%為2分、51%～75%為3分、＞75%的則為4分。判斷表達結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)時陽性細胞百分比得分與強度得分之和，不同的積分代表不同的陽性強度，總積分在0～1分之間則表示陰性(－)、總積分之在2～7分則表示陽性，也就是說A + B≤1是陰性，A + B＞1是陽性。陽性強度分級則以不同積分標(biāo)準(zhǔn)校對即2～3分為弱陽性(+ )、4～7分為強陽性(+ + )［4］。CHD5以細胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。在400倍視野下觀察腫瘤細胞，每個視野觀察100個腫瘤細胞，隨機計算5個視野，以細胞不著色或小于5%的細胞著色為陰性，多大于5%的腫瘤細胞著色為陽性。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理，同樣采用經(jīng)典的計數(shù)資料χ2檢驗進行分析，運用Spearman等級相關(guān)分析在結(jié)直腸癌及同一標(biāo)本癌旁正常組織中兩種CHD5及K－ras蛋白表達之間的相關(guān)性P＜0.05表示具有統(tǒng)計學(xué)差異。

2　結(jié)果

2.1 IHC法檢測CHD5在結(jié)直腸癌組織與癌旁正

常組織的表達

通過IHC法檢測，所采集40例結(jié)直腸癌組織中，CHD5的陽性表達率為32.50% (13/40)，低于同一標(biāo)本的癌旁正常組織的72.50% (29/40)，二者差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

2.2 IHC法檢測K－ras蛋白在結(jié)直腸癌組織與癌

旁正常組織的表達

本通過IHC法檢測，在所有40例結(jié)直腸癌組織中，K－ras的陽性表達率為67.5% (27/40)，高于同一標(biāo)本的癌旁正常組織的37.50% (15/40)，二者差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表2。

表1　CHD5蛋白在結(jié)直腸癌組織癌以及旁正常組織細胞中的表達

表2　K－ras在正常組織和腫瘤組織中的表達

2.3結(jié)直腸癌組織中CHD5與K－ras蛋白的表達

與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系

結(jié)合結(jié)直腸癌標(biāo)本中CHD5蛋白的免疫組織化學(xué)實驗結(jié)果和病例的臨床病理資料，分析顯示:結(jié)直腸癌組織中CHD5蛋白表達程度與結(jié)直腸癌腫瘤學(xué)行為病理學(xué)表象、臨床Dukes分期的情況、腫瘤不同分化程度的高低以及是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的均存在相關(guān)性。見表3。

表3　結(jié)直腸癌組織CHD5蛋白的表達與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系［例(%)］

表4　結(jié)直腸癌中CHD5與K－ras蛋白的關(guān)系

2.4結(jié)直腸癌組織中CHD5與K－ras表達水平的相關(guān)性

本實驗研究中，免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示: 40例結(jié)直腸癌患者中，腸癌組織胞核CHD5與K－ras均陽性表達者僅4例，胞核CHD5與K－ras蛋白均陰性表達者4例。運用Spearman等級相關(guān)分析進行研究分析，結(jié)果顯示:等級相關(guān)系數(shù)r =－0.527，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，提示結(jié)直腸癌中胞核CHD5與K－ras蛋白表達呈負相關(guān)。見表4。

3　討論

CHD5作為染色質(zhì)解旋酶DNA結(jié)合蛋白家族最新一員，經(jīng)由p19Arf/p53路徑來完成調(diào)控細胞增殖、衰亡等一系列演變，并且仍能通過自身的雜合缺失來識別并調(diào)控很多靶基因，誘導(dǎo)靶基因從而抑制其降解，參與靶基因調(diào)控，調(diào)節(jié)腫瘤細胞不斷生長、增殖、分化、信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄及翻譯、血管的新生、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運、細胞的凋亡以及其新陳代謝等多種生理生化過程。K－ras蛋白則是一種比較常見和熟悉原癌基因，其所調(diào)控腫瘤學(xué)行為的通路開關(guān)功能更是很早就被人們所熟知并應(yīng)用于臨床，屬于ras基因家族的成員［5］。K－ras蛋白的突變能誘導(dǎo)多種靶基因發(fā)生變化，并相互作用，導(dǎo)致多種靶基因的增殖顯著［6］。惡性腫瘤通常都具有慢性炎癥性疾病的特點，CHD5及K－ras蛋白均不同程度通過調(diào)節(jié)介導(dǎo)炎性細胞因子的增殖，促進相關(guān)炎癥基因的表達，從而在腫瘤形成極初期中起到一定的推動作用［6，7］。進一步我們可以大膽推斷: CHD5及K－ras蛋白共同成為常規(guī)結(jié)直腸腫瘤標(biāo)志物服務(wù)于早期腫瘤學(xué)行為的精準(zhǔn)檢測項目指日可待。綜上所述，本實驗經(jīng)Spearman等級相關(guān)分析，具有統(tǒng)計學(xué)意義(r =－0.527，P＜0.01，)提示結(jié)直腸癌腫瘤學(xué)行為發(fā)生、發(fā)展的過程中CHD5及K－ras蛋白表達呈負相關(guān)。在不久的將來極有可能通過聯(lián)合檢測對比CHD5和K－ras蛋白在結(jié)直腸組織中的表達情況，如發(fā)現(xiàn)CHD5蛋白表達陰性的同時K－ras在結(jié)直腸組織中表達陽性，可以為臨床提供該檢測結(jié)直腸組織有可能癌變的金標(biāo)準(zhǔn)。所以我們可以大膽的設(shè)想:未來臨床檢測CHD5和K－ras在結(jié)直腸腸組織中的表達水平，對評價結(jié)直腸癌惡腫瘤學(xué)行為早期發(fā)現(xiàn)、監(jiān)控結(jié)直腸癌患者疾病進展、判定惡性程度和預(yù)測預(yù)后至關(guān)重要。

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(收稿日期:2015－12－07)

通訊作者:王新(1962～)男，黑龍江佳木斯人，碩士，主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師。E－mail: zhouyu731@126.com。

作者簡介:周昱(1969～)男，黑龍江集賢人，學(xué)士，副主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師。

基金項目:①1.黑龍江省青年基金項目，編號: QC2013C013; 2.佳木斯大學(xué)青年基金項目，編號: sq2013－013。

中圖分類號:R735.3+4

文獻標(biāo)識碼:A

文章編號:1008－0104(2016) 02－0039－03