苗瑞瑞，張文龍，鮑玉成，邱南海，高　巍

(1．天津中醫(yī)藥大學(xué); 2．天津市海河醫(yī)院，天津　300350)

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T-SPOT．TB在骨與關(guān)節(jié)結(jié)核鑒別診斷中的價(jià)值*

苗瑞瑞1，2，張文龍2，鮑玉成2，邱南海2，高巍2

(1．天津中醫(yī)藥大學(xué); 2．天津市海河醫(yī)院，天津300350)

摘要:目的:探討結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)(T-SPOT．TB)在骨與關(guān)節(jié)結(jié)核鑒別診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法:通過收集我院骨科2012年3月至2015年6月收治的骨結(jié)核患者及非骨結(jié)核的骨質(zhì)破壞患者，統(tǒng)計(jì)T-SPOT．TB結(jié)果的靈敏度、特異度、假陽性率、假陰性率，同時(shí)統(tǒng)計(jì)結(jié)核抗體上述指標(biāo)作為對比參考。結(jié)果:在本組病例中TSPOT．TB試驗(yàn)靈敏度為91．36%，特異度為100%，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理P＜0．05，T-SPOT．TB檢測優(yōu)于結(jié)核抗體檢查。結(jié)論: T-SPOT．TB檢測法對肺外結(jié)核病診斷特異性高，對于骨與關(guān)節(jié)結(jié)核病的診斷意義重大，不失為一種可靠的檢查手段，但目前價(jià)格較貴，不建議作為結(jié)核病常規(guī)篩查，應(yīng)該應(yīng)用于疑難病例的鑒別診斷中。

關(guān)鍵詞:T-SPOT．TB;骨結(jié)核;鑒別診斷

骨與關(guān)節(jié)結(jié)核是較為常見的肺外結(jié)核，其早期臨床表現(xiàn)缺乏特異性，誤診和漏診常見，患者常因錯(cuò)過最佳治療時(shí)機(jī)而導(dǎo)致病情延誤，對患者的健康造成嚴(yán)重的損傷，致畸致殘率高［1］，目前尚沒有一種檢查手段可以快速、準(zhǔn)確的做出診斷。結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)(T-SPOT．TB)作為近年來一種新型的檢測手段廣泛應(yīng)用于結(jié)核病的診斷中，本研究回顧我院骨科疑似骨與關(guān)節(jié)結(jié)核患者檢查T-SPOT．TB結(jié)果進(jìn)行總結(jié)研究，評(píng)價(jià)T-SPOT．TB實(shí)驗(yàn)在骨與關(guān)節(jié)結(jié)核鑒別診斷中的價(jià)值。

1　資料與方法

1．1一般資料通過收集、整理我院骨科2012年3月至2015年6月收治的骨質(zhì)病理性破壞的患者共93例，其中男53例，女40例，年齡21～74歲。所有病例均已確診，其中85例術(shù)后病理檢查確診; 8例未手術(shù)患者根據(jù)癥狀、體征、影像學(xué)檢查、其他化驗(yàn)檢查及抗結(jié)核藥物試驗(yàn)性治療后確診。

1．2 T-SPOT．TB實(shí)驗(yàn)本組病例均為晨起空腹抽外周靜脈血化驗(yàn)檢查，采血后2 h內(nèi)常規(guī)分離PBMC，在活化后預(yù)包被好抗IFN-γ抗體的平板中，每孔加入100 μL，每孔的細(xì)胞濃度為2×105cells。陰性對照孔中不加入任何刺激物。陽性對照孔加入5 μL植物血凝素(PHA)，終濃度為5 μg·mL－1。實(shí)驗(yàn)孔分別加入結(jié)核特異抗原A(ESAT-6)和B(CFP-10)，終濃度為5 μg·mL－1。然后蓋上板蓋，放入37℃，5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)16～24 h。第2天洗板，加入檢測抗體孵育1 h。洗板后再加入親和素孵育1 h。最后加入顯色劑顯色。待顯色洗板后晾干，ELISPOT斑點(diǎn)計(jì)數(shù)。并記錄斑點(diǎn)的各種參數(shù)，做統(tǒng)計(jì)分析，A 或B任一個(gè)＞24 SFCs·10－6提示有結(jié)核病，判定為陽性結(jié)果;兩項(xiàng)結(jié)果均＜24 SFCs·10－6提示無結(jié)核感染，判定為陰性結(jié)果。

1．3評(píng)價(jià)指標(biāo)將靈敏度、特異度、假陽性率和假陰性率作為診斷試驗(yàn)臨床效果的評(píng)價(jià)指標(biāo);同時(shí)統(tǒng)計(jì)結(jié)核抗體檢查結(jié)果作為對比指標(biāo)。

2　結(jié)果

2．1臨床確診結(jié)果此93例病例均為菌陰患者，肺部癥狀不明顯，無明顯咳嗽及咳痰。81例確診為骨結(jié)核，其中19例為關(guān)節(jié)結(jié)核，62例為脊柱結(jié)核; 5例確診為腰椎布氏桿菌性脊柱炎，7例確診為脊椎轉(zhuǎn)移瘤。

2．2 T-SPOT．TB試驗(yàn)結(jié)果與最終確診結(jié)果比較

T-SPOT．TB試驗(yàn)靈敏度為91．36%，特異度為100%，假陰性率為8．64%，假陽性率為0，約登指數(shù)為91．36%，見表1。

2．3結(jié)核抗體試驗(yàn)結(jié)果與最終確診結(jié)果比較結(jié)核抗體試驗(yàn)靈敏度為65．43%，特異度為83．33%，假陰性率為34．57%，假陽性率為16．67%，約登指數(shù)為48．76%，見表2。

表1　T-SPOT．TB試驗(yàn)結(jié)果

表2　結(jié)核抗體試驗(yàn)結(jié)果

3　討論

結(jié)核病是全球嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題之一，據(jù)WHO估計(jì)，全球有約20億人感染結(jié)核分枝桿菌，每年有約200萬人死于結(jié)核［2］。近年來由于人口大規(guī)模流動(dòng)，結(jié)核病的發(fā)病率有上升趨勢。結(jié)核菌可侵犯全身各個(gè)系統(tǒng)，導(dǎo)致臨床表現(xiàn)復(fù)雜多變，尤其是肺外結(jié)核常因病情隱匿或表現(xiàn)不典型，極易誤診漏診［3］。

機(jī)體感染結(jié)核分枝桿菌后，體內(nèi)存在特異的效應(yīng)T淋巴細(xì)胞，其在體外再次受到結(jié)核菌特異抗原的刺激時(shí)，會(huì)分泌釋放IFN-γ，通過檢測IFN-γ的水平或計(jì)數(shù)分泌IFN-γ的外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)，可以了解機(jī)體在感染結(jié)核分枝桿菌后的免疫應(yīng)答狀態(tài)，從而發(fā)現(xiàn)結(jié)核分枝桿菌的潛伏感染、輔助診斷結(jié)核病。對于結(jié)核菌特異性抗原的選定是試驗(yàn)中至關(guān)重要的，使用ESAT-6(早期分泌靶向抗原6 000蛋白early secretory antigenic target 6)和CFP-10(培養(yǎng)濾過蛋白10 culture filtrate proten 10)作為抗原，得到了較好的效果［4］。

近年來T-SPOT．TB檢查被大家越來越重視，文獻(xiàn)報(bào)道其靈敏度可高達(dá)89．0%和特異度高達(dá)98．1%［5］，對活動(dòng)性結(jié)核病的診斷有很大價(jià)值。Mahairas等在1996年發(fā)現(xiàn)致病性結(jié)核分枝桿菌中一段名為“RD1”的基因編碼產(chǎn)生結(jié)核菌特異度抗原ESAT-6和CEP-10的編碼基只因存在于致病性分枝桿菌中，而不存在于大多數(shù)環(huán)境分枝桿菌和卡介苗中，因此酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)的特異度較高，不受大多數(shù)環(huán)境分枝桿菌感染和卡介苗接種的影響［6］。同時(shí)文獻(xiàn)表明血T-SPOT．TB試驗(yàn)在艾滋病合并肺結(jié)核患者中敏感性及特異性較高，臨床上對疑似肺結(jié)核的艾滋病患者進(jìn)行T-SPOT．TB檢測有利于疾病診斷及鑒別診斷［7］，提示T-SPOT．TB試驗(yàn)受機(jī)體免疫力影響很小。本組病例提示T-SPOT．TB特異性高達(dá)100%，可能與非結(jié)核病例較少有關(guān)，但與文獻(xiàn)報(bào)道相近，誤診率極低。靈敏度僅為91．36%，從而提示漏診率很低。同時(shí)對比兩種檢測方法，TSPOT．TB檢查在靈敏度、特異度、約登指數(shù)方面均優(yōu)于結(jié)核抗體實(shí)驗(yàn)，說明T-SPOT．TB檢查對骨與關(guān)節(jié)結(jié)核鑒別診斷有很大幫助。

骨結(jié)核的診斷目前尚無一種特異性檢查能完全確診，骨結(jié)核的診斷與鑒別診斷要結(jié)合癥狀、體征、影像學(xué)檢查、化驗(yàn)檢查、流行病學(xué)檢查綜合考慮，特別是不能忽略病史及查體，結(jié)合CT及MRI表現(xiàn)，大部分患者可得到正確診斷，部分患者經(jīng)試驗(yàn)性抗結(jié)核藥物治療可確診，T-SPOT．TB是一項(xiàng)新型的檢查手段，對骨與關(guān)節(jié)結(jié)核疑難病例鑒別診斷意義重大，

但價(jià)格較貴，不建議作為常規(guī)檢查。同時(shí)T-SPOT．TB是一種定性診斷檢查，對既往有明確結(jié)核病史，新發(fā)骨關(guān)節(jié)疾病病灶，臨床中要慎重考慮，需要結(jié)合臨床其他表現(xiàn)做出正確診斷，注意既往結(jié)核病與新發(fā)腫瘤鑒別，特別是老年患者。

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Value of T-SPOT in Differential Diagnosis on Osteoarticular TB

MIAO Rui-rui1，2，ZHANG Wen-long2，BAO Yu-cheng2，QIU Nan-hai2，GAO Wei2
(1．Tianjin university of Traditional Chinese Medicine; 2．Tianjin Haihe Hospital，Tianjin 300350)

Abstract:Objective: To discuss the value of T-SPOT in differential diagnosis on osteoarticular TB．Method: The sensitivity，specificity，false positive rate and false negative rate of T-SPOT in TB was got By collecting and analysing cases of patients admitted in our hospital with bone destruction due to tuberculosis and non-tuberculosis during March 2012 June 2015．The pertinent above indications of TB-Ab were recorded for comparison．Results: In whole cases，the sensitivity of T-SPOT-TB test was 91．36%，with the specificity rate of 100%．The pertinent statistic results showed the superiority of T-SPOT-TB test to TB-Ab(P＜0．05)．Conclusion: Of the high diagnosis specificity，T-SPOT TB test is meaningful in diagnosis of osteoarticular TB，which can be regarded as a reliable means of inspection．For its expensive spending，it is recommended in the differential diagnosis of difficult cases other than as a routine inspection．

Key words:T-SPOT-TB; bone tuberculosis; differential diagnosis

(收稿日期:2015－11－22 ) (責(zé)任編輯:敖慧斌)

*通訊作者:張文龍，男，主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師。E-mail: 18920180058@189．cn

DOI:10．3969/j．issn．1001－5779．2016．01．022

中圖分類號(hào):R529．2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

文章編號(hào):1001－5779(2016) 01－0076－03