丁 梅，胡 芬，王增輝，楊艷玲，馬振玲，李宗富，李潤華

063000河北省唐山市協(xié)和醫(yī)院(丁梅，王增輝，楊艷玲，馬振玲，李宗富，李潤華)；華北理工大學(xué)生命科學(xué)院(胡芬)

?

·論著·

不同分子類型乳腺癌骨形態(tài)發(fā)生蛋白6表達(dá)的臨床意義

丁 梅，胡 芬，王增輝，楊艷玲，馬振玲，李宗富，李潤華

063000河北省唐山市協(xié)和醫(yī)院(丁梅，王增輝，楊艷玲，馬振玲，李宗富，李潤華)；華北理工大學(xué)生命科學(xué)院(胡芬)

【摘要】目的 探討不同分子類型乳腺癌患者骨形態(tài)發(fā)生蛋白6(BMP-6)表達(dá)情況及其與臨床病理特征的關(guān)系。方法選取2013年1月—2015年3月在唐山市協(xié)和醫(yī)院普外科接受手術(shù)并經(jīng)病理證實的女性乳腺癌患者426例，其中Luminal A型149例，Luminal B型97例，表皮生長因子受體2(Her-2)陽性型72例，Basal-like型108例。采用實時熒光定量反轉(zhuǎn)錄PCR檢測不同分子類型乳腺癌BMP-6 mRNA表達(dá)情況，采用免疫組織化學(xué)染色法檢測不同分子類型乳腺癌BMP-6表達(dá)情況，并對不同分子類型乳腺癌患者臨床特征進行比較。結(jié)果不同分子類型乳腺癌組織BMP-6 mRNA表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；其中Basal-like型BMP-6 mRNA表達(dá)水平低于Luminal A型(P<0.05)。不同分子類型乳腺癌組織BMP-6 mRNA表達(dá)水平均低于癌旁組織(P<0.01)。不同分子類型乳腺癌組織BMP-6表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=19.01，P=0.02)；其中Luminal A型陰性(-)率低于Basal-like型(χ2=5.17，P=0.002)；Luminal A型強陽性(+++)率高于Basal-like型(χ2=8.84，P<0.001)。不同分子類型乳腺癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；不同分子類型乳腺癌患者腫瘤最大徑分布、內(nèi)臟轉(zhuǎn)移率比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；其中Basal-like型內(nèi)臟轉(zhuǎn)移率高于Luminal A型(χ2=14.71，P<0.001)。結(jié)論BMP-6在不同分子類型乳腺癌中的表達(dá)具有差異性，臨床或可對不同類型的乳腺癌患者采取不同的BMP-6治療方案。

【關(guān)鍵詞】乳腺腫瘤；骨形態(tài)發(fā)生蛋白質(zhì)6；分子分類

丁梅，胡芬，王增輝，等.不同分子類型乳腺癌骨形態(tài)發(fā)生蛋白6表達(dá)的臨床意義[J].中國全科醫(yī)學(xué)，2016，19(11)：1305-1309.[www.chinagp.net]

Ding M，Hu F，Wang ZH，et al.Clinical significance of the expression of bone morphogenetic proteins 6 in different types of breast cancer[J].Chinese General Practice，2016，19(11)：1305-1309.

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤，全世界乳腺癌患者約占癌癥患者的10%，且每年新發(fā)病例為100萬，我國約占15萬[1]。乳腺癌的發(fā)病率呈逐年上升趨勢，有研究顯示，2002年新檢出的乳腺癌例數(shù)為1 151 298例，是1975年的2倍[2]。乳腺癌好發(fā)骨轉(zhuǎn)移，Paget通過對753例乳腺癌患者研究發(fā)現(xiàn)，骨微環(huán)境適合乳腺癌細(xì)胞生存、增殖，且乳腺癌細(xì)胞分泌的因子也會進一步改造骨微環(huán)境，并由此提出“種子-土壤”理論[3]。

骨形態(tài)發(fā)生蛋白(bone morphogenetic proteins，BMPs)是轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)超家族成員，BMPs目前已發(fā)現(xiàn)有40多種，其中BMP-6是從鼠胎盤cDNA文庫中分離得到[4]。BMP-6是生長、分化多功能調(diào)節(jié)因子，最初因其能夠誘導(dǎo)骨和軟骨形成而得名，對骨骼再生修復(fù)、胚胎發(fā)育均有重要作用，在軟骨細(xì)胞成熟、角蛋白形成早期、血清素神經(jīng)元、胎兒平滑肌發(fā)育中均有表達(dá)[5]。近年研究表明，BMP-6在乳腺癌、唾液腺癌、前列腺癌中均有表達(dá)，推測或與腫瘤骨轉(zhuǎn)移相關(guān)[6]。BMP-6在乳腺癌中的具體作用機制尚不清楚，本研究擬對不同分子類型乳腺癌患者的BMP-6表達(dá)情況進行觀察，為乳腺癌輔助治療和預(yù)后評析提供參考。

1資料與方法

1.1臨床資料選取2013年1月—2015年3月在唐山市協(xié)和醫(yī)院普外科接受手術(shù)并經(jīng)病理證實的女性乳腺癌患者426例，年齡26～68歲，平均年齡(48.1±9.1)歲；Luminal A型149例，Luminal B型97例，表皮生長因子受體2(Her-2)陽性型72例，Basal-like型108例；初診腫瘤最大徑<2 cm 155例，2～5 cm 162例，>5 cm 109例；內(nèi)臟轉(zhuǎn)移80例，非內(nèi)臟轉(zhuǎn)移50例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移140例。

1.2診斷、分型與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1乳腺癌診斷根據(jù)我國2011年發(fā)布的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)診斷：乳房腫物質(zhì)硬、固定、伴有皮膚凹陷或腋窩淋巴結(jié)腫大、短期腫物明顯增大等為首發(fā)癥狀；或可出現(xiàn)乳頭近期回縮、血性溢液，單側(cè)乳頭乳暈皮膚濕疹樣改變且常規(guī)治療無改善；經(jīng)影像或病理檢查明確診斷[7]。

1.2.2乳腺癌分子分型標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)2011年第12屆St.Gallen國際乳腺癌會議共識的分型標(biāo)準(zhǔn)：Luminal A型為雌激素受體(estrogen receptor，ER)和/或孕激素受體(progestin receptor，PR)陽性、Her-2陰性、細(xì)胞核相關(guān)抗原(nuclear-associated antigen)Ki-67<14%；Luminal B型為ER和/或PR陽性、Her-2陰性或陽性、Ki-67≥15%；Her-2陽性型為ER和/或PR陰性、Her-2陽性；Basal-like型(三陰性型)為ER、PR、Her-2陰性[2]。

1.2.3轉(zhuǎn)移分類內(nèi)臟轉(zhuǎn)移指發(fā)生在肺、肝、腦等臟器的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；非內(nèi)臟轉(zhuǎn)移指發(fā)生在骨、軟組織為主的轉(zhuǎn)移。

1.2.4排除標(biāo)準(zhǔn)男性乳腺癌、其他惡性腫瘤或相關(guān)腫瘤病史；術(shù)前進行放、化療，內(nèi)分泌等全身治療者；病理、病歷、免疫組織化學(xué)資料不全者。

1.3檢測方法

1.3.1實時熒光定量反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-qPCR)患者于乳腺癌術(shù)中取癌組織和癌旁組織各一份，于術(shù)后30 min內(nèi)投入液氮進行保存。兩部分組織的RT-qPCR操作步驟相同，以癌組織的操作步驟為例，具體如下。取0.1 g人乳腺癌組織置于研缽中(研缽需預(yù)冷)，加入液氮研磨至粉末狀，加入Trizol試劑(Inveitrogen公司)1 ml，混勻，轉(zhuǎn)入Eppendorf管(1.5 ml，無核酸酶)中，放置5 min，室溫離心(12 000×g)5 min，將上清液轉(zhuǎn)移至新的Eppendorf管(1.5 ml，無核酸酶)中；加入1/5體積氯仿，振蕩混勻15 s，放置15 min，室溫離心(12 000×g，4 ℃)15 min；吸取上層水相，置于另一離心管，加入2/3體積異丙醇混勻，放置5～10 min，室溫離心(12 000×g，4 ℃)10 min；棄上清液，加入1 ml 75%乙醇，振蕩離心管，懸浮沉淀，離心(8 000×g，4 ℃)5 min；棄上清液，室溫沉淀RNA 5～10 min，加去離子水溶解RNA樣品，凍存(-20 ℃)。在0.2 ml Eppendorf管中加入RNA 2 μl、5×RT Buffer 4 μl、dNTP Mix 2 μl、RNase Inhibitor 0.5 μl、Oligo 2 μl、AMV反轉(zhuǎn)錄酶2 μl、ddH2O 7.5 μl，室溫下放置10 min，42 ℃孵育1 h，75 ℃加熱15 min，-20 ℃凍存。采用Gene Runner軟件設(shè)計引物，引物由上海生工公司合成并提供。BMP-6(308 bp)上游引物5′-CAACAGAGTCGTAATCGCTCTACC-3′(+1 323～+1 346)、下游引物5′-TTAGTGGCATCCACAAGCTCT-3′(+1 701～+1 721)；GAPDH基因(982 bp)上游引物5′-TGAAGGTCGGTGTGAACGGAT-3′、下游引物5′-CATGTAGGCCATGAGGTCCACCAC-3′。在0.2 ml反應(yīng)管中加入cDNA 2 μl、dNTP Mixture 2 μl、F-primer 1 μl、R-primer 1 μl、10×PCR Buffer 2.5 μl、ROX 0.5 μl、EverGreen 0.5 μl、Taq DNA聚合酶0.4 μl、ddH2O 15.1 μl，94 ℃預(yù)變性3 min，按以下步驟進行循環(huán)，94 ℃變性30 s，64 ℃延伸60 s，40個循環(huán)。每個樣本做3次檢驗，取平均值。

1.3.2免疫組織化學(xué)染色檢測SP9100免疫組織化學(xué)試劑盒、DAB顯色試劑盒、鼠抗人Actin及辣根酶標(biāo)記山羊抗小鼠IgG(H+L)抗體均采購于北京天根公司，鼠抗人BMP-6單克隆抗體購于Abcam公司。將凍存的標(biāo)本置于100 ml甲醛溶液(中性)中固定，石蠟包埋，連續(xù)切片(厚度2 μm)呈蠟帶，分隔蠟帶并放于45 ℃溫水上，用粘片劑防止蠟片滑脫，調(diào)整蠟片位置將其置于載玻片中央，抗原修復(fù)，封閉，應(yīng)用SP法染色，DAB發(fā)色，蘇木素復(fù)染，脫水，透明，封固，以PBS代替一抗作陰性對照。應(yīng)用顯微鏡觀察，由兩位經(jīng)驗豐富的病理科醫(yī)師進行觀察，鏡下棕黃色顆粒即為BMP-6表達(dá)，以同一顯微鏡倍數(shù)(×40)觀察全片，確定腫瘤浸潤邊緣，選擇10個高倍(×400)視野，每個視野計數(shù)100個腫瘤細(xì)胞，分析不同視野下染色細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(陽性細(xì)胞占計數(shù)同類細(xì)胞比例)及染色程度。以陽性染色<10%為陰性(-)；陽性染色10%～30%為弱陽性(+)；陽性染色31%～50%為陽性(++)；陽性染色>50%為強陽性(+++)。

1.3.3ER、PR、Her-2、Ki-67判斷采用免疫組織化學(xué)方法對乳腺癌腫瘤標(biāo)本進行石蠟包埋、切片、染色、洗滌，在切片上加入ER、PR、Her-2、Ki-67一抗、二抗，以DAB顯色，選擇10個顯微鏡(×400)視野，每個視野計數(shù)100個腫瘤細(xì)胞，分析不同視野下染色細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。ER、PR染色細(xì)胞數(shù)<10%或細(xì)胞核無染色為陰性(-)、染色細(xì)胞數(shù)>10%為陽性(+)；Ki-67染色細(xì)胞數(shù)<30%或細(xì)胞核無染色為陰性(-)、染色細(xì)胞數(shù)≥30%為陽性(+)；運用DAKOHercep Test系統(tǒng)判定Her-2陰性表達(dá)為(-或+)、陽性為(++或+++)。

2結(jié)果

2.1不同分子類型乳腺癌BMP-6mRNA表達(dá)水平比較不同分子類型乳腺癌癌旁組織BMP-6mRNA表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；不同分子類型乳腺癌組織BMP-6mRNA表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；其中Basal-like型BMP-6mRNA低于LuminalA型，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。不同分子類型乳腺癌組織BMP-6mRNA表達(dá)水平均低于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01，見表1)。

Table 1Comparison of the mRNA expression of BMP-6 among different molecule types of breast cancer tissues

分子類型例數(shù)癌旁組織癌組織t值P值LuminalA型14987.12±23.1636.15±10.1824.59<0.01LuminalB型9785.15±30.1734.07±12.0815.48<0.01Her-2陽性型7283.16±22.7132.88±16.0715.34<0.01Basal-like型10882.11±18.1931.06±12.08a24.30<0.01F值1.053.78P值0.370.01

注：與Luminal A型比較，aP<0.05；Her-2=表皮生長因子受體2

2.2不同分子類型乳腺癌組織BMP-6表達(dá)水平比較不同分子類型乳腺癌組織BMP-6表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=19.01，P=0.02)。其中Luminal A型陰性(-)率低于Basal-like型，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.17，P=0.002)；Luminal A強陽性(+++)率高于Basal-like型，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=8.84，P<0.001，見表2)。

表2不同分子類型乳腺癌組織BMP-6表達(dá)水平比較〔n(%)〕

Table 2Comparison of the protein expression of BMP-6 among different molecule types of breast cancer tissues

分子類型例數(shù)陰性(-)弱陽性(+)陽性(++)強陽性(+++)LuminalA型14912(8.1)60(40.3)50(33.6)27(18.0)LuminalB型9710(10.3)47(48.5)26(26.8)14(14.4)Her-2陽性型729(12.5)36(50.0)17(23.6)10(13.9)Basal-like型10822(20.4)50(46.3)30(27.8)6(5.5)

2.3不同分子類型乳腺癌患者臨床特征比較不同分子類型乳腺癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；不同分子類型乳腺癌患者腫瘤最大徑分布、內(nèi)臟轉(zhuǎn)移率比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；其中Basal-like型內(nèi)臟轉(zhuǎn)移率高于Luminal A型，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=14.71，P<0.001，見表3)。

3討論

表3不同分子類型乳腺癌患者臨床特征比較〔n(%)〕

Table 3Comparison of clinical features among different molecule types of breast cancer patients

臨床特征例數(shù)LuminalA型(n=149)LuminalB型(n=97)Her-2陽性型(n=72)Basal-like型(n=108)χ2值P值腫瘤最大徑(cm)69.69<0.01 <215571(47.7)38(39.2)25(34.7)21(19.5) 2～516258(38.9)45(46.4)31(43.1)28(25.9) >510920(13.4)14(14.4)16(22.2)59(54.6)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移3.510.32 陽性14043(28.9)31(32.0)23(31.9)43(39.8) 陰性286106(71.1)66(68.0)49(68.1)65(60.2)轉(zhuǎn)移13.96<0.01 內(nèi)臟轉(zhuǎn)移8016(10.7)19(19.6)13(18.1)32(29.6) 非內(nèi)臟轉(zhuǎn)移5023(15.4)11(11.3)9(12.5)7(6.5)

乳腺癌是北美女性癌癥的第二大死因，在我國該病的發(fā)病率也逐年增高。乳腺細(xì)胞系的增殖受甾體類固醇激素和肽類激素調(diào)節(jié)，雌激素能夠促進乳腺上皮細(xì)胞增生，有研究指出乳腺上皮細(xì)胞在致癌因素作用下會發(fā)生惡變，而雌激素-受體系統(tǒng)又會使惡變細(xì)胞獲得優(yōu)勢生長，形成腫瘤[8]。雌激素會直接對含ER的乳腺癌細(xì)胞產(chǎn)生作用，對癌細(xì)胞基因的表達(dá)、表型特征進行調(diào)節(jié)，刺激癌細(xì)胞的自分泌，使生長因子水平得到提升，而降低抑制生長因子水平[9]。BMP-6是一種能夠在乳腺癌中表達(dá)的生長因子，有學(xué)者認(rèn)為BMP-6是雌激素的選擇性調(diào)節(jié)基因，其表達(dá)量受雌激素劑量的控制[10]，亦有研究發(fā)現(xiàn)BMP-6與表皮生長因子具有相關(guān)性[11]。鑒于此，本研究對不同分子類型乳腺癌BMP-6水平進行觀察，結(jié)果顯示，RT-qPCR法測定的BMP-6 mRNA在癌旁組織及癌組織中均存在，但癌組織中BMP-6 mRNA表達(dá)水平明顯低于癌旁組織；且Luminal A型BMP-6 mRNA表達(dá)水平高于Basal-like型；免疫組織化學(xué)染色的結(jié)果與BMP-6 mRNA表達(dá)水平一致，Luminal A型BMP-6強陽性(+++)率高于Basal-like型。有研究指出，Luminal A型ER基因表達(dá)程度最高，且GATA3、XBP1、CKB、CK18等與雌激素相關(guān)的基因水平均有上調(diào)；Basal-like型ER、PR均為陰性[12]。由此可見，BMP-6水平與ER、PR可能存在一定的反饋性調(diào)節(jié)關(guān)系，有報道指出1/2ERE區(qū)域的BMP-6啟動因子BMP6 PLR的啟動子活性在10-7mol/L時，雌激素作用能夠提高60%[13]。張磊[14]通過對ER陽性的乳腺癌細(xì)胞MCF-7的72 h后半定量反轉(zhuǎn)錄PCR測定BMP-6表達(dá)水平發(fā)現(xiàn)，與ER陰性的乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231比較，MCF-7中的BMP-6表達(dá)水平明顯高于MDA-MB-231(P<0.05)；且雌激素10-5、10-7mol/L能夠促進BMP-6的表達(dá)(P<0.05)。結(jié)合本次觀察推測，BMP-6與雌激素的劑量相關(guān)性不僅體現(xiàn)于雌激素相關(guān)細(xì)胞，亦表現(xiàn)于乳腺癌的分子類型中，但本次觀察的Luminal B型、Her-2陽性型的BMP-6表達(dá)水平并未表現(xiàn)出組間差異，是否可以參考BMP-6區(qū)分乳腺癌類型尚有待大樣本觀察。

Ki-67表達(dá)水平是公認(rèn)的腫瘤細(xì)胞增殖特異性指標(biāo)，其表達(dá)指數(shù)和病理分級是評價腫瘤細(xì)胞分化程度、增殖活性的有效指標(biāo)。劉更等[15]在對80例乳腺癌組織的BMP-6表達(dá)水平進行觀察時發(fā)現(xiàn)，Ki-67表達(dá)≤20%的BMP-6陰性率為55.17%，>20%且<40%的BMP-6陰性率為34.78%，≥40%的BMP-6陰性率為46.43%，兩組間有明顯差異(P<0.05)，BMP-6隨著Ki-67的增高而減弱。推測BMP-6可能廣泛參與了腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移的調(diào)控過程。有研究顯示BMP-6、BMP-7通過抑制P38信號途徑、類固醇硫酸酯的表達(dá)來抑制雌激素介導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞的增殖[16]，也有學(xué)者認(rèn)為BMP-6可以通過δEF1調(diào)控E-cadherin，進而實現(xiàn)對上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)移的抑制[17]。

從各型的病理特征看，Luminal A型腫瘤體積較小、轉(zhuǎn)移率較低且多非內(nèi)臟轉(zhuǎn)移；Basal-like型腫瘤體積較大、內(nèi)臟轉(zhuǎn)移率較高，預(yù)后較差。章樂虹等[18]對693例確診的乳腺癌患者進行不同分子亞型的轉(zhuǎn)移觀察，Luminal A型的無病生存率、總生存率均高，非內(nèi)臟轉(zhuǎn)移率為7.84%，復(fù)發(fā)風(fēng)險曲線低平，預(yù)后最好；Basal-like型無病生存率、總生存率均低，內(nèi)臟轉(zhuǎn)移率為19.54%，復(fù)發(fā)風(fēng)險曲線峰值高，出現(xiàn)時間早，本研究結(jié)果與之一致，均說明Luminal A型的預(yù)后較好。影響乳腺癌預(yù)后的因素較多，如化療方案、患者對治療的敏感性、術(shù)式、患者自身因素等，本次觀察的患者均在本院進行規(guī)范的手術(shù)及化療，各分型間的病理、預(yù)后特征主要是不同類型間的差異形成。國外有報道顯示，乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-453、BT-20和已經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移的乳腺癌標(biāo)本中均可檢測到低水平的BMP-6，且BMP-6具有抑制乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞侵襲、遷移的作用，并認(rèn)為BMP-6與乳腺癌轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)[19]。王川[20]在對乳腺癌MCF-7細(xì)胞的觀察中發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過BMP-6處理后的細(xì)胞，可通過MAPK/P38/AP-1抑制基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metallo proteinase，MMP)-9啟動子活性。在乳腺癌細(xì)胞中，MMP-9的水平越高，淋巴轉(zhuǎn)移率、復(fù)發(fā)率越高，由上述推測Luminal A型的高水平BMP-6表達(dá)或與其較好的預(yù)后相關(guān)。

在Luminal A型的轉(zhuǎn)移患者中，有11.40%(17/149)的患者發(fā)生了骨轉(zhuǎn)移，是4型中最高者。BMP-6包括23個氨基酸的N端信號肽和490個氨基酸的BMP-6前肽，前肽中有4個保守雙堿性氨基酸殘基的酶切點，該點在蛋白水解酶的作用下可產(chǎn)生具有139個氨基酸的活性成熟肽，分泌的BMPs成熟肽可形成同源二聚體或異源二聚體，其中的異源二聚體的誘骨活性較強[21]，或許是Luminal A型易發(fā)生骨轉(zhuǎn)移的重要機制。

綜上所述，BMP-6在乳腺癌不同分子類型中的表達(dá)水平存在差異，其中預(yù)后較好的Luminal A型BMP-6表達(dá)水平較高，Basal-like型表達(dá)水平較低，臨床或可對不同分子類型的乳腺癌患者采取不同方案的BMP-6治療，但這仍需進行大量的實驗及臨床研究。本次觀察采選病例地域有限，在下一步研究中擬對不同民族、地區(qū)的乳腺癌患者進行分型觀察，為BMP-6的臨床應(yīng)用提供參考。

作者貢獻(xiàn)：丁梅進行試驗設(shè)計與實施、撰寫論文、成文并對文章負(fù)責(zé)；王增輝、楊艷玲、馬振玲、李宗富、李潤華進行試驗實施、評估、資料收集；胡芬進行質(zhì)量控制及審校。

本文無利益沖突。

參考文獻(xiàn)

[1]Wang F，Li SJ，Weng J，et al.Research on the relationship between the subtypes of breast cancer and breast cancer susceptibility expression[J].International Journal of Immunology，2014，37(4)：349-351.(in Chinese)

汪菲，李嗣杰，甕潔，等.乳腺癌易感基因1的表達(dá)與乳腺癌亞型關(guān)系的實驗研究[J].國際免疫學(xué)雜志，2014，37(4)：349-351.

[2]張少華，江澤飛.2011年St.Gallen國際乳腺癌治療專家共識相關(guān)問題解讀[J].中國實用外科雜志，2011，31(10)：918-919.

[3]Ribatti D，Mangialardi G，Vacca A.Stephen Paget and the ′seed and soil′ theory of metastatic dissemination[J].Clinical and Experimental Medicine，2006，6(4)：145-149.

[4]荀建軍，賈志峰，馮建剛.BMP-2表達(dá)與乳腺癌骨轉(zhuǎn)移的關(guān)系[J].山東醫(yī)藥，2011，51(22)：2789-2793.

[5]Jia P，Xu YJ，Qian ZM.Recent advances in the relationship between BMP-6 and iron-overload osteoporosis[J].Chinese Journal of Endocrinology and Metabolism，2011，27(2)：905-908.(in Chinese)

賈鵬，徐又佳，錢忠明.骨形態(tài)生發(fā)蛋白6和鐵超載骨質(zhì)疏松關(guān)系的最新進展[J].中華內(nèi)分泌代謝雜志，2011，27(2)：905-908.

[6]王喜艷，徐邦生，高銀峰，等.BMP-6對卵巢功能和生殖能力作用的研究進展[J].生殖與避孕，2011，31(9)：2687-2690.

[7]中華人民共和國衛(wèi)生部.WS 338-2011 乳腺癌診斷[S].2011.

[8]陳淑玲，王庭槐.雌激素信號途徑與血管內(nèi)皮生長因子信號途徑的交互作用介導(dǎo)乳腺癌耐藥性[J].生理科學(xué)進展，2013，44(2)：887-890.

[9]Liu YH，Jiang SQ，Zhang JS.Role of estrogen receptor-related receptors in breast cancer：a review of recent studies[J].Journal of Environment and Health，2014，31(8)：2687-2690.(in Chinese)

劉英華，姜淑卿，張靜姝.雌激素相關(guān)受體與乳腺癌關(guān)系研究進展[J].環(huán)境與健康雜志，2014，31(8)：2687-2690.

[10]米東.PTHrP和BMP-6在乳腺癌中的表達(dá)機制研究——hBMP-6在畢赤酵母中的分泌表達(dá)[D].天津：南開大學(xué)，2010.

[11]Yang JH，Zhao L，Yang S，et al.Expression of recombinant human BMP-6 in escherichia coli and its purification and bioassay in vitro[J].Chinese Journal of Biotechnology，2003，19(5)：556-559.(in Chinese)

陽菊華，趙麗，楊爽，等.重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-6的表達(dá)、純化及其活性分析[J].生物工程學(xué)報，2003，19(5)：556-559.

[12]Hao L，Yu RS，Cui F，et al.Breast cancer subtypes based on ER/PR and Her2 expression：comparison of mr imaging features[J].National Medical Journal of China，2013，93(11)：881-886.(in Chinese)

郝亮，余日勝，崔鳳，等.雌激素受體、孕激素受體和人類上皮因子受體2表達(dá)的乳腺癌亞型的MRI表現(xiàn)特征分析對照研究[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，2013，93(11)：881-886.

[13]Wach S，Schirmacher P，Protschka M，et al.Overexpression of bone morphogenetic protein-6(BMP-6)in murine epidermis suppresses skin rumor formation by induction of apoptosis and downregulation of fos/jun family members[J].Oncogene，2001，20(53)：7761-7769.

[14]張磊.雌激素對乳腺癌中骨形態(tài)發(fā)生蛋白-6的表達(dá)影響[D].天津：南開大學(xué)，2008.

[15]Liu G，Lian WJ，Zhou HY，et al.Expression and clinical significance of bone morphogenetic protein 6 in human breast cancer[J].Journal of Sichuan University(Medical Science Edition)，2014，45(2)：249-253.(in Chinese)

劉更，連文靜，周鴻鷹，等.BMP6在乳腺癌組織的表達(dá)及意義[J].四川大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2014，45(2)：249-253.

[16]張明.BMP6在乳腺癌中的表達(dá)調(diào)控及CyclinD1翻譯后調(diào)控Runx3的分子機制[D].天津：南開大學(xué)，2008.

[17]王兆奇.人乳腺癌細(xì)胞MCF-7中BMP-6/TGF-β對δEF1啟動子活性調(diào)控的研究[D].天津：南開大學(xué)，2008.

[18]Zhang LH，Peng YH，Zha ZQ，et al.The analysis of breast cancer molecular typing for time and location of distant metastasis[J].Chinese Journal of Clinicians(Electronic Edition)，2012，6(11)：2911-2914.(in Chinese)

章樂虹，彭艷華，查中青，等.乳腺癌分子分型與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移時間及部位的分析[J].中華臨床醫(yī)師雜志：電子版，2012，6(11)：2911-2914.

[19]Sugiura K，Su YQ，Eppig JJ.Does bone morphogenetic protein 6(BMP6) affect female fertility in the mouse？[J].Biol Reprod，2010，83(6)：997-1004.

[20]王川.乳腺癌MCF-7細(xì)胞中BMP-6通過HO-1調(diào)控MMP-9表達(dá)的機制研究[D].天津：南開大學(xué)，2011.

[21]Frota IM，Leit?o CC，Costa JJ，et al.Levels of BMP-6 mRNA in goat ovarian follicles and in vitro effects of BMP-6 on secondary follicle development[J].Zygote，2013，21(3)：270-278.

(本文編輯：賈萌萌)

Clinical Significance of the Expression of Bone Morphogenetic Proteins 6 in Different Types of Breast Cancer

DINGMei，HUFen，WANGZeng-hui，etal.

TangshanXieheHospital，Tangshan063000，China

【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression of bone morphogenetic proteins 6(BMP-6)of different types of breast cancer and its relation with clinical pathological characteristics.MethodsFrom January 2013 to March 2015，we enrolled 426 females patients who were diagnosed with breast cancer by surgery and pathology in the Department of General Surgery of Tangshan Xiehe Hospital.Among these patients，there were 149 Luminal A patients，97 Luminal B patients，72 Her-2 positive patients and 108 Basal-like patients.Real-time fluorescent quantitative PCR was adopted to detect the mRNA expression of BMP-6 of different molecular types，and immunohistochemistry assay was used to detect the protein expression of BMP-6 of different molecular types.Comparison of clinical features among different molecular types of breast cancer patients was made.ResultsSignificant differences were noted in BMP-6 mRNA expression level among different molecular types of cancer tissues(P<0.05)；BMP-6 mRNA level of Basal-like patients was lower than that of Luminal A patients(P<0.05).Different molecular types of cancer tissues all had lower BMP-6 mRNA level than para-cinoma tissues(P<0.01).Different molecular types of cancer tissues were significantly different in the protein expression level of BMP-6(χ2=19.01，P=0.02)；the negative rate(-)of Luminal A type was lower than that of Basal-like type(χ2=5.17，P=0.002)；the positive(+++) rate of Luminal A was higher than Basal-like type(χ2=8.84，P<0.001).Different molecular types of patients were not significantly different in the lymphatic metastasis rate(P>0.05)，and were significantly different in tumor size and viscera metastasis rate(P<0.01)；Basal-like patients had higher viscera metastasis rate than Luminal A patients(χ2=14.71，P<0.001).ConclusionDifferences exist in the expression of BMP-6 among breast cancer tissues of different molecular types，so different BMP-6 treatment regimens can be adopted for different types of breast cancer patients in clinical practice.

【Key words】Breast neoplasms；Bone morphogenetic protein 6；Molecular typing

(收稿日期：2015-07-06；修回日期：2015-12-20)

【中圖分類號】R 737.9

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A

doi：10.3969/j.issn.1007-9572.2016.11.016

通信作者：胡芬，063000河北省唐山市，華北理工大學(xué)生命科學(xué)院；E-mail：ihufen@126.com

基金項目：國家自然科學(xué)基金資助項目(81302323)——BMP-6調(diào)控mmp表達(dá)抑制乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的功能和機理研究(2013-57-0352)；河北省自然科學(xué)基金資助項目(c2014209140)——BMP-6調(diào)控mmp-1表達(dá)抑制乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的功能和機制研究