摘 要：本實驗旨在比較研究苦參堿與氧化苦參堿的體外抗腫瘤活性，為抗腫瘤復(fù)方研究中兩種藥物的配比具有一定的指導(dǎo)意義。

關(guān)鍵詞：苦參堿 氧化苦參堿 細(xì)胞增殖

1、實驗材料

1.1 藥品與試劑

苦參堿、氧化苦參堿無菌注射用水1ml加入10mg苦參堿粉末中使其溶解，配成1mg/ml母液，給藥前以RPMI1640培養(yǎng)液稀釋到所需濃度。噻唑藍(lán)（MTT）Sigma公司產(chǎn)品，使用前用PBS配制出5mg/ml溶液。1640培養(yǎng)粉為Gibco公司，二甲基亞砜為Amresco公司產(chǎn)品。

1.2 細(xì)胞株

人肝癌細(xì)胞（HEPG-2）（哈爾濱商業(yè)大學(xué)藥學(xué)院保存），在含有10%滅活胎牛血清的1640培養(yǎng)液中，37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，2-3天傳代一次。

2、實驗方法

3、結(jié)果

3.1 MTT法檢測細(xì)胞存活率?？鄥A與氧化苦參堿對人肝癌細(xì)胞（HepG2）有明顯的抑制作用，并且細(xì)胞的存活率均隨著苦參堿與氧化苦參堿濃度的增加而下降，呈現(xiàn)藥物劑量依賴性，苦參堿和氧化苦參堿對人肝癌細(xì)胞（HepG2）半數(shù)抑制濃度IC50值分別為988.51ug/ml、774.11ug/ml，后者的作用大于前者。

3.2 生長曲線檢測細(xì)胞生長曲線。本課題采用苦參堿與氧化苦參堿給藥濃度為500μg/ml，依據(jù)是前期MTT的實驗數(shù)據(jù)，在苦參堿與氧化苦參堿濃度為500μg/ml時已經(jīng)可以抑制幾種細(xì)胞的生長。加藥后的第一天開始細(xì)胞增殖受到抑制，生長曲線實驗結(jié)果顯示苦參堿與氧化苦參堿對人肝癌細(xì)胞（HepG2）均有抑制作用。

3.3 HE染色?？鄥A與氧化苦參堿對人肝癌細(xì)胞（HepG2）出現(xiàn)不同程度的形態(tài)學(xué)改變，一些細(xì)胞變圓長觸角消失、體積縮小、胞質(zhì)凝集、顏色變深等現(xiàn)象，后者作用大于前者。

3.4 Hoechst 33258熒光染色苦參堿與氧化苦參堿給藥后的細(xì)胞，細(xì)胞數(shù)量減少，細(xì)胞之間連接減少，細(xì)胞皺縮，折光度上升，邊緣不規(guī)則。相比較之下，氧化苦參堿比苦參堿作用較強。

3.5 透射電鏡。人肝癌細(xì)胞HepG2 苦參堿組細(xì)胞表面微絨毛明顯減少，可觀測到多數(shù)細(xì)胞呈早期凋亡狀態(tài)；氧化苦參堿組細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變較苦參堿組明顯，個別細(xì)胞呈現(xiàn)出中期凋亡狀態(tài)；苦參堿、氧化苦參堿聯(lián)合組細(xì)胞核裂解，核內(nèi)染色質(zhì)形成顆粒狀，出現(xiàn)明顯的凋亡小體，凋亡特征明顯，中晚期凋亡細(xì)胞較多。

4、分析與討論生長曲線法通過比較得出苦參堿、氧化苦參堿對肝癌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞增殖有影響，增殖受到明顯抑制。HE染色實驗中，人肝癌細(xì)胞HepG2光鏡下可見細(xì)胞體積縮小，細(xì)胞形態(tài)改變。且氧化苦參堿組比苦參堿組的形態(tài)學(xué)改變明顯。透射電鏡實驗結(jié)果從微觀角度證明了苦參堿、氧化苦參堿及苦參堿、氧化苦參堿聯(lián)合對人肝癌細(xì)胞HepG2促凋亡作用。